Uso de un polipéptido que comprende la secuencia de SEQ ID Nº:

10 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de asma, bronquitis, enfisema, nefritis, pielonefritis, neoplasmas renales, neuropatía asociada a cadenas ligeras, amiloidosis, enfermedad de Crohn, o inflamación asociada al dolor articular, edema o choque séptico en un mamífero

Usos terapéuticos de receptores solubles BR43x2.

Antecedentes del invento

Las interacciones celulares que tienen lugar durante una respuesta inmune son reguladas por miembros de diversas familias de receptores de superficie en las células, incluyendo la familia de receptores del factor de necrosis tumoral (TNFR; del inglés, tumor necrosis factor receptor). La familia de TNFR consiste en un número de receptores glicoproteínicos integrales de membrana, muchos de los cuales, junto con sus respectivos ligandos, regulan interacciones entre diferentes linajes celulares hematopoyéticos (Smith et al., The TNF Receptor Superfamily of Cellular and Viral Proteins: Activation, Costimulation and Death, 76: 959-62, 1.994; Cosman, Stem Cells 12: 440-55, 1.994).

Uno de tales receptores es TACI (del inglés, transmembrane activator and CAML-interactor), activador de transmembrana e interaccionador con CAML (von Bülow y Bram, Science 228: 138-41, 1.997, y Publicación WIPO, WO 98/39361). TACI es un receptor unido a membrana que tiene un dominio extracelular que contiene dos seudorrepeticiones ricas en cisteína, un dominio transmembranal y un dominio citoplásmico que interacciona con CAML (del inglés, calcium-modulator and cyclophilin ligand), modulador de calcio y ligando de ciclofilina, una proteína integral de membrana situada en vesículas intracelulares que es un coinductor de la activación del factor nuclear de células T activadas (NF-AT; del inglés, nuclear factor of activated T cells) cuando se sobreexpresa en células Jurkat. TACI se asocia con células B y un subgrupo de células T. von Bülow y Bram (ibídem) comunican que no se conoce el ligando de TACI.

Se halló que los polipéptidos del presente invento, una isoforma de TACI que sólo tiene una seudorrepetición rica en cisteína (BR43x2), TACI y una proteína de células B relacionada, BCMA (Gras et al., Int. Immunol. 17: 1.093-106, 1.995), se unen al ligando de TNF, ztnf4, ahora conocido como neutroquina a (Publicación WIPO, WO 98/18921), BLyS (Moore et al., Science 285: 260-3, 1.999), BAFF (Schneider et al., J. Exp. Med. 189: 1.747-56, 1.999), TALL-1 (Shu et al., J. Leukoc. Biol. 65: 680-3, 1.999) o THANK (Mukhopadhyay et al., J. Biol. Chem. 274: 15.978-81, 1.999). Como tales, BR43x2, TACI y BCMA serían útiles para regular la actividad de ztnf4, en particular, la activación de células B.

Con este fin, el presente invento proporciona agentes proteicos terapéuticos para modular la actividad de ztnf4 u otros ligandos de BR43x2, TACI o BCMA, composiciones y métodos relacionados, así como otros usos que deberían ser evidentes para los expertos en la técnica a partir de las presentes enseñanzas.

El documento WO 98/39361 describe un receptor de superficie en los linfocitos al que se une CAML, los ácidos nucleicos que lo codifican y sus métodos de uso.

El documento Science 278 (1997), páginas 138-141, describe la activación de NF-AT inducida por un miembro de la superfamilia de los receptores para el Factor de Necrosis Tumoral que interacciona con CAML.

El presente invento proporciona el uso de un polipéptido que comprende la secuencia de SEQ ID Nº 10 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de asma, bronquitis, enfisema, nefritis, pielonefritis, neoplasmas renales, neuropatía asociada a cadenas ligeras, amiloidosis, enfermedad de Crohn, o inflamación asociada a dolor articular, edema o choque séptico en un mamífero.

