BIOMARCADORES PARA EVALUAR LA FUNCIÓN HEPÁTICA.

Un método para evaluar la función hepática en un individuo, tal método comprende determinar (a) el nivel combinado de dimetilarginina asimétrica (ADMA) y dimetilarginina simétrica (SDMA),

y (b) la relación de albúmina modificada por isquemia (IMA): albúmina (IMAR) en el individuo y donde el método se lleva a cabo en una muestra del individuo, de este modo se evalúa la función hepática en el individuo

Campo de la invención

La invención se refiere a un método para evaluar la función hepática, en particular para predecir la evolución clínica de la enfermedad hepática.

Antecedentes de la invención 5

Las estadísticas del NIH sugieren que hay más de 3000 pacientes con insuficiencia hepática fulminante por año en los Estados Unidos. Si estos datos se extrapolan para incorporar la creciente carga de enfermedad hepática viral y alcohólica en Occidente y también en el mundo subdesarrollado, el número de casos supera millones por año en todo el mundo.

Con la creciente incidencia global de enfermedad hepática de fase terminal secundaria a 10 lesión por alcohol, la hepatitis viral y la entidad más recientemente identificada de enfermedad hepática grasa no alcohólica, y una falta de aumento significativo del conjunto de donantes de trasplante hepático, ha aumentado marcadamente la necesidad de identificar los individuos con rápido deterioro de la función hepática que requieren tratamientos de soporte y de intervención.

Mookerjee et al (Hepatology (2005) 42: Suppl. 1, Abstract 755) informan una correlación entre 15 los niveles plasmáticos combinados de las metilargininas ADMA y SDMA y la mortalidad a 28 días en los pacientes cirróticos con hepatitis alcohólica (AH).

Compendio de la invención

Los inventores examinaron pacientes con cirrosis alcohólica descompensada y han establecido que los niveles plasmáticos de dos metilargininas en el plasma, dimetilarginina asimétrica 20 (ADMA) y su estereoisómero de dimetilarginina simétrica (SDMA) son significativamente superiores en los pacientes con hepatitis alcohólica y en los no sobrevivientes.

La suma combinada del ADMA y SDMA plasmáticos, denominada puntuación de dimetilarginina (DAS), fue también un mejor pronosticador de la evolución clínica en los pacientes cirróticos alcohólicos que otros sistemas de puntuación biológica conocidos o dimetilarginina sola. 25

Por consiguiente, los niveles elevados de metilargininas representan marcadores biológicos importantes de la evolución nociva en los pacientes con hepatitis alcohólica, en los que también existe una alta incidencia de falla orgánica y sepsis. Estos marcadores se pueden usar como un pronosticador confiable de la progresión y la evolución en los pacientes con enfermedad hepática, los que se someten a trasplante hepático y en los pacientes con falla multiorgánica y sepsis. 30

Los inventores han establecido además que, en los pacientes con enfermedad hepática alcohólica, los pacientes que mueren tienen una relación de albúmina modificada por isquemia (IMA): albúmina (o "IMAR") significativamente aumentada.

A pesar de que los niveles de metilarginina, DAS e IMAR son indicadores de marcadores para la progresión y evolución de la enfermedad, los inventores han hallado que la combinación de la 35 medición de metilarginina con IMAR como biomarcador combinado mejora la utilidad predictiva de mala evolución y, en consecuencia, que tal combinación proporciona una utilidad predictiva para evaluar el riesgo de mortalidad. En particular, los inventores han hallado que la combinación del DAS con IMAR como un biomarcador combinado ("DASIMAR") proporciona una utilidad predictiva excelente para evaluar el riesgo de mortalidad. 40

De acuerdo con la presente invención, en consecuencia se proporciona un método para evaluar la función hepática en un individuo, tal método comprende determinar el nivel combinado de ADMA y SDMA y la relación de albúmina modificada por isquemia (IMA): albúmina (IMAR) en el individuo, donde el método se lleva a cabo en una muestra del individuo.

