Una composición inmunogénica que comprende una proteína recombinante,

en donde la proteína recombinante comprende una CyaA de Bordetella o un fragmento de esta, y un péptido que corresponde a un péptido correspondiente a un antígeno de melanoma o un epitope derivado de un antígeno de melanoma, en donde dicho péptido es un epitope HLA-A*0201 derivado de la tirosinasa que es la región 369-377 de la tirosinasa o YMDGTMSQV

Toxina de adenilato ciclasa recombinante de Bordetella que induce las respuestas de la célula T contra los antígenos tumorales.

La invención se relaciona con una toxina adenilato ciclasa recombinante de Bordetella que induce las respuestas de la célula T contra los antígenos tumorales.

Antecedentes de la invención

Esta invención se relaciona con las composiciones y métodos para el tratamiento del cáncer.

En muchos modelos de tumores de animales, las células T juegan un papel importante en el rechazo del tumor. Una variedad de antígenos tumorales reconocidos por células T CD4+ o CD8+ reactivas al tumor, han sido identificados en ambos tumores humano y murino (1). Los linfocitos citotóxicos CD8+ (CTL) son de particular interés ya que estas células reconocen específicamente las células tumorales y las matan. Por lo tanto, un objetivo importante en inmunoterapia del cáncer es activar los CTL específicos del tumor.

El estudio de antígenos reconocidos por la células T CD8+ en melanoma humano ha identificado varios epitopes del tumor restringido por MHC que corresponden a péptidos no-mutados o mutados, derivados de diferentes proteínas propias (2). Varios de estos péptidos se derivan de proteínas de diferenciación no-mutadas tales como tirosinasa, Melan-A/Mart-1, y gp100. Estas proteínas se expresan específicamente en la mayoría de los melanocitos/melanomas, y de esta manera, los epitopes restringidos de HLA se presentan por la mayoría de las células de melanoma a partir de pacientes que expresan las moléculas de HLA relevantes. Por lo tanto, estos antígenos podrían ser los objetivos de las estrategias de inmunoterapia que se basan en la inmunización contra epitopes tumorales.

Otros antígenos expresados en las células tumorales también han sido descritos, por ejemplo, un péptido derivado de una secuencia de intrón del gen que codifica la N-acetilglucosaminil-transferasa V (GnT-V) (3). Este intrón se expresa específicamente en las células de melanoma y está presente en aproximadamente el 50% de las células de melanoma.

Varios protocolos de vacunación diseñados para inducir las respuestas CTL anti-tumor específicas contra estos epitopes, se han desarrollado, incluyendo protocolos que utilizan péptido libre en IFA (4), vectores virales recombinantes (5-7), o células dendríticas (8-11). La aplicación de estas estrategias para la vacunación humana sigue siendo limitada debido a la potencial toxicidad de los adyuvantes, sesgo hacia la respuesta contra el péptido epitópico derivado del vector, o porque son "que requieren mano de obra" (DC manipulado in vitro).

Previamente, los plásmidos recombinantes han sido utilizados para la expresión de adenilato ciclasa (cyaA) de Bordetella sp. y un ADN heterólogo insertado en un sito permisivo de CyaA. Estos plásmidos y las proteínas recombinantes resultantes han sido útiles para inducir respuestas inmunes. Las respuestas inmunes obtenidas han sido en los linfocitos T CD8+ con los complejos de histocompatibilidad principales de la clase I, así como en los linfocitos T CD4+ con los complejos de histocompatibilidad de la clase II principal. (Ver U.S. Patent Nos. 5,503,829, 5,679,784, y 5,935,580). Más específicamente, las proteínas recombinantes se pueden transferir a las células que expresan CD11b, tales como células dendríticas. (Ver European Patent Application EP1 188 446 A1, "Proteinaceous vectors for molecule delivery to CD11b expressing cells", and WO/2122169 A2 "Vectors for Molecule Delivery to CD11 b Expressing Cells", corresponding to U.S. Patent Application 387,486, and European Patent Application No. 03291486.3, "Modified Bordetella Adenylate Cyclase Comprising or Lacking CD11b/CD18 Interaction Domain and Uses thereof"). Ver también, El-Azami-El-Idrissi, et al., 2003, Interaction of Bordetella pertussis Adenylate Cyclase with CD11b/CD18, J. Biol. Chem., vol. 278, pp. 38514-21.

