Inmunógeno en forma estéril apto para la administración a un sujeto humano que comprende:

(1) una parte del 55 al 95% de la secuencia de aminoácidos de la proteína gag de VIH, procediendo dicha proteína gag de un clado de VIH o una parte del 55 al 95% de la secuencia de aminoácidos de una proteína gag procedente de una secuencia de consenso para uno o más clados de VIH; (2) polipéptidos de p17 y p24 en orden inverso en comparación con la proteína gag vírica y que comprende por lo menos un epítopo de clase I de MHC y por lo menos epítopo de clase II de MHC que estimula las células colaboradoras CD4+; y (3) un polipéptido sintético que comprende por lo menos 10 epítopos de CTL humanos CD8+ de una proteína del VIH enumerada en la Tabla 1, y estando representada una diversidad de proteínas del VIH en el polipéptido sintético, estando seleccionados dichos epítopos de CTL para estimular una respuesta inmunitaria a uno o más clados de VIH de interés

Mejoras en las respuestas inmunitarias al VIH o relacionadas con las mismas.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un inmunógeno diseñado para provocar una respuesta inmunitaria anti-VIH en un sujeto humano (en particular, una respuesta mediada por células), a una molécula de ácido nucleico que codifica el inmunógeno, a las composiciones que comprenden el inmunógeno y/o a la molécula de ácido nucleico y a la utilización del inmunógeno y/o a la molécula de ácido nucleico en la preparación de un medicamento destinado a prevenir y/o tratar la infección por VIH en un sujeto humano.

Antecedentes de la invención

El desarrollo de vacunas eficaces contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) es uno de los principales objetivos de la investigación actual del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). A pesar del avance en la prevención y de las potentes combinaciones de fármacos para tratar la infección contra el VIH, se estima que cada día se infectan unas 16.000 personas. Más del 90% de las nuevas infecciones se producen en países en desarrollo para los cuales los recientes avances médicos no son aplicables o posibles inmediatamente. La mejor expectativa para estos países es el desarrollo de una vacuna eficaz y accesible contra el VIH. Actualmente, existe un optimismo creciente entre los científicos de que puede ser posible una vacuna contra el SIDA (McMichael y Hanke 1999 Nat. Med. 5, 612-614; Gold 1999 IAVI Report 4, páginas 1-2, 8-9, 15-16 y 18).

Una teórica vacuna profiláctica provocaría inmunidad esterilizadora, de modo que tras la exposición, el virus no se detectaría nunca en el cuerpo. Sin embargo, esto es probablemente un objetivo irrealista. En su lugar, un objetivo alcanzable puede ser una inmunidad provocada por la vacuna que dé cómo resultado una replicación limitada y transitoria del virus tras la cual el virus se vuelve indetectable, no existen signos de enfermedad ni ninguna transmisión a otros individuos. Alternativamente, una vacuna potencialmente lograda puede provocar respuestas inmunitarias que por lo menos mantienen al virus en comprobación a niveles tan bajos, que tanto la evolución para el SIDA como la transmisión se evitan completa o sustancialmente.

Para provocar inmunidad esterilizadora, puede necesitarse una vacuna profiláctica para provocar respuestas inmunitarias tanto humorales como mediadas por las células. Ya que el VIH fue aislado y secuenciado, se ha realizado un considerable esfuerzo para desarrollar vacunas basadas en la envoltura que produzcan anticuerpos neutralizantes (nAb). Sin embargo, esto ha demostrado ser sumamente difícil (Heilman y Baltimore 1998 Nat. Med. 4 (4 Supl.) 532-534). Aunque se publicó algún logro en la producción de nAb contra cepas de VIH de laboratorio (Berman et al. 1990 Nature 345, 622-625; Fultz et al. 1992 Science 256, 1687-1690), ha sido sumamente difícil neutralizar cepas primarias (Trkola et al. 1998 J. Virol. 72, 1876-1885; Haynes 1996 Lancet 34, 933-937). Una explicación para los primeros 15 años de insuficiencia relativa ha sido proporcionada por la estructura cristalina del núcleo gp 120, que puso de manifiesto múltiples mecanismos mediante los cuales el VIH evita la producción eficaz de nAb (Wyatt et al. 1998 Nature 393, 705-711; Kwong et al. 1998 Nature 393, 638-659). Como resultado de estas dificultades, el énfasis de muchos diseñadores de vacunas se ha desplazado a la producción de respuestas inmunitarias mediadas por células, que son mediadas (fundamentalmente) por linfocitos T citotóxicos.