Breve descripción de los dibujos 45

La Figura 1 muestra niveles de ADMA en pacientes y voluntarios sanos: (a) Pacientes con cirrosis con hepatitis alcohólica sobreañadida (AH+C+) tienen valores significativamente superiores de ADMA (P<0,001) en comparación con pacientes con cirrosis sola (AH- C+). Todos los pacientes cirróticos tenían valores significativamente superiores de ADMA en comparación con voluntarios normales (P<0,001). (b) Los sobrevivientes de los pacientes hospitalizados con cirrosis 50 descompensada (n=39) tenían valores significativamente inferiores de ADMA que los que murieron (n=13); P<0,001. (c) Los sub-análisis de pacientes demostraron mayores niveles de ADMA en sobrevivientes AH+C+ (n=15) en comparación con sobrevivientes AH-C+ (n=24); P<0,01. Los niveles de ADMA fueron superiores en pacientes AH+C+ que murieron (n=12) en comparación con sobrevivientes AH+C+; P<0,05) 55

La Figura 2 muestra niveles de SDMA en pacientes y voluntarios sanos: (a) los pacientes AH+C+ tienen niveles de SDMA significativamente superiores (P<0,001) en comparación con pacientes AH-C+. No hubo diferencia en los niveles de SDMA entre los pacientes AH-C+ y voluntarios sanos. (b) Los sobrevivientes de los pacientes hospitalizados con cirrosis descompensada (n=39) tenían valores significativamente inferiores de SDMA que los que murieron (n=13); P<0,001. (c) Los 5 sub-análisis de pacientes demostraron mayores niveles de SDMA en los pacientes AH+C+ que murieron (n=12) en comparación con sobrevivientes AH+C+; P<0,01. Los sobrevivientes AH+C+ (n=15) también tenían valores de SDMA superiores en comparación con sobrevivientes AH-C+ (cirrótico no inflamatorio) (n=24); P<0,01.

La Figura 3 muestra ADMA en comparación con SDMA: Un gráfico de ADMA versus SDMA 10 en los pacientes AH+C+ demuestra que en el valor límite para SDMA de 0,9 µmol/L derivado de las curvas receptor-operador, el número de muertes predichas por ADMA mediante el uso de un valor límite de 0,65 µmol/L, no está representado (indicado por el área sombreada), lo que sugiere un beneficio potencial de una puntuación combinada de ADMA+SDMA (DAS) para determinar la evolución. 15

La Figura 4 muestra el porcentaje de cambio de la puntuación de dimetilarginina (DAS) durante el curso de la admisión en sobrevivientes y no sobrevivientes. Esta Figura muestra el aumento del porcentaje del valor DAS [ADMA+SDMA] en los pacientes AH+C+ no sobrevivientes (n=12) en comparación con los valores de 18 pacientes sobrevivientes, que incluyen 6 pacientes AH+C+, en los que hubo una disminución neta en el valor de DAS (P<0,01). 20

La Figura 5 muestra curvas de supervivencia de Kaplan-Meier de la puntuación de dimetilarginina (DAS) de admisión: La Figura muestra un análisis de supervivencia de Kaplan-Meier que compara la mortalidad hospitalaria en todos los pacientes cirróticos alcohólicos estudiados, sobre la base del valor de admisión de DAS < 1,23 o > 1,23 (P<0,0005). Una puntuación de DAS mayor aumenta significativamente el riesgo de mortalidad hospitalaria. 25

La Figura 6 muestra curvas receptor-operador calculadas para las puntuaciones pronósticas-Función Discriminante (DF), puntuación de Child-Pugh, Modelo para la Enfermedad Hepática de Fase Terminal (MELD) y la Puntuación de Dimetilarginina (DAS) en pacientes con hepatitis alcohólica (AH+C+): Las curvas ROC para DF, Child-Pugh, MELD y DAS se muestran con el área bajo la curva (AUROC) listado. Es evidente a partir de estas Figuras que en el subgrupo de pacientes AH+C+, el 30 valor de DAS proporciona el factor pronóstico más confiable de mortalidad (AUROC =0,84), mediante el uso de un límite de DAS de 1,52; esto da una sensibilidad de 73% y una especificidad de 83%.

