Anticuerpo ligante de IGF-1R humano, caracterizado porque comprende:

a) una cadena pesada de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 31 a 35, la CDR2 de aminoácidos 50 a 66, y la CDR3 de aminoácidos 99 a 107 de secuencia SEC ID nº 1, y una cadena ligera de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 24 a 34, la CDR2 de aminoácidos 50 a 56 y la CDR3 de aminoácidos 89 a 98 de secuencia SEC ID nº 2, o b) una cadena pesada de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 31 a 35, la CDR2 de aminoácidos 50 a 66, y la CDR3 de aminoácidos 99 a 107 de secuencia SEC ID nº 3, y una cadena ligera de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 24 a 34, la CDR2 de aminoácidos 50 a 56 y la CDR3 de aminoácidos 89 a 98 de secuencia SEC ID nº 4

La presente invención se refiere a anticuerpos contra el receptor del factor I similar a insulina (IGF-1R), a métodos para su producción, a composiciones farmacéuticas que contienen dichos anticuerpos y a usos de los mismos.

El factor I de crecimiento similar a la insulina (IGF-1R, EC 2.7.112, antígeno CD221) pertenece a la familia de las proteínas tirosina quinasa transmembranales (LeiRoith D. et al., Endocrin. Rev. 16:143-163, 1995, y Adams T.E. et al., Cell. Mol. Life Sci. 57 (2000) 1050-1063). El IGF-1R se une a IGF-1 con elevada afinidad e inicia la respuesta fisiológica frente a dicho ligando in vivo. IGF-1R también se une a IGF-2, sin embargo con una afinidad ligeramente inferior.La sobreexpresión de IGF-1R estimula la transformación neoplásica de las células y existe evidencia de que IGF-1R se encuentra implicado en la transformación maligna de las células y por lo tanto de que es una diana útil para el desarrollo de agentes terapéuticos para el tratamiento del cáncer (Adams et al., Cell Mol. Life Sci. 57:1050-1093, 2000). 57 (2000) 1050-1063).

Los anticuerpos contra IGF-1R son bien conocidos del estado de la técnica y han sido investigados por sus efectos antitumorales in vitro e in vivo (Benini S. et al., Clin. Cancer Res. 7:1790-1797, 2001; Scotlandi K. et al., Cancer Gene Ther. 9:296-307, 2002; Scotlandi K. et al., Int. J. Cancer 101:11-16, 2002; Brunetti A. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 165:212-218, 1989; Prigent S.A. et al., J. Biol. Chem. 265:9970-9977, 1990 Li S.L. et al., Cancer Immunol. Immu¬nother. 49:243-252, 2000; Pessino A. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 162:1236-1243, 1989; Surinya

K.H. et al., J. Biol. Chem. 277:16718-16725, 2002; Soos M.A. et al., J. Biol. Chem. 267:12955-12963, 1992; Soos M.A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:5217-5221, 1989; O'Brien R.M. et al., EMBO J. 6:4003-4010, 1987; Taylor R. et al., Biochem. J. 242:123-129, 1987; Soos M.A. et al., Biochem. J. 235:199-208, 1986; Li S.L. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:92-98, 1993; Delafontaine P. et al., J. Mol. Cell. Cardiol. 26:1659-1673, 1994; Kull F.C. Jr. et al. J. Biol. Chem. 258:6561-6566, 1983; Morgan D.O. y Roth R.A., Biochemistry 25:1364-1371, 1986; Forsayeth J.R. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3448-3451, 1987; Schaefer E.M. et al., J. Biol. Chem. 265:13248-13253, 1990; Gustafson T.A. y Rutter W.J., J. Biol. Chem. 265:18663-18667, 1990; Hoyne P.A. et al., FEBS Lett. 469:57-60, 2000; Tulloch P.A. et al., J. Struct. Biol. 125:11-18, 1999; Rohlik Q.T. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 149:276-281, 149; y Kalebic T. et al., Cancer Res. 54:5531-5534, 1994; Adams T.E. et al., Cell. Mol. Life Sci. 57:1050-1063, 2000; Dricu A. et al., Glycobiology 9:571-579, 1999; Kanter-Lewensohn L. et al., Melanoma Res. 8:389-397, 1998; Li S.L. et al., Cancer Immunol. Immunother. 49:243-252, 2000). Los anticuerpos contra IGF-1R también se describen en gran cantidad de publicaciones adicionales, por ejemplo Arteaga C.L. et al., Breast Cancer Res. Treatment 22:101-106, 1992; y Hailey J. et al., Mol. Cancer Ther. 1:1349-1353, 2002.

