ANTICUERPOS ANTI-CD19 CON INMUNOGENICIDAD REDUCIDA.
Anticuerpo anti-CD19 diseñado y modificado derivado de anticuerpo B4 murino anti-CD19 caracterizado por la región variable de cadena pesada de la SEQ.
ID: 13 y la región variable de cadena liviana de la SEQ ID NO: 25, en donde dicho anticuerpo diseñado y modificado (i) es menos inmunogénico que dicho anticuerpo B4 murino anti-CD19 original cuando se administra a un humano pero sigue siendo competente para unirse específicamente a CD19 y tomar como diana a células que expresan CD19, y (ii) comprende la región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO: 17 y la región variable de cadena liviana de la SEQ ID NO: 29
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2006/012365.
Solicitante: MERCK PATENT GMBH.
Nacionalidad solicitante: Alemania.
Dirección: FRANKFURTER STRASSE 250 64293 DARMSTADT ALEMANIA.
Inventor/es: SUPER,Michael, DAVIS,Jonathan,H, STEIN,Pascal,André.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 21 de Diciembre de 2006.
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K39/395C2
- C07K16/28A
Clasificación PCT:
- A61K39/395 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
- A61P35/00 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES. › Agentes antineoplásicos.
- A61P37/04 A61P […] › A61P 37/00 Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos o alérgicos. › Inmunoestimulantes.
- C07K16/28 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
- C12N15/10 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
- C12N15/13 C12N 15/00 […] › Inmunoglobulinas.
- C12N15/85 C12N 15/00 […] › para células animales.
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
PDF original: ES-2365046_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
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Campo de la invención
La invención hace referencia en general a regiones variables de cadena liviana y pesada del anticuerpo monoclonal murino B4 anti-CD19 modificadas para reducir su inmunogenicidad.
Antecedentes
La CD19 es una proteína de superficie que se encuentra en las células B y en ciertas células cancerígenas derivadas de las células B, tales como muchos linfomas de células B. Los anticuerpos monoclonales anti-CD19 han sido generados en ratones y se muestran algo prometedores en modelos animales pre-clínicos de cáncer derivados de las células B. Sin embargo, los anticuerpos derivados de ratón generalmente son inmunogénicos en humanos. Se han desarrollado una serie de estrategias para modificar los anticuerpos derivados de ratón para minimizar su inmunogenicidad en humanos. Una estrategia tal, la quimerización, implica la fusión de las regiones variables de ratón con regiones constantes humanas. Sin embargo, las secuencias de región variable derivadas de ratón que permanecen tras la quimerización serán a menudo inmunogénicas. Otra estrategia, la humanización, implica la sustitución de las regiones armazón (FR, por sus siglas en inglés) derivadas de ratones dentro de las regiones variables con las secuencias derivadas de humanos más relacionadas, con la reversión opcional de ciertos aminoácidos al aminoácido de ratón correspondiente para mantener la actividad de unión. Sin embargo, incluso los anticuerpos humanizados pueden ser inmunogénicos, dado que las regiones determinantes de complementariedad (CDR, por sus siglas en inglés) de anticuerpos generalmente contienen epítopos de células B y epítopos de linfocitos T que son no propios. De hecho, incluso los anticuerpos completamente humanos son inmunogénicos; ésta es la base de la formación de anticuerpos anti-idiotipo durante el transcurso de una respuesta inmune. Todos estos problemas pueden aplicarse a anticuerpos anti-CD19 derivados de ratón como se aplicarían a cualquier otro tipo de anticuerpo. Por lo tanto, existe una necesidad de anticuerpos anti-CD19 con inmunogenicidad reducida.
Resumen de la invención
La presente invención está dirigida a un anticuerpo B4 monoclonal murino anti-CD19 que ha sido modificado para reducir su inmunogenicidad en comparación con un anticuerpo B4 tipo salvaje (Wild type). Más específicamente, la región variable del anticuerpo B4 de la invención se modifica para eliminar epítopos de linfocitos T potenciales. Por lo tanto, el anticuerpo B4 de la invención tiene propiedades biológicas mejoradas en comparación con los anticuerpos B4 salvajes.
La región armazón de cadena pesada de la inmunoglobulina no modificada tiene residuos de aminoácidos como se especifica en la SEQ ID NO:13.
La región armazón de cadena liviana de la inmunoglobulina no modificada tiene los residuos de aminoácidos de la SEQ ID NO:25.
La invención presenta una región variable de anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 17 y, SEQ ID NO: 29, en donde la región variable de anticuerpo se une específicamente con CD19.
En otro aspecto, la invención presenta un ácido nucleico que codifica un polipéptido según cualquiera de las realizaciones de la invención.
En otro aspecto, la invención presenta un método para el tratamiento de un paciente, donde el método comprende el paso de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un polipéptido, según cualquiera de las realizaciones de la invención, a un paciente.
En otro aspecto, la invención presenta un método para seleccionar como diana una célula con CD 19 en su superficie, donde el método comprende el paso de administrar una región variable de anticuerpo según cualquiera de las realizaciones de la invención. En una realización del método la célula es una célula tumoral.
En resumen, la invención hace referencia a:
• Un anticuerpo B4 diseñado y modificado correspondiente que comprende las siguientes cadenas pesadas y livianas seleccionadas del grupo:
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(iv) región variable de cadena pesada de SEQ ID NO: 17 y región variable de cadena liviana de SEQ ID NO: 29; a la que se hace referencia.
• Una molécula de ADN que codifica el anticuerpo B4 diseñado y modificado como se especifica con anterioridad y a continuación.
• Un vector de expresión que comprende una molécula de ADN correspondiente.
• Una célula huésped que expresa dicho anticuerpo B4 diseñado y modificado.
