MÉTODO PARA LA DETECCIÓN DE DAÑO RENAL.

Método para la detección de daño renalLa invención se refiere a un método para determinar la presencia de daño renal en un individuo así como un método para predecir la progresión de dicho daño renal por medio de la detección de una o varias proteínas que se seleccionan de la lista que comprende Reg3B,

fetuina B, Ras-related GTP-binding protein A, inhibidor de la proteína serina A3L, subunidad 1 de COP9, subunidad gamma de la ATP sintasa, gelsolina, ribonucleasa UK114, aminoacilasa 1A, alfa-enolasa, queratina 5, parvalbúmina alfa, ribonucleasa 4 o inhibidor de la proteína serina A3K. El daño renal puede ser un fallo renal agudo. Dichas patologías renales pueden ser causadas por la administración de un agente nefrotóxico, donde el agente nefrotóxico puede ser un antibiótico aminoglucósido como por ejemplo la gentamicina

Método para la detección de daño renal.

La invención se refiere a un método para determinar la presencia de daño renal en un individuo así como un método para predecir la progresión de dicho daño renal por medio de la detección de una o varias proteínas que se seleccionan de la lista que comprende Reg3B, fetuina B, Ras-related GTP-binding protein A, inhibidor de la proteína serina A3L, subunidad 1 de COP9, subunidad gamma de la ATP sintasa, gelsolina, ribonucleasa UK114, aminoacilasa 1A, alfaenolasa, queratina 5, parvalbúmina alfa, ribonucleasa 4 o inhibidor de la proteína serina A3K. El daño renal puede ser un fallo renal agudo. Dichas patologías renales pueden ser causadas por la administración de un agente nefrotóxico, donde el agente nefrotóxico puede ser un antibiótico aminoglucósido como por ejemplo la gentamicina.

Estado de la técnica anterior Los antibióticos aminoglucósidos se usan ampliamente contra infecciones bacterianas. Concretamente, la gentamicina se usa contra las infecciones Gram negativas. Su eficacia y uso terapéutico están gravemente obstaculizados por su toxicidad, que se produce principalmente a nivel renal y auditivo (Martínez-Salgado C, López-Hernández FJ y López-Novoa JM. 2007, Toxicol Appl Pharmacol., 223: 86-98) . La nefrotoxicidad inducida por gentamicina aparece en el 10-25% de los tratamientos (Leehey DJ et al., 1993, J. Am. Soc. Nephrol., 4: 81-90) . Se caracteriza principalmente por daño tubular (Nakakuki M et al., 1996, Can J Physiol Pharmacol., 74: 104-111) , pero también podrían aparecer alteraciones glomerulares (Martínez-Salgado C, López-Hernández FJ y López-Novoa JM. 2007, Toxicol Appl Pharmacol., 223: 86-98) y vasculares (Goto T et al., 2004, Virchows Arch., 444: 362-74; Seçilmis MA, et al., 2005, Nephron Physiol., 100: 13-20) de forma dependiente de la dosis (Hishida A et al., 1994, Ren Fail., 16: 109116) . El daño tubular afecta principalmente al túbulo proximal en el que, dependiendo de la intensidad de la agresión, la lesión puede oscilar desde un descamado epitelial leve hasta una necrosis tubular más grave (Nakakuki et al., 1996. Can J Physiol Pharmacol., 74: 104-111) . Las lesiones tubulares dan como resultado un desequilibrio en la capacidad de resorción que activa la retroalimentación tubuloglomerular, que reduce drásticamente la tasa de filtración glomerular (TFG) para evitar una pérdida masiva de fluido. Finalmente, la gentamicina reduce el flujo sanguíneo renal (FSR) por contracción tanto de las arterias preglomerulares, como de las arteriolas aferentes y eferentes (Klotman et al., 1983. Kidney Int., 24: 638-643) . Como consecuencia de una FSR menor, la TFG se deteriora. Un menor FSR también contribuye a la necrosis tisular, especialmente en el interior de la zona cortical (Cheung et al, 2008. Drugs Aging, 25: 455-476) .

Dependiendo de la edad, sexo, función renal anterior, duración del tratamiento, pauta terapéutica, nivel de hidratación y otros estados concomitantes (por ejemplo., embarazo o hipotiroidismo) , la nefrotoxicidad asociada con gentamicina puede a veces llegar al fallo renal agudo.