Existe una necesidad en el oficio, para nuevos tratamientos antitumor que permiten la orientación específica a las células inmunes y las respuestas de la célula T. Estas nuevas estrategias deberían dar lugar a la amplificación específica de respuestas inmunes contra los antígenos tumorales.

Breve resumen de la invención

Esta invención ayuda al cumplimiento de las necesidades en el oficio, proporcionando las proteínas de CyaA recombinantes que inducen respuestas inmunes. Estas respuestas se pueden dirigir a los antígenos tumorales.

La invención proporciona métodos novedosos para el tratamiento del cáncer y una composición inmunogénica como se define en las reivindicaciones.

La aplicación proporciona una composición inmunogénica que comprende una proteína recombinante, en donde la proteína recombinante comprende una adenilato ciclasa (CyaA) de Bordetella y un péptido que corresponde a un antígeno del tumor.

La aplicación revela un método para tratar un paciente con cáncer que comprende (1) la administración de una composición inmunogénica al paciente, en donde la composición inmunogénica comprende una proteína recombinante, en donde la proteína recombinante comprende una CyaA de Bordetella o un fragmento específico de esta, y un péptido que corresponde a un antígeno del tumor, y (2) inducir una respuesta inmune, tal como una respuesta de la célula T, en el paciente.

La aplicación describe un método para tratar un paciente con cáncer que comprende (1) la administración de una composición inmunogénica al paciente, en donde la composición inmunogénica comprende un vector que expresa una proteína recombinante, en donde la proteína recombinante comprende CyaA de Bordetella o un fragmento específico de esta, y un péptido que corresponde a un antígeno del tumor, y (2) inducir una respuesta de la célula T en el paciente.

La respuesta de la célula T es una respuesta CTL o una respuesta auxiliar T o un CTL y una respuesta auxiliar T.

De acuerdo con la invención, el tumor es un melanoma.

De acuerdo con la invención, el antígeno del tumor es un epitope HLA*0201.

En la invención se abarca la proteína recombinante CyaA-E5-Tyr.

En otra modalidad de la invención, la proteína recombinante comprende más de un antígeno del tumor. En una modalidad particular, al menos un antígeno del tumor es diferente del otro(s).

El antígeno del tumor se localiza en cualquier sitio permisivo de CyaA.

En una modalidad de la invención CyaA es del Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, o Bordetella bronchiseptica. En una modalidad preferida CyaA es del Bordetella pertussis.

La invención también proporciona una composición inmunogénica que comprende una proteína recombinante, en donde la proteína recombinante comprende al menos un fragmento específico de la proteína adenilato ciclasa que se reconoce como un ligando en las células humanas y animales, y al menos un epitope como se define en las reivindicaciones. En la proteína recombinante de la composición inmunogénica CyaA y el antígeno tumoral puede ser tanto genéticamente fusionado como unido químicamente (WO 02/22169).

La invención también proporciona una secuencia de ácido nucleico que codifica una proteína de fusión que comprende CyaA de Bordetella, o un fragmento específico de esta, y un péptido que corresponde a un antígeno que comprende el epitope Tyr, como se define en las reivindicaciones. En una modalidad particular, dicha secuencia se incluye en el plásmido depositado en C.N.C.M., Paris, France, el 31 de Mayo, 2001 bajo el número de acceso I-2679.

Otra modalidad de la invención, es un vector que expresa una proteína recombinante que comprende la CyaA de Bordetella, o un fragmento específico de esta, y un péptido que corresponde a un antígeno que comprende el epitope Tyr, como se define en las reivindicaciones. En una modalidad particular, dicho vector ha sido depositado en C.N.C.M., Paris, France, el 31 de Mayo, 2001, bajo el número de acceso I-2679.

