PROCEDIMIENTO PARA ENSAYAR LA SEPTICEMIA EN SERES HUMANOS.

Procedimiento para ensayar la septicemia en seres humanos Campo de la invención La presente invención se refiere a un procedimiento de predicción y/o diagnóstico de una infección sistémica en un ser humano, en particular para la predicción del desarrollo de septicemia, basado en el nivel de litostatina/proteína regeneradora (pancreatic stone protein / regenerating protein (PSP/reg)) en fluidos corporales, y a un kit de ensayo. Antecedentes de la invención Las respuestas sistémicas ante traumatismos graves incluyen varios parámetros que afectan a la inmunidad innata, reacciones inflamatorias y actividades celulares. Las pacientes con traumatismos graves pueden tener una resolución benigna sin infección, mientras que otros padecen infecciones o septicemias. La septicemia está asociada con un fallo orgánico múltiple y una elevada mortalidad. Entre los marcadores usados más habitualmente para el diagnóstico de la septicemia están los recuentos leucocitarios, la proteína C reactiva y la procalcitonina. Las últimas son dos proteínas altamente inducidas tras un traumatismo, aún sin ninguna función conocida. Además, se emplean citocinas tales como IL-6, IL-8 e IL-18 para monitorizar pacientes. Sin embargo, ninguno de los marcadores mencionados anteriormente sirve como indicador predictivo de infecciones, incluyendo septicemia, por lo que el tratamiento puede rezagarse con respecto al comienzo de la septicemia. En experimentos piloto con animales se ha demostrado que se induce una proteína pancreática debido al estrés de manipulación, incluso en ausencia de lesión en el tejido pancreático (R. Graf y col., J Surg Res 2002, 195: 136-144). Esta proteína, la litostatina/proteína regeneradora (PSP/reg), pertenece a una familia de proteínas de unión a lectina. En condiciones de pancreatitis aguda o crónica, está muy regulada por incremento y puede aparecer en suero. Dado que la regulación de esta proteína no está puramente restringida a la secreción inducida por la dieta como otros cimógenos, puede aparecer elevada en otras dolencias, por ejemplo, durante la pancreatitis. Hasta ahora, la proteína se ha estudiado predominantemente en el páncreas. También se sintetiza en las células de Paneth del intestino delgado y en las células fúndicas del estómago. La función de la PSP/reg aún es muy debatida, pero generalmente se asume que está implicada en promover la proliferación celular durante procesos regenerativos (Y. Kinoshita y col., J, Gastroenterot 2004, 39: 507-513). Se han realizado numerosos esfuerzos para establecer la PSP/reg como un marcador de enfermedad. Hasta ahora, 35 no ha sido posible establecer una correlación entre los valores séricos y una entidad patológica específica, dado que los niveles séricos están elevados en diversas enfermedades gastrointestinales (Y. Satomura y col., J Gastroenterol 1995, 30: 643-650). Resumen de la invención La presente invención se refiere a un procedimiento de predicción y/o diagnóstico de una infección sistémica en seres humanos, en particular para la predicción del desarrollo de septicemia, en el que se determina el nivel de litostatina/proteína regeneradora (PSP/reg) en una muestra de fluidos corporales, y un nivel alto es indicativo del desarrollo de septicemia en etapas tempranas la enfermedad. Además, la presente invención se refiere a un procedimiento de determinación de los niveles de PSP/reg en fluidos corporales, y a un kit de partes para dicho procedimiento. Breve descripción de las Figuras 50 Figura 1: determinación de los valores de la proteína C reactiva (C-reactive protein, CRP) en el suero de pacientes tras la admisión en el hospital con un traumatismo grave. Los pacientes se categorizaron retrospectivamente: sin infección (recuadros blancos, n = 14), pacientes con infección (recuadros rayados, n = 22), pacientes con septicemia (recuadros negros, n = 27). Los valores de la CRP (log10 ng/mL) de los tres grupos están representados como diagramas en recuadros con la media y el intervalo de 55 confianza al 95%. d = días después del traumatismo. El análisis estadístico se realizó usando un análisis multivariado; p = significación, * = valores de p para septicemia frente a ninguna infección.   Figura 2: determinación de los valores de IL-6 en el suero de pacientes tras la admisión en el hospital con un traumatismo grave. Categorización de pacientes y presentación de los valores de IL-6 (log10 pg/mL) en un diagrama de recuadros como para los valores de CRP de la Figura 1. Figura 3: determinación de procalcitonina (PCT) en el suero de pacientes tras la admisión en el hospital con un traumatismo grave. Categorización de pacientes y presentación de los valores de PCT (log10 ng/mL) en un diagrama en recuadros como para los valores de CRP de la Figura 1. 