El fallo real agudo es un tipo de daño renal en el que se manifiesta una pérdida de la función excretora del riñón, suficiente para impedir la limpieza de la sangre de productos de deshecho y agua así como de mantener el balance electrolítico (Bellomo R, Kellum JA y Ronco C, 2007. Intensive Care Med., 33: 409-413) . El fallo renal agudo puede estar inducido por una amplia variedad de agresiones entre las que se incluyen fármacos, tóxicos químicos, hipoxia, obstrucción de las vías urinarias, infecciones y otros (Binswanger U, 1997. Kidney Blood Press Res., 20: 163) . Este tipo de daño renal representa una enorme sobrecarga humana y socioeconómica derivada de su elevada incidencia y tasa de mortalidad. Se estima que casi el 1% de ingresos hospitalarios están asociados con el fallo renal agudo, y aproximadamente el 2-7% de los pacientes hospitalizados eventualmente lo desarrollan. Más importante, la mortalidad entre los pacientes de un fallo renal agudo se mantiene remarcablemente elevada en aproximadamente un 50% de los casos.

En la práctica clínica, un fallo renal agudo se diagnostica cuando la disfunción renal produce síntomas que se pueden medir. Estos típicamente se basan en la determinación de los niveles de creatinina y urea Lo más habitual es que sus concentraciones en suero aumenten a medida que la TFG disminuye. Sin embargo, en ese estado en el que ya se observa aumento de los niveles séricos de urea y creatinina, el fallo renal agudo resulta difícil de tratar. Así, las tendencias actuales en el diagnóstico buscan detectar eventos fisiopatológicos incipientes producidos en etapas tempranas, cuando el daño está menos extendido (Vaidya VS, Ferguson MA y Bonventre JV, 2008. Rev Pharmacol Toxicol., 48:463-493) . Entre estos, la medida de ciertas enzimas celulares presentes en la orina como consecuencia de la rotura de células tubulares es actualmente el procedimiento más refinado para una detección temprana del fallo renal agudo, que cursa con daño tubular. Estas enzimas incluyen N-acetil-D-glucosaminidasa (NAG) , pero también otras como lactato deshidrogenasa (DHL) , fosfatasa alcalina (ALP) o gammaglutamil transpeptidasa (GGT) . La mayor parte de estas enzimas tienen un valor moderado como marcadores urinarios tempranos y sensibles del fallo renal agudo, debido principalmente a problemas de estabilidad e inhibición por otros componentes de la orina (Vaidya VS, Ferguson MA y Bonventre JV, 2008. Rev Pharmacol Toxicol., 48: 463-493) . Marcadores tempranos de última generación incluyen, entre otros, la medida en la orina de la molécula de daño renal 1 (KIM-1) , o de la lipocalina asociada a la gelatinasa neutrófila (NGAL) (Vaidya y cols., 2008) .

Sin embargo, existen todavía aspectos susceptibles de mejora en el diagnostico del daño renal agudo. Uno de esos aspectos es el diagnóstico etiológico del daño, es decir, no solamente la detección precoz del daño, sino también de su causa. Este aspecto cobra especial importancia en situaciones clínicas en las que convergen diversos agentes potencialmente neurotóxicos en el mismo individuo al mismo tiempo, como por ejemplo diferentes fármacos potencialmente nocivos para los riñones. En estas circunstancias, cuando aparecen los primeros síntomas de nefrotoxicidad, es imposible saber con la tecnología diagnostica actual cual de los fármacos es el causante del daño, lo que impide sustituir solamente ese o cambiar sólo su régimen terapéutico sin alterar el de los otros fármacos. Entre los fármacos de este tipo se pueden destacar los antibióticos aminoglucósidos. De esta manera se conseguiría proporcionar La identificación de marcadores o colecciones de marcadores específicos de cada agente potencialmente neurotóxico permitiría realizar un tratamiento más racional, individualizado y específico de situaciones clínicas cotidianas como los tratamientos simultáneos que contienen dos o más fármacos potencialmente nefrotóxicos. Esto permitiría redirigir correctamente el tratamiento sustituyendo únicamente el fármaco dañino o volviendo a conformar su pauta terapéutica.

Explicación de la invención La invención se refiere a un método para determinar un daño renal en un individuo así como un método para predecir la progresión de dicho daño renal por medio de la detección de una o varias proteínas que se seleccionan de la lista que comprende Reg3B, fetuina B, Ras-related GTP-binding protein A, inhibidor de la proteína serina A3L, subunidad 1 de COP9, subunidad gamma de la ATP sintasa, gelsolina, ribonucleasa UK114, aminoacilasa 1A, alfaenolasa, queratina 5, parvalbúmina alfa, ribonucleasa 4 o inhibidor de la proteína serina A3K. El daño renal puede ser un fallo renal agudo. Dichas patologías renales pueden ser causadas por la administración de un agente nefrotóxico, donde el agente nefrotóxico puede ser un antibiótico aminoglucósido como por ejemplo la gentamicina.