En una realización, dicho polipéptido comprende los aminoácidos 34-66 de SEQ ID Nº 6. En una realización, dicho polipéptido comprende los aminoácidos 71-104 de SEQ ID Nº 6.

En una realización, dicho polipéptido está unido a un segundo polipéptido por un enlace peptídico para formar una proteína de fusión.

En una realización, la segunda porción es la región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina. En una realización, dicha región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina es la región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina humana. En una realización, dicha región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina humana es la región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina humana de la subclase IgG1.

En una realización, la segunda porción es un fragmento Fc de la región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina, que contiene dos dominios en la región constante y que carece de la región variable. En una realización, dicho fragmento Fc se obtiene a partir de IgG1 humana. En una realización, dicho fragmento Fc se modifica para eliminar la función de unión al receptor Fc y la función de unión al complemento (C1q).

En una realización, dicho medicamento comprende un multímero de dichas proteínas de fusión.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra una alineación múltiple entre las secuencias de aminoácidos de BR43x2, TACI (von Bülow y Bram, ibídem) (SEQ ID Nº 8), BCMA (Gras et al., ibídem) (SEQ ID Nº 6) y BR43x1 (SEQ ID Nº 9). Se indican las seudorrepeticiones ricas en cisteína y el dominio transmembranal.

La Figura 2 muestra un análisis gráfico de Scatchard de la unión de I¹²⁵-ztnf4 soluble a TACI y BCMA expresados por transfectantes BHK estables.

La Figura 3A muestra la coactivación de linfocitos B humanos por ztnf4 para que proliferen y secreten inmunoglobulina.

La Figura 3B muestra niveles de IgM e IgG medidos en sobrenadantes obtenidos de células B estimuladas con ztnf4 soluble en presencia de IL-4 o IL-4+IL-5 después de 9 días en cultivo.

La Figura 4 muestra células B humanas de sangre periférica estimuladas con ztnf4 soluble o proteína testigo (ubiquitina) en presencia de IL-4 durante 5 días in vitro. TACI-Ig, BCMA-Ig y Fc testigo purificados fueron ensayados en cuanto a la inhibición de la proliferación específica por ztnf4.

La Figura 5A muestra resultados de animales transgénicos en cuanto a ztnf4 que han desarrollado características de lupus sistémico eritematoso (SLE; del inglés, systemic lupus erythematosus).

La Figura 5B muestra células de ganglio linfático, bazo y timo procedentes de animales transgénicos en cuanto a ztnf4, teñidas con anticuerpos hacia CD5, CD4 y CD8.

La Figura 5C muestra niveles totales de IgM, IgG e IgE en suero de animales transgénicos en cuanto a ztnf4 con una edad que varía de 6 a 23 semanas.

La Figura 5D muestra el depósito de amiloide y el mesangio engrosado de los glomérulos identificados en secciones renales de animales transgénicos en cuanto a ztnf4.

La Figura 5E muestra células T efectoras en ratones transgénicos en cuanto a ztnf4.

Las Figuras 6A y 6B muestran niveles elevados de ztnf4 en suero obtenido de ratones ZNBWF1 y ratones MRL/lpr/lpr, que se correlacionan con el desarrollo de SLE.

La Figura 7 muestra el porcentaje de ratones NZBWF1 que desarrollan proteinuria a lo largo del curso del estu- dio.

La Figura 8 muestra niveles anti-DNA de cadena doble (dsDNA; del inglés, double stranded DNA), por ensayo de inmunoabsorción con enzimas ligadas (ELISA; del inglés, enzyme-linked immunosorbent assay), de ratones transgénicos en cuanto a ztnf4 y compañeros de camada testigo, comparados con los de suero de ratones ZNBWF1 y MRL/lpr/lpr.

Estos y otros aspectos del invento se harán evidentes por referencia a la descripción detallada siguiente.

