OLIGONUCLEOTIDOS ANTISENTIDO CAPACES DE INHIBIR LA FORMACION DE TUBOS CAPILARES.

Composición farmacéutica que comprende, como agente activo, la secuencia SEC.

ID Nº 3 o un fragmento de dicha secuencia que comprende al menos doce nucleótidos contiguos

Oligonucleótidos antisentido capaces de inhibir la formación de tubos capilares.

El objeto de la presente invención son los oligonucleótidos antisentido capaces de inhibir la expresión de la proteína IRS-1 y la formación de tubos capilares por las células endoteliales. Por lo tanto, los oligonucleótidos según la invención son indicados como agentes antiangiogénicos. También son indicados como agentes antimultiplicación celular, en particular como agentes antitumorales.

La invención se refiere también a composiciones farmacéuticas que contienen dichos oligonucleótidos y al uso de dichos oligonucleótidos como reactivos de análisis.

La angiogénesis es un proceso fundamental mediante el que se forman nuevos vasos sanguíneos. Este proceso es esencial en varios fenómenos fisiológicos normales como la reproducción, el desarrollo o incluso la cicatrización. En esos fenómenos biológicos normales la angiogénesis está bajo control estricto, es decir que se activa durante un período corto (algunos días) y después se inhibe completamente. No obstante, diversas patologías están relacionadas con una angiogénesis invasiva e incontrolada; la artritis, una patología debida al daño de los cartílagos por los neovasos invasivos; la retinopatía diabética, donde la invasión de la retina por los neovasos provoca la ceguera de los enfermos; la neovascularización del aparato ocular constituye la principal causa de la ceguera y esta neovascularización interviene en una veintena de enfermedades oculares; o incluso el crecimiento y la metástasis de los tumores directamente relacionados con la neovascularización y que son dependientes de la angiogénesis. El tumor estimula el crecimiento de los neovasos para su propio crecimiento. Además, esos neovasos son vías de escape de los tumores, que llegan así a la circulación sanguínea y provocan metástasis en lugares alejados del foco tumoral inicial, como el hígado, los pulmones o los huesos.

La formación de neovasos por las células endoteliales, la angiogénesis, implica la migración, el crecimiento y la diferenciación de las células endoteliales. La regulación de esos fenómenos biológicos está directamente relacionada con la expresión genética.

De este modo, los trabajos de investigación realizados en el marco de la presente invención han permitido identificar y preparar secuencias de ácido nucleico implicadas en la regulación de la angiogénesis.

Otros trabajos referidos a la angiogénesis han permitido revelar una expresión importante y una fosforilación, a nivel de un residuo de tirosina de una proteína intracelular de 180 kDa, por las células endoteliales cultivadas sobre un lecho de colágeno tipo I y estimuladas por un factor angiogénico como el bFGF. La expresión importante y la fosforilación a nivel del residuo de tirosina de la proteína intracelular de 180 kDa acompañan a la formación de tubos capilares por las células endoteliales.

Esta proteína ya es conocida como sustrato del receptor de la insulina (llamado IRS-1). En efecto, ha sido parcialmente identificada y estudiada por algunos investigadores que trabajan en el tema de la diabetes (Quon et al., J. Biol. Chem. (1994), 269 (45), 27920-27924).

Esos investigadores han estudiado el papel de la IRS-1 sobre (i) la translocación del GLUT 4 estimulada por la insulina y (ii) el transporte de glucosa en células adiposas de rata. Para ello se ha construido un plásmido que contiene:

- un oligonucleótido bicatenario, obtenido a partir del oligonucleótido en sentido normal de secuencia SEC. ID Nº 1 siguiente: 5' -TCGATGTGAC GCTACTGATG AGTCCGTGAG GACGAAACTC TGGCCTAG-3', y

- el ADNc codificador para la IRS-1 humana,

y se han transfectado células adiposas de rata con dicho plásmido.

Por otra parte, diferentes investigadores se han interesado por la inhibición de IRS-1; por ejemplo, el documento WO9635791 describe la inhibición de IRS-1 por ribozimas y su aplicación como agente antimultiplicación celular, en particular como agente antitumoral. No obstante, el documento WO9635791 no presenta una solución que permita inhibir de manera eficaz la expresión de IRS-1, proteína implicada en un gran número de enfermedades relacionadas con la angiogénesis.

El artículo MOL. BRAIN RES. 52 (1997), 213-27 muestra que la proteína precursora de amiloide (PPA) potencia la actividad neurotrófica del factor de crecimiento neural (FCN) en comparación con la línea celular inmortalizada PC12. Por lo tanto, este estudio se refiere al crecimiento de las neuronas y al efecto sinérgico de la proteína precursora de amiloide (PPA) y del factor de crecimiento neural (FCN) sobre el estado trófico neural. Asimismo, muestra que la incubación de células que no han sido tratadas previamente con oligonucleótidos antisentido de IRS-1 provoca la inhibición del crecimiento neural estimulado por la PPA. Sin embargo, los factores extracelulares utilizados en este artículo (FCN y PPA) no tienen ninguna relación con la angiogénesis.