• Una composición farmacéutica apropiada para el tratamiento del cáncer y enfermedades autoinmunes que comprende una cantidad farmacológicamente efectiva del anticuerpo como se especifica con anterioridad y a continuación, opcionalmente junto con un disolvente, portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.
• Uso de una composición farmacéutica correspondiente para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de enfermedades autoinmunes o cáncer.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 muestra la secuencia de ácido nucleico que codifica la región variable de cadena pesada del anticuerpo B4 (B4 VH0) (SEQ ID NO:1).
La figura 2 muestra la secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada del anticuerpo B4 a modo de ejemplo que incorpora codones para las mutaciones Q5E, R19K, L20V, R40T, Q43K, K65D, S85D, S88A, y V93T (B4 VHv4) (SEQ ID NO:5).
La figura 3 muestra la secuencia de ácido nucleico que codifica la región variable de cadena liviana del anticuerpo B4 (B4 VK0) (SEQ ID NO:8).
La figura 4 muestra la secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena liviana del anticuerpo B4 a modo de ejemplo que incorpora codones para las mutaciones I10T, M11 L, V19A, S51D. y L53T (B4 VKv4) (SEQ ID NO:12).
La figura 5 muestra la secuencia de aminoácidos de región variable de cadena pesada del anticuerpo B4 (B4 VH0) (SEQ ID NO:13).
La figura 6 muestra la secuencia de aminoácidos de una región variable de cadena pesada del anticuerpo B4 con las mutaciones Q5E, R19K, L20V, R40T, Q43K, K65D, S85D, S88A, y V93T (B4 VHv4) (SEQ ID NO:17).
La figura 7 muestra la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena liviana del anticuerpo B4 (B4 VHK0) (SEQ ID NO:25).
La figura 8 muestra la secuencia de aminoácidos de una región variable de cadena liviana del anticuerpo B4 a modo de ejemplo que incorpora las mutaciones I10T, M11L, V19A, S51D, y L53T (B4 VKv4) (SEQ ID NO:29).
La figura 9 muestra la secuencia de aminoácidos de región variable de cadena pesada del anticuerpo B4. Las regiones determinantes de complementariedad están subrayadas. Los residuos de aminoácidos modificables se muestran en negrita.
La figura 10 muestra la secuencia de aminoácidos de región variable de cadena liviana del anticuerpo B4. Las regiones determinantes de complementariedad están subrayadas. Los residuos de aminoácidos modificables se muestran en negrita.
La figura 11 es una alineación de secuencia de aminoácidos de las regiones variables de cadena pesada del anticuerpo B4 VH0 (SEQ ID NO:13), VHv1 (SEQ ID NO:14), VHv2 (SEQ ID NO:15), VHv3 (SEQ ID NO:16), VHv4 (SEQ ID NO:17), VHv5 (SEQ ID NO: 18), VHv11 (SEQ ID NO:20), y VHv34 (SEQ ID NO:21).
La figura 12 es una alineación de secuencia de aminoácidos de las regiones variables de cadena liviana del anticuerpo B4 VK0 (SEQ ID NO:25), VKv1 (SEQ ID NO:26), VKv2 (SEQ ID NO:27), VKv3 (SEQ ID NO:28), VKv4 (SEQ ID NO:29), VKv11 (SEQ ID NO: 30 y, VKv34 (SEQ ID NO:31).
La figura 13 muestra los resultados de un ensayo ADCC en células de linfoma de Burkitt (células Daudi) realizado con el anticuerpo B4 VHv4NKv4 expresado de células HEK 293T (triángulos vacíos) o de células YB2/0 (triángulos
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rellenos), y anticuerpo B4 VHv5NKv4 expresado ya sea de una línea celular NS/0 (círculos vacíos) o de células YB2/0 (círculos rellenos) como se describe en el ejemplo 4.
La figura 14 muestra los resultados del tratamiento de ratones trasplantados con PBMC humanas tratadas con el anticuerpo B4 VHv4NKv4 de la invención (barras rayadas), anticuerpo Leu 16 (barras blancas) o PBS (barras negras) como se describe en el ejemplo... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Anticuerpo anti-CD19 diseñado y modificado derivado de anticuerpo B4 murino anti-CD19 caracterizado por la región variable de cadena pesada de la SEQ. ID: 13 y la región variable de cadena liviana de la SEQ ID NO: 25, en donde dicho anticuerpo diseñado y modificado (i) es menos inmunogénico que dicho anticuerpo B4 murino anti-CD19 original cuando se administra a un humano pero sigue siendo competente para unirse específicamente a CD19 y tomar como diana a células que expresan CD19, y
(ii) comprende la región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO: 17 y la región variable de cadena liviana de la SEQ ID NO: 29.
3. Molécula de ADN que codifica un anticuerpo anti-CD19 diseñado y modificado como se especifica en la reivindicación 1 ó 2. 4. Un vector de expresión que comprende una molécula de ADN conforme a la reivindicación 3. 6. Composición farmacéutica que comprende una cantidad farmacéuticamente efectiva de un anticuerpo anti-CD19 diseñado y modificado como se especifica en la reivindicación 1 ó 2, de manera opcional junto con un disolvente, portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. 8. Anticuerpo anti-CD19 diseñado y modificado como se especifica en la reivindicación 1 ó 2 para su utilización en el tratamiento de enfermedades autoinmunes o cáncer. 10 2. Anticuerpo anti-CD19 diseñado y modificado conforme a la reivindicación 1 que se obtiene mediante la expresión de células YB2/0.
15 5. Una célula huésped que expresa un anticuerpo anti-CD19 diseñado y modificado como se especifica en la reivindicación 1 ó 2.
20 7. Utilización de una composición farmacéutica conforme a la reivindicación 6 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de enfermedades autoinmunes o cáncer.
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