2 Figura 4: determinación de litostatina/proteína regeneradora (PSP) Perfil temporal de PSP/reg tras un traumatismo en el día 0. Todos los valores se combinaron para cada punto temporal. C (= control) indica el valor para sujetos sanos. d = días después del traumatismo. Figura 5: determinación de los valores de PSP/reg en el suero de pacientes tras la admisión en el hospital con un traumatismo grave. Figura 5A: categorización de pacientes y media de los recuadros blancos, rayados y negros como para los valores de CRP de la Figura 1. Los valores de PSP/reg (ng/mL) de los tres grupos están representados como la media ± SEM. d = días después del traumatismo Figura 5B: categorización de pacientes y presentación de los valores de PSP/reg (ng/mL) en un diagrama en recuadros como para los valores de CRP de la Figura 1. p = significación, * = valores de p para septicemia frente a ninguna infección. Descripción detallada de la invención La presente invención se refiere a un procedimiento de predicción y/o diagnóstico de una infección sistémica en seres humanos, en particular para la predicción del desarrollo de septicemia, en el que se determina el nivel de litostatina/proteína regeneradora (PSP/reg) en una muestra de fluidos corporales, por ejemplo, suero, y un nivel alto es indicativo del desarrollo de septicemia en etapas tempranas la enfermedad. Otros fluidos corporales distintos al suero, útiles para la determinación de los niveles de PSP/reg son, por ejemplo, sangre completa, orina, esputo, líquido cefalorraquídeo, fluido lagrimal, sudor, leche o extractos de tejidos sólidos o de materia fecal. El nivel de PSP/reg indicativo del desarrollo de septicemia postraumática depende del fluido corporal elegido para la determinación. Para el suero sanguíneo, este nivel es de 60 a 80 ng/ml en los días 3, 4 ó 5. Por lo tanto, más específicamente, la invención se refiere a un procedimiento de predicción y/o diagnóstico del desarrollo de septicemia, en el que se determina el nivel de litostatina/proteína regeneradora (PSP/reg) en suero, y un nivel de 60 ng/ml o más, en particular un nivel de 80 ng/ml o más, en los días 3, 4 ó 5 es indicativo del desarrollo de septicemia. Puede usarse cualquier procedimiento conocido para la determinación del nivel de PSP/reg en fluidos corporales. Algunos procedimientos considerados son, por ejemplo, ELISA, RIA, EIA, espectrometría de masas o análisis por micromatriz. Dichos procedimientos, cuando se usan para el diagnóstico de una infección sistémica, por ejemplo, septicemia, son un objeto adicional de la invención. Un procedimiento preferido para la determinación de PSP/reg en fluidos corporales humanos, por ejemplo, suero, es un ELISA. En una forma de realización de la invención, el ELISA de PSP/reg consiste en una matriz en sándwich: se recubre una placa de microtitulación convencional con un tipo de anticuerpo ("primer" anticuerpo), por ejemplo, un anticuerpo policlonal de cobaya, dirigido contra la PSP/reg. Entonces las placas se bloquean y se carga la muestra o el estándar. Después de la incubación se aplica un tipo diferente de anticuerpo ("segundo" anticuerpo) contra la PSP/reg, por ejemplo, un anticuerpo policlonal de conejo. Entonces se añade un tercer anticuerpo que detecta el tipo particular del "segundo" anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo anti-conejo, conjugado con un marcador adecuado, por ejemplo, una enzima para su detección cromogénica. Finalmente la placa se desarrolla con un sustrato para el marcador, con objeto de detectar y cuantificar el marcador, siendo una medida de la presencia y la cantidad de PSP/reg. Si el marcador es una enzima para su detección cromogénica, el sustrato es un sustrato generador de color de la enzima conjugada. Entonces se detecta el color de la reacción en un lector de microplacas y se compara con los estándares. 50 Los pares de anticuerpos adecuados ("primer" y "segundo" anticuerpo) son cualquier combinación de cobaya, rata, ratón, conejo, cabra, gallina, burro o caballo. Se prefieren los anticuerpos policlonales,... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de predicción y/o diagnóstico de una infección sistémica en seres humanos, en el que se determina el nivel de litostatina/proteína regeneradora (PSP/reg) en una muestra de fluidos corporales, y un nivel alto es indicativo del desarrollo de una septicemia. 2. El procedimiento de la reivindicación 1 en el que se determina el nivel de PSP/reg en suero. 3. El procedimiento de la reivindicación 2 en el que el alto nivel indicativo del desarrollo de una septicemia postraumática es 60 ng/ml. 4. El procedimiento de la reivindicación 2 en el que el alto nivel indicativo del desarrollo de una septicemia es 80 ng/ml en los días 3, 4 ó 5 después del traumatismo. 15 5. El procedimiento de la reivindicación 1 en el que el nivel de PSP/reg se determina mediante ELISA, RIA, EIA, espectrometría de masas o análisis por micromatriz.   6. El procedimiento de la reivindicación 1 en el que el nivel de PSP/reg se determina mediante ELISA en sándwich, en el que las placas de microtitulación están recubiertas con un tipo de anticuerpo dirigido contra la PSP/reg, entonces las placas se bloquean y se carga la muestra o el estándar, se aplica un segundo tipo de anticuerpo contra la PSP/reg, entonces se añade un tercer tipo de anticuerpo que detecta el tipo particular del segundo anticuerpo conjugado con un marcador adecuado, y se usa el marcador para cuantificar la cantidad de PSP/reg. 7. El procedimiento de la reivindicación 6 en el que el marcador del ELISA en sándwich es una enzima para su detección cromogénica.   11   12   13   14     16