Los linfocitos T citotóxicos (CTL) son normalmente células CD8⁺ y participan en una defensa del organismo por lo menos de dos maneras diferentes: destruyen las células infectadas por virus; y segregan una variedad de citocinas y quimiocinas que contribuyen directa o indirectamente a la supresión de la replicación vírica. La protección mediada por CTL tras la vacunación puede depender de las concentraciones de CTL presentes en la circulación y, quizás, específicamente de las proteínas expresadas inicialmente (proteínas reguladoras) en lugar de las últimas (proteínas estructurales), en el ciclo de replicación.

La provocación y mantenimiento de las respuestas de los linfocitos T CD8⁺ requieren la "ayuda" proporcionada por los linfocitos T CD4⁺ (linfocitos T colaboradores). En algunos individuos infectados por el VIH, se han detectado elevadas concentraciones de respuesta de colaborador específico para el VIH.

La identificación de los procedimientos para la provocación de respuestas potentes a linfocitos T CD8⁺ proporcionaría las herramientas para estudiar su función o funciones en el dimensionamiento del curso de la infección por VIH y puede estimular la evolución hacia una vacuna eficaz contra el VIH. Previamente, se construyó una vacuna prototipo contra el VIH como una serie de epítopos parcialmente solapantes reconocidos por los CTL murino, de macaco y humano, que fueron administrados por los vehículos de la vacuna que eran seguros y aceptables para su utilización en seres humanos, un vector de ADN y el vector Ankara del virus de la vacuna modificado (MVA) (Hanke et al. 1998 Vaccine 16, 426-435; Hanke et al. 1998 J. Gen. Virol. 79, 83-90). En ratones, el protocolo más potente para la producción de CTL se observó que era el cebado con ADN seguido de refuerzo con MVA (Hanke et al. 1998 Vaccine 16, 439-445; Schneider et al., 1998 Nat. Med. 4, 397-402) es decir, cebando ratones con el ácido nucleico que codifica el polipéptido adecuado, seguido del refuerzo de los ratones mediante inoculación con un vector Ankara del virus de la vacuna modificado ("MVA") que expresan los epítopos adecuados.

El documento WO 98/56919 da a conocer una estrategia de vacunación de "cebado-refuerzo", que implica (i) cebar con una composición que comprende una fuente de uno o más epítopos de linfocitos T de un antígeno diana, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable, y (ii) reforzar con una composición que comprende una fuente de uno o más epítopos de linfocitos T del antígeno diana, incluyendo por lo menos un epítopo de linfocito T que es el mismo que un epítopo del linfocito T de la composición de cebado.

El objetivo de la presente invención es, inter alia, proporcionar inmunógenos que pueden ser útiles para provocar una respuesta específica contra VIH en seres humanos.

Sumario de la invención

En un primer aspecto, la invención proporciona un inmunógeno en forma estéril adecuado para la administración a un sujeto humano que comprende: (1) una parte del 55 al 95% de la secuencia de aminoácidos de la proteína gag de VIH, procediendo dicha proteína gag de un clado de VIH o una parte del 55 al 95% de la secuencia de aminoácidos de una proteína gag procedente de una secuencia de consenso para uno o más clados de VIH; (2) polipéptidos de p17 y p24 en orden inverso en comparación con la proteína gag vírica y que comprende por lo menos un epítopo de clase I de MHC y por lo menos epítopo de clase II de MHC que estimula las células colaboradoras CD4⁺; y (3) un polipéptido sintético que comprende por lo menos 10 epítopos de CTL humanos CD8⁺ de una proteína del VIH enumerada en la Tabla 1, y en la que una diversidad de proteínas del VIH están representadas en el polipéptido sintético, seleccionándose dichos hbox{epítopos de CTL para estimular una respuesta inmunitaria a uno o más clados de VIH de interés.}