La invención además abarca una célula huésped, que expresa una proteína recombinante que comprende la CyaA de Bordetella, o un fragmento específico de esta, y un péptido que corresponde a un antígeno que comprende el epitope Tyr, como se define en las reivindicaciones. En una modalidad particular, la célula huésped expresa el vector que ha sido depositado en C.N.C.M., Paris, France, el 31 de Mayo, 2001, bajo el número de acceso...

1. Una composición inmunogénica que comprende una proteína recombinante, en donde la proteína recombinante comprende una CyaA de Bordetella o un fragmento de esta, y un péptido que corresponde a un péptido correspondiente a un antígeno de melanoma o un epitope derivado de un antígeno de melanoma, en donde dicho péptido es un epitope HLA-A*0201 derivado de la tirosinasa que es la región 369-377 de la tirosinasa o YMDGTMSQV.

2. La composición inmunogénica como se reivindica en la reivindicación 1, en donde la CyaA de Bordetella, o fragmento de esta, y el péptido son genéticamente fusionados o unidos químicamente juntos.

3. La composición inmunogénica como se reivindica en la reivindicación 1 o 2, en donde la CyaA de Bordetella es desintoxicada o carece de actividad catalítica.

4. La composición inmunogénica como se reivindica en la reivindicación 1, en donde la proteína recombinante es:

- una proteína recombinante que comprende CyaA de Bordetella o un fragmento específico de esta, carente de la actividad catalítica, y el péptido de secuencia YMDGTMSQV (pTyr), o

- una proteína de fusión que comprende CyaA de Bordetella pertussis y un péptido que corresponde a un antígeno que comprende el epitope Tyr y que se codifica por la secuencia incluida en el plásmido depositado en la CMCM bajo el número I-2679.

5. La composición inmunogénica como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la proteína recombinante comprende más de un péptido.

6. La composición inmunogénica como se reivindica en la reivindicación 5 en donde los péptidos son iguales o al menos uno es diferente del otro(s).

7. La composición inmunogénica como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en donde dicho péptido se localiza en cualquier sito permisivo de CyaA.

8. La composición inmunogénica como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en donde dicho péptido incluye las regiones Blanqueadoras.

9. La composición inmunogénica de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el péptido es: SSMHNALHIYMDG TMSQVQGSANDPI.

10. La composición inmunogénica como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en donde la composición se utiliza como una inmunoterapia.

11. La composición inmunogénica como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o 5 a 10, en donde la CyaA de Bordetella es del B. pertussis, B. parapertussis, o B. bronchiseptica.

12. Una composición inmunogénica que comprende un vector, en donde dicho vector expresa una proteína recombinante como se define en la composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11.

13. Un ácido nucleico que codifica una proteína de fusión, en donde la proteína de fusión comprende una CyaA de Bordetella o un fragmento de esta, y un péptido como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

14. Un vector que expresa una proteína recombinante, en donde la proteína recombinante comprende la CyaA Bordetella o un fragmento de esta, y un péptido como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

15. El plásmido depositado en C.N.C.M., bajo el número de acceso I-2679.

16. Una composición inmunogénica que comprende un vector que expresa una proteína recombinante, como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, para utilizar en el tratamiento de un paciente con cáncer, para inducir una respuesta de la célula T en dicho paciente.

17. Una composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 superficial en la célula tumoral, para utilizar en el tratamiento de un paciente con cáncer, para inducir una respuesta de la célula T en dicho paciente.

18. Una composición inmunogénica de acuerdo con reivindicación 16 o 17, en donde la respuesta de la célula T, es una respuesta CTL.

19. Uso de una composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, para la preparación de un fármaco para el tratamiento del cáncer.

20. Uso de una composición inmunogénica de acuerdo con la reivindicación 19, en donde dicho cáncer es un melanoma.

21. Una composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para el tratamiento del cáncer.

22. Una composición inmunogénica de acuerdo con reivindicación 21, en donde dicho cáncer es un melanoma.