FORMULACIONES DE COMBINACIONES DE ADYUVANTES.

La presente invención se refiere al uso de monofosforil lípido A 3Odesacilado o de monofosforil lípido A en combinación con factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos como formulación adyuvante en una composición antigénica para aumentar la respuesta inmune hacia un antígeno seleccionado en un huésped vertebrado. Antecedentes de la invención El sistema inmune usa una variedad de mecanismos para atacar a los patógenos. Sin embargo, no todos estos mecanismos se activan necesariamente tras la inmunización. La inmunidad protectora inducida por la inmunización depende de la capacidad de la vacuna para generar la respuesta inmune apropiada para resistir o eliminar el patógeno. En función del patógeno, esto puede requerir una respuesta inmune mediada por células y/o humoral. El actual paradigma para el papel de los linfocitos T cooperadores en la respuesta inmune es que es posible separar los linfocitos T en subconjuntos en base a las citocinas que producen y que el perfil de las distintas citocinas observado en estas células determina su función. Este modelo de linfocitos T incluye dos subconjuntos principales: los linfocitos TH1, que producen interleucina2 (IL2) e interferón gamma, que aumentan tanto la respuesta inmune celular como la humoral (anticuerpo); y los linfocitos TH2, que producen interleucina4, interleucina5 e interleucina10 (IL4, IL5 e IL10, respectivamente), que aumentan las respuestas inmunes humorales (entrada bibliográfica n.º 1). A menudo, es deseable aumentar la potencia inmunógena de un antígeno con el fin de obtener una respuesta inmune más potente en el organismo que esté siendo inmunizado y reforzar la resistencia del huésped al agente portador del antígeno. En algunos casos, es deseable cambiar la respuesta inmune de una respuesta predominantemente humoral (TH2) a una respuesta celular (TH1) y humoral (TH2) más equilibrada. Una respuesta celular implica la generación de una respuesta de los CTL (linfocitos T citotóxicos) CD8+. Tal respuesta es deseable para el desarrollo de vacunas contra patógenos intracelulares. La protección contra una variedad de patógenos requiere potentes respuestas en las mucosas, altos títulos en suero, la inducción de CTL y altas respuestas celulares. Estas respuestas no han sido proporcionadas por la mayoría de las preparaciones antigénicas, incluyendo las vacunas subunitarias convencionales. Entre tales patógenos se encuentra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Así pues, existe la necesidad de desarrollar formulaciones de composiciones antigénicas que sean capaces de generar respuestas inmunes tanto humorales como celulares en un huésped vertebrado. Resumen de la invención ES 2 367 625 T3 Por consiguiente, un objeto de la presente invención consiste en utilizar formulaciones de combinaciones de adyuvantes en composiciones antigénicas que contienen monofosforil lípido A 3Odesacilado (MPL) o monofosforil lípido A combinado con factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GMCSF). Un adyuvante es una sustancia que aumenta la respuesta inmune cuando se administra junto con un inmunógeno o un antígeno. La formulación adyuvante de la presente invención se administra junto con un antígeno seleccionado en una composición antigénica. Las composiciones antigénicas de la presente invención aumentan la respuesta inmune hacia ese antígeno seleccionado en un huésped vertebrado. El antígeno seleccionado puede ser un polipéptido, péptido o fragmento derivado (1) de un virus, una bacteria, un hongo o un parásito patógeno, o (2) de una célula cancerosa o célula tumoral, o (3) de un alérgeno para interferir en la producción de IgE con el fin de moderar las respuestas alérgicas hacia el alérgeno o (4) de una proteina peptidica amiloide para prevenir o tratar una enfermedad caracterizada por la deposición amiloide en un huésped vertebrado. En una realización de la invención, el antígeno seleccionado procede del VIH. El antígeno del VIH seleccionado puede ser una proteína, un polipéptido, un péptido o un fragmento derivado de dicha proteína del VIH. En una realización particular de la invención, el antígeno del VIH es un péptido específico. En otras realizaciones de la invención, el antígeno seleccionado procede de Neisseria gonorrhoeae o virus respiratorio sincitial. El MPL se puede presentar en forma de solución acuosa o de emulsión de aceite en agua estabilizada (emulsión estable o EE). En una realización preferida de la invención, la emulsión de aceite en agua contiene escualeno, glicerol y fosfatidilcolina. En la formulación de la EE, se mezcla el MPL con la citocina o la linfocina para formar la composición antigénica antes de su administración. No es necesario introducir el GMCSF en la emulsión. En una realización preferida de la invención, el MPL se encuentra en forma de EE. La composición antigénica puede comprender además un diluyente o un vehículo. 2 También se revelan procedimientos para aumentar la capacidad de una composición antigénica que contiene un antígeno seleccionado (1) procedente de un virus, una bacteria, un hongo o un parásito patógeno para producir la respuesta inmune de un huésped vertebrado o (2) procedente de un antígeno canceroso o antígeno asociado a un tumor de una célula cancerosa o célula tumoral para producir un efecto terapéutico o profiláctico anticancerígeno en un huésped vertebrado, o (3) procedente de un alérgeno para interferir en la producción de IgE para moderar las respuestas alérgicas hacia el alérgeno o (4) procedente de una proteina peptidica amiloide para prevenir o tratar una enfermedad caracterizada por una deposición amiloide en un huésped vertebrado, mediante la inclusión de una cantidad adyuvante eficaz de una combinación de una citocina o linfocina, en concreto de MPL con GMCSF o IL 12, o