La Figura 7 muestra la expresión de proteína DDAH II y PRMT-1: se muestran transferencias Western representativas para la expresión de dimetilarginina-dimetilaminohidrolasa-II (DDAH-II) y proteína-arginina-metiltransferasa-1 (PRMT-1) en los pacientes AH+C+ y AH-C+ estudiados, junto con 35 sus correspondientes transferencias de proteína α-Tubulina, para controlar la carga del gel. Una cuantificación de las densidades de DDAH II y PRMT-1 sobre las transferencias Western de todas las biopsias de pacientes evaluados se representa en las barras de columna para pacientes AH+C+ y AH-C+, que han sido corregidas para una expresión de α-Tubulina. Los pacientes AH+C+ tienen una expresión de DDAH II significativamente menor (P<0,01) y la expresión de PRMT-1 significativamente 40 superior (P<0,01).

La Figura 8 muestra que los pacientes cirróticos alcohólicos descompensados que mueren tienen una relación IMA/A1b significativamente aumentada, en comparación con los sobrevivientes, que probablemente refleja el empeoramiento de...

1. Un método para evaluar la función hepática en un individuo, tal método comprende determinar (a) el nivel combinado de dimetilarginina asimétrica (ADMA) y dimetilarginina simétrica (SDMA), y (b) la relación de albúmina modificada por isquemia (IMA): albúmina (IMAR) en el individuo y donde el método se lleva a cabo en una muestra del individuo, de este modo se evalúa la función 5 hepática en el individuo.

2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, donde el método es para controlar la progresión de la enfermedad hepática en el individuo, lo que predecir la evolución de la enfermedad hepática en el individuo, evaluar la función hepática en postrasplante hepático, evaluar la función hepática en la lesión de reperfusión en un injerto postrasplante hepático o evaluar la función hepática 10 en pacientes que desarrollan falla multiorgánica y/o sepsis.

3. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el individuo sufre de insuficiencia hepática.

4. Un método de acuerdo con la reivindicación 3, donde el individuo sufre de insuficiencia hepática crónica, insuficiencia hepática crónica en fase aguda o insuficiencia hepática 15 aguda.

5. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el individuo sufre de enfermedad hepática alcohólica.

6. Un método de acuerdo con la reivindicación 5, donde el individuo sufre de cirrosis o cirrosis y/o hepatitis alcohólica. 20

7. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde un aumento en el nivel combinado de ADMA y SDMA, en comparación con el nivel combinado de ADMA y SDMA en un individuo que no sufre de la enfermedad hepática o en un individuo que es un sobreviviente de la enfermedad hepática, es indicador de un aumento de riesgo de mortalidad en el individuo. 25

8. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que un aumento en IMAR, en comparación con IMAR en un individuo que no sufre de la enfermedad hepática o en un individuo que es un sobreviviente de la enfermedad hepática, es indicativo de un aumento de riesgo de mortalidad en el individuo.

9. Un método de acuerdo con las reivindicaciones 7 o 8, en el que un aumento en el 30 nivel combinado de ADMA y SDMA y un aumento en IMAR, en comparación con un individuo que no sufre de la enfermedad hepática o en un individuo que es un sobreviviente de la enfermedad hepática, es indicativo de un aumento de riesgo de mortalidad en el individuo.

10. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde se determinan puntuaciones adicionales del pronóstico de la enfermedad hepática. 35

11. Un método de acuerdo con la reivindicación 10, donde una o más puntuaciones adicionales del pronóstico de la enfermedad hepática es uno o más del sistema de puntuación de Child-Pugh, Criterios de West Haven, Escala de Coma de Glasgow, sistema de puntuación de Child-Pugh modificado, SOFA, MELD o APACHE II.

12. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la 40 muestra es una muestra de plasma o una muestra de tejido hepático.