Descripción detallada del invento

Antes de exponer el invento, puede ser útil para su comprensión la exposición de las definiciones de ciertas expresiones que se usarán más adelante.

Etiqueta de afinidad: se usa aquí para significar un segmento polipeptídico que puede ser fijado a un segundo polipéptido para proporcionar la purificación o detección del segundo polipéptido o para proporcionar sitios para la fijación del segundo polipéptido a un sustrato. En principio, como etiqueta de afinidad puede usarse cualquier péptido o proteína para el que se disponga de un anticuerpo u otro agente ligante específico. Las etiquetas de afinidad incluyen una extensión de polihistidina, proteína A (Nilsson...

1. Uso de un polipéptido que comprende la secuencia de SEQ ID Nº: 10 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de asma, bronquitis, enfisema, nefritis, pielonefritis, neoplasmas renales, neuropatía asociada a cadenas ligeras, amiloidosis, enfermedad de Crohn, o inflamación asociada al dolor articular, edema o choque séptico en un mamífero.

2. Uso según la reivindicación 1, en donde dicho polipéptido comprende los aminoácidos 34-66 de SEQ ID Nº: 6.

3. Uso según la reivindicación 1 o 2, en donde dicho polipéptido comprende los aminoácidos 71-104 de SEQ ID Nº: 6.

4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde dicho polipéptido está unido a un segundo polipéptido por un enlace peptídico para formar una proteína de fusión.

5. Uso según la reivindicación 4, en donde el segundo polipéptido es la región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina.

6. Uso según la reivindicación 5, en donde dicha región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina es la región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina humana.

7. Uso según la reivindicación 6, en donde dicha región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina humana es la región constante de IgG1.

8. Uso según la reivindicación 4, en donde el segundo polipéptido es el fragmento Fc de la región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina, que contiene dos dominios en la región constante y que carece de la región variable.

9. Uso según la reivindicación 8, en donde dicho fragmento Fc se obtiene a partir de IgG1 humana.

10. Uso según la reivindicación 8 o 9, en donde dicho fragmento Fc se modifica para eliminar la función de unión al receptor Fc y la función de unión al complemento (C1q).

11. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 4-10, en donde dicho medicamento comprende un multímero de dichas proteínas de fusión.

12. Un polipéptido que comprende la secuencia de SEQ ID Nº: 10 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de asma, bronquitis, enfisema, nefritis, pielonefritis, neoplasmas renales, neuropatía asociada a una cadena ligera, amiloidosis, enfermedad de Crohn, o inflamación asociada al dolor articular, edema o choque séptico en un mamífero.

13. Un polipéptido según la reivindicación 12, en donde dicho polipéptido comprende los aminoácidos 34-66 de SEQ ID Nº: 6.

14. Un polipéptido según la reivindicación 12 o 13, en donde dicho polipéptido comprende los aminoácidos 71-104 de SEQ ID Nº: 6.

15. Un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 12-14, en donde dicho polipéptido está unido a un segundo polipéptido por un enlace peptídico para formar una proteína de fusión.

16. Un polipéptido según la reivindicación 15, en donde el segundo polipéptido es la región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina.

17. Un polipéptido según la reivindicación 16, en donde dicha región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina es la región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina humana.

18. Un polipéptido según la reivindicación 17, en donde dicha región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina humana es la región constante de IgG1.

19. Un polipéptido según la reivindicación 15, en donde el segundo polipéptido es el fragmento Fc de la región constante de una cadena pesada de una inmunoglobulina, que contiene dos dominios en la región constante y que carece de la región variable.

20. Un polipéptido según la reivindicación 19, en donde dicho fragmento Fc se obtiene a partir de IgG1 humana.

21. Un polipéptido según la reivindicación 19 o 20, en donde dicho fragmento Fc se modifica para eliminar la función de unión al receptor Fc y la función de unión al complemento (C1q).

22. Un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 15-21, en donde dicho medicamento comprende un multímero de dichas proteínas de fusión.