En particular, el anticuerpo monoclonal contra IGF-1R denominado αIR3 se utiliza ampliamente en la investigación de los procesos mediados por IGF-1R y de las enfermedades mediadas por IGF-1R tales como el cáncer. Alfa-IR3 también ha sido descrito por Kull F.C., J. Biol. Chem. 258:6561-6566, 258. Desde entonces se han publicado aproximadamente cien publicaciones referidas a la investigación y al uso terapéutico de αIR3 con respecto a su efecto antitumoral, solo o conjuntamente con agentes citostáticos tales como la doxorrubicina y la vincristina. αIR3 es un anticuerpo monoclonal murino que es conocido que inhibe la unión de IGF-1 al receptor de IGF pero no la unión de IGF-2 a IGF-1R. αIR3 estimula a concentraciones elevadas la proliferación de las células tumorales y la fosforilación de IGF-1R (Bergmann U. et al., Cancer Res. 55:2007-2011, 1995; Kato H. et al., J. Mol. Biol. 268:2655-2661, 1993). Existen otros anticuerpos (por ejemplo 1H7, Li S.L. et al., Cancer Immunol. Immunother. 49:243-252, 2000) que inhiben la unión de IGF-2 a IGF-1R más potentemente que la unión de IGF-1. Un resumen del estado de la técnica de los anticuerpos y de sus propiedades y características se describe en Adams T.E. et al., Cell. Mol. Life Sci. 57:1050-1063, 2000.

La mayoría de los anticuerpos descritos en el estado de la técnica se obtiene del ratón. Dichos anticuerpos no resultan útiles, tal como es bien conocido del estado de la técnica, para la terapia de pacientes humanos sin alteraciones adicionales tales como la quimerización o la humanización Basándose en estas desventajas, los anticuerpos humanos resultan claramente preferentes como agentes terapéuticos en el tratamiento de los pacientes humanos. Los anticuerpos humanos son bien conocidos en el estado de la técnica (van Dijk M.A. y van de Winkel J.G., Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-374, 2001). Basándose en dicha tecnología, pueden producirse anticuerpos humanos contra una gran diversidad de dianas. Se describen ejemplos de anticuerpos humanos contra IGF-1R en la patente WO nº 02/053596, que muestran, sin embargo, actividad agonista.

Sin embargo, todavía existe una necesidad de anticuerpos contra IGF-1R con beneficios convincentes para los pacientes que necesitan terapia antitumoral. El beneficio relevante para el paciente es, en términos sencillos, la reducción del crecimiento tumoral y una prolongación significativa del tiempo hasta la progresión causada por el tratamiento con el agente antitumorigénico.

Descripción resumida de la invención

La invención proporciona anticuerpos que se unen al IGF-1R humano que comprenden como agentes determinantes de complementariedad (CDRs) las secuencias siguientes: a) una cadena pesada de anticuerpo que comprende como 5 CDRs, la CDR1 de aminoácidos 31 a 35, la CDR2 de aminoácidos 50 a 66 y la CDR3 de aminoácidos 99 a 107 de la secuencia SEC ID nº 1, y una cadena ligera de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 24 a 34, la CDR2 de aminoácidos 50 a 56 y la CDR3 de aminoácidos 89 a 98 de la secuencia SEC ID nº 2, o b) una cadena pesada de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 31 a 35, la CDR2 de aminoácidos 50 a 66 y la CDR3 de aminoácidos 99 a 107 de la secuencia SEC ID nº 3, y una cadena ligera de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 24 a 34, la CDR2 de aminoácidos 50 a 56 y la CDR3 de aminoácidos 89 a 98 de la secuencia SEC ID nº 4.

Un anticuerpo según la invención se une a IGF-1R, inhibiendo la unión de IGF-1 e IGF-2 a IGF-1R, es del isotipo IgG1, muestra una proporción entre los valores de IC50 de inhibición de la unión de IGF-1 a IGF-1R y de inhibición de la unión 15 de IGF-2 a IGF-1R, de entre 1:3 y 3:1, inhibe por lo menos 80%, preferentemente por lo menos 90%, a una concentración de 5 nM, la fosforilación de IGF-1R en un ensayo celular de fosforilación con células HT29 en un medio que contiene 0,5% de suero de feto bovino inactivado por calor (FCS) en comparación con dicho ensayo sin dicho anticuerpo, y no muestra actividad estimuladora de IGF-1R medida como fosforilación de PKB a una concentración de 10 µM en un ensayo celular de fosforilación con células 3T3 que proporciona entre 400.000 y 600.000 moléculas de IGF-1R por célula en un medio que contiene 0,5% de suero de feto bovino (FCS) inactivado por calor en comparación con dicho ensayo sin dicho anticuerpo.

