Una composición comprendiendo células dendríticas maduradas parcialmente in vitro en presencia de un agente de maduración de células dendríticas combinado con un portador farmacéuticamente aceptable para la administración in vivo,

donde las células dendríticas maduradas parcialmente presentan un aumento de la expresión de moléculas coestimulantes CD80, CD86 y/o CD54, y fosforilación de JAK2, y conservan la capacidad de captar y procesar el antígeno, para su uso en el tratamiento de tumores, que se caracteriza por el hecho de que la composición es para su administración directa en el tumor o en una región cercana o adyacente al mismo, o en contacto circulatorio o linfático con el tumor, o el lecho tumoral; y donde el agente de maduración de las células dendríticas es el Bacilo Calmette-Guerin (BCG) e interferon γ (IFNγ); BCG, INFγ e imidazoquinolina R848; o R848 solo

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las células dendríticas (DCs, dendritic cells) son consideradas el vehículo de elección para la inmunoterapia activa del cáncer. Los experimentos en animales han demostrado el potencial de la inmunoterapia basada en DCs para proteger a ratones de la formación de tumores y la eliminación de tumores ya establecidos. Estos éxitos se han reproducido por lo menos parcialmente en humanos en ensayos clínicos 5 pequeños. La transición desde los pequeños ensayos de seguridad o de prueba de concepto a ensayos mayores en los que se pueda demostrar la actividad o la eficacia se ha visto obstaculizada por la laboriosa e incómoda naturaleza de la preparación de las DCs (ver más abajo). Como consecuencia, pocas empresas han estado interesadas en desarrollar vacunas del cáncer basadas en DCs a pesar del gran potencial terapéutico de tales productos. 10

La inyección intratumoral (IT) de DCs constituye una forma especial de inmunoterapia basada en DCs. Tras la inyección, las DCs captan el antígeno de las células tumorales apoptóticas o moribundas, y lo presentan a células T tras la migración a los nódulos linfáticos. De hecho se ha observado que la eficacia de tales tratamientos en modelos animales se correlaciona con el grado de apoptosis en el tumor (Candido et al., Cancer Res. 61:228-236, 2001), lo que sugiere que este enfoque es plenamente compatible con el tratamiento 15 de los tumores con agentes quimioterapéuticos o radiación antes de la inyección de DCs. Además, varios grupos han demostrado que esta terapia de combinación resulta especialmente efectiva contra tumores establecidos (Nikitina et a.l, Int. J Cancer 94:825-833, 2001; Tanaka et al., Int. J. Cancer 101:265-269, 2002; Tong et. al., Cancer Res. 61:7530-7535, 2001).

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Como las células tumorales son la fuente del antígeno, la inyección IT se anticipa a la necesidad de selección y producción de antígenos tumorales tal como son usados actualmente en la mayoría de los enfoques de terapia basada en DCs in vitro. La selección de un antígeno tumoral está a menudo condicionada por la necesidad de las empresas de tener una posición propia, y los pocos antígenos tumorales identificados hasta la fecha no han demostrado todavía que proporcionen un beneficio clínico significativo. Además, el uso 25 de tales antígenos tumorales tiene frecuentemente como resultado una vacuna monovalente, que puede perder su efectividad si las células tumorales reducen la expresión del antígeno utilizado en la inmunización. Naturalmente, la necesidad de producir el antígeno tumoral en las condiciones requeridas en las Buenas Prácticas de Fabricación (Good Manufacturing Practices, GMP) añade un coste adicional a los clásicos métodos de inmunización basados en DCs. 30

La inyección IT de DCs somete a las células dendríticas a un entorno tumoral inmunosupresor. Se sabe que los tumores producen citoquinas que inactivan las DCs, o que tienen la capacidad de sesgar la respuesta de las células T hacia una respuesta tipo T-2 menos efectiva. Varios grupos han utilizado modificación genética de DCs para intentar superar esos efectos supresores, especialmente mediante la 35 producción de la citoquina Interleuquina 12 (IL-12; Nishioka et al., Cancer Res. 59:4035-4041, 1999; Melero et al, Gene Therapy 6:1779-1784, 1999) o la expresión del ligando CD40 (Kikuchi et al., Blood 96:91-99, 2000). Los alentadores resultados descritos por esos grupos demuestran también la viabilidad de la inyección IT de DCs como enfoque terapéutico.

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Triozzi et al. (Cancer 89:2647-2654, 2000) describen la inyección IT de DCs en pacientes con melanoma metastásico o cáncer de mama. Se constató la regresión tumoral en 4 pacientes con melanoma y en dos pacientes con carcinoma de mama. Las biopsias de las lesiones en regresión mostraron células T infiltrantes, lo que sugiere que las DCs habían realmente activado una respuesta inmune contra las células tumorales. En conjunto, estos datos demostraron que la inyección IT de DCs era factible en humanos, y podía 45 proporcionar un beneficio clínico significativo. No obstante, se ha observado una reducción significativa de antígenos de MHC de Clase II, y de la molécula coestimuladora B7-2 sobre las DCs inyectadas. Cabría esperar que una disminución de esas moléculas críticas redujera el potencial inmunoestimulador de las DCs, pero tal como se presenta en esta invención esto puede evitarse mediante la maduración parcial de las DCs previa a la administración. 50

Las DCs existen en los tejidos periféricos en una forma inmadura, dispuestas a captar y procesar antígeno. Es esta célula inmadura la que es imitada con más precisión por las DCs generadas a partir de monocitos, en presencia de GM-CSF e IL-4. Diversos estímulos pueden iniciar la maduración de las DCs, y durante este proceso las células pierden su capacidad de captar el antígeno de forma eficiente, y adquieren 55 sus funciones estimuladoras de células T. Este proceso es complejo y por lo menos in vitro puede tardar hasta