La presente invención proporciona evidencias de que el daño renal o un fallo renal agudo inducido por ejemplo, pero sin limitarse, por gentamicina, está relacionado con un incremento en la excreción de cualquier proteína seleccionada de la lista mencionada en el párrafo anterior, o de cualquiera de sus combinaciones.

Por tanto, la presente invención proporciona herramientas para la detección de un daño renal o de un fallo renal agudo. Estas herramientas permiten la predicción de la progresión de un daño renal o de un fallo renal agudo, es decir, la supervisión de la progresión de dicha patología cuando la persona sea tratada con, por ejemplo,... [Seguir leyendo]

1. Método para determinar un daño renal, que comprende:

a. obtener una muestra biológica aislada de un individuo, y

b. detectar y/o cuantificar en la muestra obtenida en el paso (a) una proteína con al menos un 80% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 5.

2. Método según la reivindicación 1, donde se detecta y/o cuantifica la proteína SEQ ID NO: 5.

3. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde además comprende detectar y/o cuantificar en la muestra obtenida en el paso (a) una proteína con al menos un 60% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 1.

4. Método según la reivindicación 3, donde se detecta y/o cuantifica la proteína SEQ ID NO: 1.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde además comprende detectar y/o cuantificar en la muestra al menos una proteína, o cualquiera de sus combinaciones, seleccionada de la lista que comprende: -una proteína con al menos un 60% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 2, -una proteína con al menos un 80% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 3, 4, 6,

7, 8, 9, 10 u11, -una proteína con al menos un 90% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 12 a 14.

6. Método según la reivindicación 5, donde se detecta y/o cuantifica al menos una proteína, o cualquiera de sus combinaciones, seleccionada de la lista que comprende SEQ ID NO: 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ó 14.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde además comprende la comparación de los datos obtenidos en el apartado (b) con datos obtenidos de al menos una muestra control para buscar alguna desviación significativa, siendo dicha desviación significativa la presencia de la proteína en la muestra aislada, o una mayor concentración de la proteína en la muestra respecto de una muestra control aislada.

8. Método para la determinación de un daño renal según la reivindicación 7, donde además comprende la atribución de la desviación significativa al desarrollo de dicho daño renal, en el individuo.

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones1a8, donde el daño renal es un fallo renal agudo.

10. Método según cualquiera de las reivindicaciones1a9, donde la muestra biológica del apartado (a) es un fluido biológico.

11. Método según la reivindicación 10, donde el fluido biológico es orina.

12. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, donde la proteína es detectada y/o cuantificada por medio de electroforesis, immunoensayo, cromatografía y/o tecnología de microarray.

13. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, donde el daño renal es producido por la administración o por la exposición del individuo a, al menos, un agente nefrotóxico.

14. Método según la reivindicación 13, donde el agente nefrotóxico es un antibiótico aminoglucósido.

15. Método según la reivindicación 14, donde el antibiótico aminoglucósido es gentamicina.

16. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, donde el individuo es un humano.

17. Método para determinar la progresión de un daño renal debido a la administración de, al menos, un agente nefrotóxico, que comprende:

a. determinar una primera concentración de una proteína con al menos un 80% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 5, en un fluido biológico aislado de un individuo expuesto o no expuesto a un agente nefrotóxico,

b. determinar una segunda concentración de la proteína, cuya concentración se ha determinado en el apartado (a) en un fluido biológico del individuo después de determinar la primera concentración en el fluido biológico del individuo expuesto, o después de la iniciación de la administración o exposición al agente nefrotóxico en el individuo no expuesto, y

c. comparar la segunda concentración obtenida en el apartado (b) con la primera concentración obtenida en el apartado (a) para buscar alguna desviación significativa, siendo dicha desviación significativa la presencia de la proteína en la muestra aislada, o una mayor concentración de la proteína en la muestra respecto de una muestra control aislada.

18. Método según la reivindicación 17, donde en el apartado (a) y (b) se detecta y/o cuantifica la proteína SEQ ID NO: 5.

19. Método según cualquiera de las reivindicaciones 17 ó 18, donde además comprende detectar y/o cuantificar en la muestra obtenida en el paso (a) una proteína con al menos un 60% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 1.

20. Método según la reivindicación 19, donde se detecta y/o cuantifica la proteína SEQ ID NO: 1.

21. Método según cualquiera de las reivindicaciones 17 a 20, donde además comprende detectar y/o cuantificar en la muestra al menos una proteína, o cualquiera de sus combinaciones, seleccionada de la lista que comprende: -una proteína con al menos un 60% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 2, -una proteína con al menos un 80% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 3, 4, 6,

7, 8, 9, 10 u11, -una proteína con al menos un 90% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 12 a 14.