Los anticuerpos según la invención muestran ventajas para los pacientes que necesitan terapia antitumoral y proporcionan una reducción del crecimiento tumoral y una prolongación significativa del tiempo hasta la progresión. Los 25 anticuerpos según la invención presentan nuevas propiedades inventivas que causan un beneficio para un paciente que sufre una enfermedad asociada a una desregulación de IGF, especialmente una enfermedad tumoral. Los anticuerpos según la invención se caracterizan por las propiedades anteriormente indicadas. Por lo tanto, las propiedades son especialmente la unión específica a IGF-1R, la inhibición de la unión de IGF-1 e IGF-2 a IGF-1R en la proporción anteriormente indicada, siendo del isotipo IgG1, y la no activación de la señalización de IGF-1R incluso en células que sobreexpresaban IGF-1R a una concentración de 200 veces su valor de IC50. Los anticuerpos que no presentan "actividad mimética de IGF-1" proporcionan una fuerte ventaja al utilizarse como agente terapéutico.

Preferentemente, un anticuerpo según la invención induce, además, la muerte celular de 20% o más de las células de una preparación... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo ligante de IGF-1R humano, caracterizado porque comprende:

a) una cadena pesada de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 31 a 35, la CDR2 de aminoácidos 50 a 66, y la CDR3 de aminoácidos 99 a 107 de secuencia SEC ID nº 1, y una cadena ligera de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 24 a 34, la CDR2 de aminoácidos 50 a 56 y la CDR3 de aminoácidos 89 a 98 de secuencia SEC ID nº 2, o

b) una cadena pesada de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 31 a 35, la CDR2 de aminoácidos 50 a 66, y la CDR3 de aminoácidos 99 a 107 de secuencia SEC ID nº 3, y una cadena ligera de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 24 a 34, la CDR2 de aminoácidos 50 a 56 y la CDR3 de aminoácidos 89 a 98 de secuencia SEC ID nº 4.

2. Anticuerpo según la reivindicación 1, caracterizado porque es un anticuerpo humano o humanizado.

3. Anticuerpo según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado por una afinidad de entre aproximadamente 10-13 y 10-9 M (KD).

4. Anticuerpo según la reivindicación 1, obtenible a partir de la línea celular de hibridoma <IGF-1R> HUMAB clon 18 (DSM nº ACC 2587) o <IGF-1R> HUMAB clon 22 (DSM nº ACC 2594).

5. Utilización de un anticuerpo según las reivindicaciones 1 a 4 para la preparación de una composición farmacéutica.

6. Composición farmacéutica que contiene un anticuerpo según las reivindicaciones 1 a 4.

7. Líneas celulares de hibridoma <IGF-1R> HUMAB clon 18 (DSM nº ACC 2587) y <IGF-1R> HUMAB clon 22 (DSM nº ACC 2594).

8. Método para la preparación de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo según las reivindicaciones 1 a 4.

9. Ácido nucleico codificante de un anticuerpo ligante de IGF-1R humano, caracterizado porque comprende:

a) una cadena pesada de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 31 a 35, la CDR2 de aminoácidos 50 a 66, y la CDR3 de aminoácidos 99 a 107 de secuencia SEC ID nº 1, y una cadena ligera de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 24 a 34, la CDR2 de aminoácidos 50 a 56 y la CDR3 de aminoácidos 89 a 98 de secuencia SEC ID nº 2, o

b) una cadena pesada de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 31 a 35, la CDR2 de aminoácidos 50 a 66 y la CDR3 de aminoácidos 99 a 107 de secuencia SEC ID nº 3, y una cadena ligera de anticuerpo que comprende como CDRs, la CDR1 de aminoácidos 24 a 34, la CDR2 de aminoácidos 50 a 56 y la CDR3 de aminoácidos 89 a 98 de secuencia SEC ID nº 4.

10. Vector de expresión que comprende un ácido nucleico según la reivindicación 9, capaz de expresar dicho ácido nucleico en una célula huésped procariótica o en una célula huésped CHO, NS0, SP210, H3K293, COS o de levadura.

11. Célula huésped procariótica o célula huésped CHO, NS0, SP210, H3K293, COS o levadura que comprende el vector según la reivindicación 10.

12. Método para la producción de un polipéptido ligante del IGF-1R humano, caracterizado por la expresión de un ácido nucleico codificante de una cadena pesada de anticuerpo y un ácido nucleico codificante de una cadena ligera de anticuerpo según la reivindicación 9 en una célula huésped procariótica o en una célula huésped CHO, NS0, SP210, H3K293, COS o levadura y la recuperación de dicho polipéptido a partir de dicha célula.

13. Anticuerpo según las reivindicaciones 1 a 4 para la utilización como medicamento destinado al tratamiento de un paciente que necesita terapia antitumoral.

14. Anticuerpo para la utilización como medicamento según la reivindicación 13, caracterizado porque el anticuerpo se administra en combinación con un agente citotóxico, un profármaco del mismo o una radioterapia citotóxica.