El artículo CLIN. CANCER RES. 1 (1995), 1429-36 describe la acción sinérgica del estrógeno y de los factores de crecimiento análogos de la insulina (FCI) para promover el crecimiento de varias líneas celulares del cáncer de pulmón. Este artículo indica asimismo que la sobreexpresión de IRS-1 produce una respuesta celular aumentada a FCI-1 para esta línea de células del cáncer de mama. Esta confirmación se aporta mediante la aplicación de una estrategia antisentido, en la que se ha demostrado que la utilización de un ARN antisentido de IRS-1 o de una ribozima anti-IRS-1 inhibe la proliferación de las células MCF-7 y su dependencia del estrógeno.

No obstante, ninguno de esos documentos describe ni sugiere que un oligonucleótido antisentido de IRS-1 sería útil como principio activo en una composición farmacéutica destinada al tratamiento de enfermedades relacionadas con la angiogénesis.

Los trabajos realizados en el marco de la presente invención han revelado el hecho de que la expresión de la proteína IRS-1 se induce también en las células endoteliales cuando estas últimas son estimuladas mediante el factor angiogénico bFGF.

Por lo tanto, la invención se refiere a una composición farmacéutica activa sobre los fenómenos de angiogénesis que comprende como agente activo al menos una sustancia elegida entre: (i) una molécula de ácido nucleico del gen codificador para la proteína IRS-1, de una secuencia complementaria o de un fragmento de ésta o un fragmento de ésta, (ii) una molécula capaz de inhibir la expresión de una molécula de ácido nucleico según (i).

En el marco de la invención, se han preparado oligonucleótidos antisentido del gen codificador para esta proteína. Esos oligonucleótidos presentan notables actividades antiangiogénicas y antitumorales. Por lo tanto, son particularmente útiles para el tratamiento de las enfermedades relacionadas con una angiogénesis invasiva y no controlada mediante métodos de terapias génicas consistentes en administrar a un individuo una composición que contiene al menos uno de esos oligonucleótidos.

De este modo, un oligonucleótido según la invención está constituido por la secuencia nucleotídica de fórmula SEC. ID. Nº 3 siguiente:

1. Composición farmacéutica que comprende, como agente activo, la secuencia SEC. ID Nº 3 o un fragmento de dicha secuencia que comprende al menos doce nucleótidos contiguos.

2. Composición farmacéutica según la reivindicación 1 en la que el agente activo está asociado en dicha composición con un vehículo aceptable elegido entre las suspensiones acuosas, las soluciones salinas isotónicas y las soluciones estériles inyectables.

3. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, que se caracteriza porque se presenta en una forma adaptada a una administración por vía subcutánea, intramuscular, intravenosa o transdérmica.

4. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que se caracteriza porque comprende de 0,001 mg a 50 mg de agente activo.

5. Uso de la secuencia SEC. ID Nº 3 o de un fragmento de dicha secuencia que comprende al menos doce nucleótidos contiguos como agente activo para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento de las patologías relacionadas con la angiogénesis.

6. Uso según la reivindicación 5 de la secuencia SEC. ID Nº 3 o de un fragmento de dicha secuencia de al menos doce nucleótidos contiguos como agente activo para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento de las enfermedades oculares relacionadas con la neovascularización.

7. Uso según la reivindicación 5 de la secuencia SEC. ID Nº 3 o de un fragmento de dicha secuencia de al menos doce nucleótidos contiguos como agente activo para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento de la neovascularización corneana.

8. Uso según la reivindicación 5 de la secuencia SEC. ID Nº 3 o de un fragmento de dicha secuencia de al menos doce nucleótidos contiguos como agente activo para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento de las retinopatías.

9. Uso según la reivindicación 5 de la secuencia SEC. ID Nº 3 o de un fragmento de dicha secuencia de al menos doce nucleótidos contiguos como agente activo para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento de la retinopatía diabética.

10. Uso según la reivindicación 5 de la secuencia SEC. ID Nº 3 o de un fragmento de dicha secuencia de al menos doce nucleótidos contiguos como agente activo para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento de la degeneración macular relacionada con la edad (DMRE).

11. Uso según la reivindicación 5 de la secuencia SEC. ID Nº 3 o de un fragmento de dicha secuencia de al menos doce nucleótidos contiguos como agente activo para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento de la psoriaris.

12. Uso según la reivindicación 5 de la secuencia SEC. ID Nº 3 o de un fragmento de dicha secuencia de al menos doce nucleótidos contiguos como agente activo para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento de la superproducción tisular debida a la cicatrización.

13. Uso según la reivindicación 5 de la secuencia SEC. ID Nº 3 o de un fragmento de dicha secuencia de al menos doce nucleótidos contiguos como agente activo para la fabricación de un medicamento útil para el tratamiento de tumores.

14. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 13, en la que dicho agente activo está asociado en dicho medicamento con un vehículo aceptable elegido entre suspensiones acuosas, soluciones salinas isotónicas o soluciones estériles inyectables.

15. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 14, que se caracteriza porque dicho medicamento se presenta en una forma que puede administrarse por vía subcutánea, intramuscular, intravenosa o transdérmica.

16. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 15, que se caracteriza porque el medicamento comprende de 0,001 mg a 50 mg de agente activo.