48 horas en completarse. Otra consecuencia de la maduración es un cambio en las propiedades migratorias de las células. Por ejemplo, la maduración induce varios receptores de citoquinas, incluyendo el CCR7, que dirigen a las células a las regiones de células T de los nódulos linfáticos de drenaje, donde las DCs maduras activan a las células T contra los antígenos presentes en la superficie de las DCs en el contexto de moléculas de MHC de clase I y clase II. 5

La inducción de tolerancia se ha relacionado con la presentación cruzada de (auto) antígenos por las DCs (Kurts et al., J. Exp. Med, 186:239-245, 1997), y la hipótesis prevalente actualmente postula que las DCs inmaduras presentan continuamente antígenos en el sistema inmunitario para mantener la tolerancia (Kurts et al, J. Exp, Med. 184:923-930,1996), sugiriendo que se requiere la maduración de las DCs in vivo para una 10 inmunoestimulación eficiente. Ahora se ha puesto de manifiesto que la maduración de las DCs puede dar como resultado DCs inmunoestimuladoras o inmunosupresoras (Chakraborty et al, Clin. Immunol 94:88-98, 1999). No se ha dilucidado la naturaleza exacta de los estímulos de maduración que producen cualquiera de los dos resultados, pero se acepta en general que las DCs inmunoestimuladoras producen IL-12 y expresan el ligando CD40 (Albert et al, Nature Immunol 2:988-989,2001; Lanzavecchia, Haematologica 84 Suppl EHA 15 4:23-25,1999). Por consiguiente, se deben utilizar DCs maduras para la inyección IT, en especial si se sabe que los estímulos empleados para la maduración de células dendríticas inmaduras dan como resultado la expresión del ligando CD40 y la producción de IL-12.

Romaner R. et al: J Urol, Vol. 159, 1998, páginas 1488 a 1492, describe la maduración de células 20 dendríticas con BCG con un periodo de contacto de 48 horas. Las células dendríticas se utilizan para ensayos de proliferación de células T in vitro.

Lutz MB et al; Trends Immunol, Vol. 23, 2002, páginas 445 a 449, describe un estado semimaduro de las células dendríticas que son tolerogénicas, o que requieren más activación, por ejemplo mediante un 25 estímulo LPS secundario in vitro, o que pudieran responder a más estímulos tras la inyección subcutánea.

BREVE RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona una composición según las reivindicaciones. La descripción 30 proporciona un método para producir una respuesta inmunitaria antitumoral que consta de la administración de una población celular incluyendo células dendríticas que han sido maduradas parcialmente in vitro, de forma que las células dendríticas parcialmente maduradas conservan la capacidad de captar el antígeno tumoral y pueden inducir una respuesta inmunológica posterior a la administración a un individuo. El método prevé la eficiente captación y procesado de antígenos tumorales en el tumor y en el lecho tumoral, a pesar del 35 entorno inmunosupresor global dentro del tumor. Se espera que este entorno inmunosupresor interfiera en la función de las células dendríticas impactando negativamente sobre sus propiedades inmunoestimuladoras. Además, no se administran células dendríticas maduras a tumores, porque las células no procesan eficientemente el antígeno.

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La administración de las células dendríticas maduradas parcialmente puede realizarse...

1. Una composición comprendiendo células dendríticas maduradas parcialmente in vitro en presencia de un agente de maduración de células dendríticas combinado con un portador farmacéuticamente aceptable para la administración in vivo, donde las células dendríticas maduradas parcialmente presentan un aumento de la expresión de moléculas coestimulantes CD80, CD86 y/o CD54, y fosforilación de JAK2, y 5 conservan la capacidad de captar y procesar el antígeno, para su uso en el tratamiento de tumores, que se caracteriza por el hecho de que la composición es para su administración directa en el tumor o en una región cercana o adyacente al mismo, o en contacto circulatorio o linfático con el tumor, o el lecho tumoral; y donde el agente de maduración de las células dendríticas es el Bacilo Calmette-Guerin (BCG) e interferon γ (IFNγ); BCG, INFγ e imidazoquinolina R848; o R848 solo. 10

2. La composición según la reivindicación 1, donde las células dendríticas se obtienen de la piel, el bazo, la médula ósea, el timo, los nódulos linfáticos, la sangre de cordón umbilical o sangre periférica.

3. La composición según la reivindicación 2, donde las células dendríticas se obtienen del 15 individuo a tratar.

4. La composición según la reivindicación 2, donde las células dendríticas se obtienen de un individuo sano compatible para HLA con el individuo a tratar.

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5. La composición según la reivindicación 1, donde el BCG comprende BCG entero, componentes de pared celular de BCG, lipoarabidomananos derivados de BCG, componentes de BCG, o el BCG es BCG inactivado por calor o BCG tratado con formalina.

6. La composición según la reivindicación 1, donde la cantidad efectiva de BCG es de 25 aproximadamente 105 a107 ufc por mililitro de medio de cultivo tisular, la cantidad efectiva de IFNγ es de aproximadamente 100 a 1000 unidades por mililitro de medio de cultivo tisular.

7. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde las células dendríticas maduradas parcialmente son administradas como un adyuvante a la terapia de radiación, la 30 quimioterapia o combinaciones de ellas.

8. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde la composición consta aproximadamente de 102 a 1010 de células dendríticas maduradas parcialmente.

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9. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde las células dendríticas maduradas parcialmente han sido crioconservadas después de la maduración parcial.