un agonista o antagonista de dicha citocina o linfocina. También se revelan procedimientos para aumentar la capacidad de una composición antigénica que contiene un antígeno seleccionado procedente de un virus, una bacteria, un hongo o un parásito patógeno para producir linfocitos T citotóxicos en un huésped vertebrado mediante la inclusión de una cantidad adyuvante eficaz de una combinación de una citocina o linfocina, en concreto, MPL con GMCSF o IL12, o un agonista o antagonista de dicha citocina o linfocina. Breve descripción de las figuras ES 2 367 625 T3 La Figura 1 representa los títulos finales recíprocos determinados de grupos de cinco ratones hembra Balb/c inmunizados con 25 g de T1SP10MN(A)(Cys), un péptido multiepítopo de 39 aminoácidos, formulado con CFA o IFA (triángulos), o con 50 g de emulsión estable (EE) al 2% de MPL (cuadrados). Los ratones fueron inmunizados el día 0 y recibieron una vacuna de recuerdo el día 28. Se determinaron los títulos de IgG, IgG1 e IgG2a específicos del péptido de los sueros recogidos el día 42 mediante ELISA. La Figura 2 representa el efecto de la EE sola, el MPL solo o la EE de MPL sobre las propiedades adyuvantes de GMCSF en los títulos de IgG antiT1SP10MN(A)(Cys). Se inmunizaron grupos de cinco ratones Balb/c hembra con 25 g de T1SP10MN(A)(Cys) el día 0 y recibieron una vacuna de recuerdo el día 28 con las formulaciones adyuvantes indicadas. Se emulsionaron CFA e IFA con péptido acuoso a una proporción de 1:1. El GMCSF se usó a 10 g/dosis. Se administró MPL a los ratones a una concentración final de 50 g en forma de una formulación acuosa o a 25 g como parte de una emulsión estable con EE al 1%. Los títulos se determinaron dos semanas después de la segunda inmunización. Los datos representan títulos individuales determinados de cinco ratones. La figura 3 representa los resultados de un análisis de neutralización viral. Se diluyeron (1/1600) los sueros mezclados obtenidos el día 42 de los ratones inmunizados los días 0 y 28 con las formulaciones indicadas y se añadieron a diluciones de VIH MN adaptado a linfocitos T antes de su adición a células AA5 in vitro. Tras un cultivo de siete días, se analizó los sobrenadantes de los cultivos celulares por transcriptasa inversa viral como indicador de replicación viral. La Figura 4 representa la proliferación de células de bazo de ratones inmunizados con T1SP10MN(A)(Cys) y diversas formulaciones adyuvantes. Se estimularon las células de bazo in vitro durante cuatro días con 3,3 g/ml de T1SP10MN(A)(Cys). Los resultados se muestran como el cambio en la incorporación de timidina marcada como resultado de una estimulación in vitro con T1SP10MN(A)(Cys) frente a la incorporación en ausencia de estimulación (cpm delta). La Figura 5 representa la actividad CTL de células de bazo aisladas de ratones siete días después de la segunda inmunización. Las células de bazo se cosecharon de grupos de tres ratones Balb/c inmunizados los días 0 y 21 con 50 g de T1SP10MN(A)(Cys)... [Seguir leyendo]

1. Una composición antigénica que comprende un antígeno seleccionado procedente de un virus, una bacteria, un hongo o un parásito patógeno, o de una célula cancerosa o una célula tumoral, o de un alérgeno o de una proteína Aß, y una cantidad adyuvante eficaz de una combinación de adyuvantes constituida por: (i) monofosforil lípido A 3Odesacilado o monofosforil lípido A y (ii) factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos. 2. Una composición antigénica según lo reivindicado en la reivindicación 1, en la que el antígeno seleccionado es un polipéptido, un péptido o un fragmento derivado de una proteína. 3. Una composición antigénica según lo reivindicado en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que comprende además un diluyente o un vehículo. 4. Una composición antigénica según lo reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el antígeno seleccionado procede del virus de la inmunideficiencia humana (VIH). 5. Una composición antigénica según lo reivindicado en la reivindicación 4, en la que el antígeno seleccionado es el péptido del VIH que tiene la secuencia de aminoácidos: 6. Una composición antigénica según lo reivindicado en la reivindicación 4, en la que el antígeno seleccionado es el péptido del VIH que tiene la secuencia de aminoácidos: 7. Una composición antigénica según lo reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el antígeno seleccionado procede del virus de la inmunideficiencia del simio (VIS). 8. Una composición antigénica según lo reivindicado en la reivindicación 7, en la que el antígeno del VIS es un péptido del VIS seleccionado entre los péptidos constituidos por las secuencias de aminoácidos: y Cys Thr Pro Tyr Asp Ile Asn Gln Met (SEC ID N.º 3), Ser Thr Pro Pro Leu Val Arg Leu Val (SEC ID N.º 4), Tyr Ala Pro Pro Ile Ser Gly Gln Ile (SEC ID N.º 5), ES 2 367 625 T3 9. Una composición antigénica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el antígeno seleccionado procede de Neisseria gonorrhoeae. 48 10. Una composición antigénica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el antígeno seleccionado procede del virus respiratorio sincitial (VRS) humano. 11. Una vacuna que comprende una composición antigénica según lo reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que la vacuna es: 5 a) una vacuna contra patógenos virales, 10 o b) una vacuna contra patógenos bacterianos, c) una vacuna contra patógenos fúngicos, ES 2 367 625 T3 d) una vacuna que produce un efecto terapéutico o profiláctico contra el cáncer en un huésped vertebrado, e) una vacuna que modera las respuestas a alergias en un huésped vertebrado, f) una vacuna que previene o trata una enfermedad caracterizada por la deposición amiloide en un huésped vertebrado. 49 ES 2 367 625 T3 ES 2 367 625 T3 51 ES 2 367 625 T3 52 ES 2 367 625 T3 53 ES 2 367 625 T3 54