22. Método según la reivindicación 21, donde se detecta y/o cuantifica al menos una proteína, o cualquiera de sus combinaciones, seleccionada de la lista que comprende SEQ ID NO: 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ó 14.

23. Método según cualquiera de las reivindicaciones 17 a 22, donde el daño renal es un fallo renal agudo.

24. Método según cualquiera de las reivindicaciones 17 a 23, donde el agente nefrotóxico es un antibiótico aminoglucósido.

25. Método según la reivindicación 24, donde el antibiótico aminoglucósido es gentamicina.

26. Método según cualquiera de las reivindicaciones 17 a 25, donde el fluido biológico es orina.

27. Método según cualquiera de las reivindicaciones 17 a 26, donde el individuo es un humano.

28. Uso de una proteína con al menos un 80% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 5 como biomarcador para determinar un daño renal o para predecir la progresión de un daño renal.

29. Uso según la reivindicación 28, donde la proteína con al menos un 80% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 5 es SEQ ID NO: 5.

30. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 28 ó 29, donde además comprende el uso de una proteína con al menos un 60% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 1.

31. Uso según la reivindicación 30, donde la proteína con al menos un 60% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 1 es SEQ ID NO: 1.

32. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 28 a 31, donde además comprende el uso de al menos una proteína, o cualquiera de sus combinaciones, seleccionada de la lista que comprende: -una proteína con al menos un 60% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 2, -una proteína con al menos un 80% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10 u11, -una proteína con al menos un 90% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 12 a 14.

33. Uso según la reivindicación 32, donde se selecciona al menos una proteína, o cualquiera de sus combinaciones, de la lista que comprende SEQ ID NO: 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ó 14.

34. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 28 a 33, donde el daño renal es un fallo renal agudo.

35. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 28 a 34, donde el daño renal o la progresión del daño renal es debido a la administración de, al menos, un agente nefrotóxico.

36. Uso según la reivindicación 35, donde el agente nefrotóxico es un antibiótico aminoglucósido.

37. Kit para determinar un daño renal o para determinar la progresión de un daño renal, en una muestra aislada de un individuo, que comprende, al menos, una o más sondas para una proteína con al menos un 80% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 5.

38. Kit según la reivindicación 37, donde la proteína con al menos un 80% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 5 es SEQ ID NO: 5.

39. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 37 ó 38, donde además comprende el uso de una o más sondas para una proteína con al menos un 60% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 1.

40. Kit según la reivindicación 39, donde la proteína con al menos un 60% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 1 es SEQ ID NO: 1.

41. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 37 a 40, donde además comprende el uso de una o más sondas para al menos una proteína, o cualquiera de sus combinaciones, seleccionada de la lista que comprende: -una proteína con al menos un 60% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 2, -una proteína con al menos un 80% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 3, 4, 6,

7, 8, 9, 10 u11, -una proteína con al menos un 90% de identidad con respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 12 a 14.

42. Kit según la reivindicación 41, donde se selecciona al menos una proteína, o cualquiera de sus combinaciones, de la lista que comprende SEQ ID NO: 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ó 14.

43. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 37 a 42, donde las sondas son fijadas a un soporte sólido.

44. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 37 a 43, donde las sondas son anticuerpos.

LISTA DE SECUENCIAS

<110> Universidad de Salamanca <120> Método para la detección de daño renal <130> 1367.34

<160> 14

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 175

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 1

<210> 2

<211> 382

<212> PRT

<213> Homo sapiens ES 2 356 217 A1

<400> 2

ES 2 356 217 A1

<210> 3

<211> 413

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 3

ES 2 356 217 A1

<210> 4

<211> 298

ES 2 356 217 A1

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 4

ES 2 356 217 A1

<210> 5

<211> 782

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 5

ES 2 356 217 A1

ES 2 356 217 A1

<210> 6

<211> 137

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 6

<210> 7

<211> 408

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 7

ES 2 356 217 A1

ES 2 356 217 A1

<210> 8

<211> 336

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 8

ES 2 356 217 A1

<210> 9

<211> 590

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 9

ES 2 356 217 A1

ES 2 356 217 A1

<210> 10

<211> 110

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 10

<210> 11

<211> 119

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 11

ES 2 356 217 A1

<210> 12

<211> 413

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 12

ES 2 356 217 A1

<210> 13

<211> 491

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 13

ES 2 356 217 A1

ES 2 356 217 A1

<210> 14

<211> 313

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 14

ES 2 356 217 A1