Para los presentes fines "estéril" se refiere a la ausencia general de virus, bacterias, hongos, levaduras, clamidia, micoplasma y esporas de alguno de los anteriores (especialmente microbios patógenos en seres humanos). Sin embargo, el inmunógeno puede comprender uno o más vectores microbianos específicos conocidos (por ejemplo víricos o bacterianos) que sirven para expresar la proteína gag y/o el polipéptido sintético en un sujeto humano. Dichos vectores son bien conocidos por los expertos en la materia e incluyen, por ejemplo, virus tales como adenovirus y virus aviares que son intrínsecamente no patógenos en seres humanos o que han estado sometidos a manipulación genética o a otra modificación para hacerlos no patógenos en seres humanos. Se prefiere particularmente el virus de vacuna, especialmente el virus Ankara de vacuna modificado (MVA). Otros vectores víricos específicos preferidos incluyen el virus de Semliki Forest (SFV) y el virus de Sindbis (véase...

1. Inmunógeno en forma estéril apto para la administración a un sujeto humano que comprende: (1) una parte del 55 al 95% de la secuencia de aminoácidos de la proteína gag de VIH, procediendo dicha proteína gag de un clado de VIH o una parte del 55 al 95% de la secuencia de aminoácidos de una proteína gag procedente de una secuencia de consenso para uno o más clados de VIH; (2) polipéptidos de p17 y p24 en orden inverso en comparación con la proteína gag vírica y que comprende por lo menos un epítopo de clase I de MHC y por lo menos epítopo de clase II de MHC que estimula las células colaboradoras CD4⁺; y (3) un polipéptido sintético que comprende por lo menos 10 epítopos de CTL humanos CD8⁺ de una proteína del VIH enumerada en la Tabla 1, y estando representada una diversidad de proteínas del VIH en el polipéptido sintético, estando seleccionados dichos epítopos de CTL para estimular una respuesta inmunitaria a uno o más clados de VIH de interés.

2. Inmunógeno según la reivindicación 1, en el que dicha proteína gag y el polipéptido sintético están presentes como una proteína de fusión.

3. Inmunógeno según la reivindicación 1 ó la reivindicación 2, en el que está presente del 65 al 85% de la secuencia de aminoácidos de la proteína gag.

4. Inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que por lo menos alguno de los epítopos de CTL humanos presentes en el polipéptido sintético son solapantes.

5. Inmunógeno según la reivindicación 4, en el que por lo menos el 50% de epítopos de CTL humanos presentes en el polipéptido sintético son solapantes.

6. Inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que por lo menos alguno de los epítopos de CTL humanos presentes en el polipéptido sintético son adyacentes.

7. Inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que por lo menos alguno de los epítopos de CTL humanos están separados por la secuencia de aminoácidos no epitópicos.

8. Inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende por lo menos un epítopo que es reconocido por uno o más mamíferos del ensayo de laboratorio.

9. Inmunógeno según la reivindicación 10, en el que dicho epítopo reconocido por uno o más mamíferos del ensayo de laboratorio es un epítopo de CTL.

10. Inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el polipéptido sintético comprende por lo menos 10 de los epítopos de CTL humanos identificados en la Tabla 1.

11. Inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el polipéptido sintético comprende por lo menos 20 de los epítopos de CTL humanos identificados en la Tabla 1.

12. Inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el polipéptido sintético comprende todos los 23 epítopos de CTL humanos identificados en la Tabla 1.

13. Inmunógeno de VIH para un sujeto humano que comprende: (1) una parte del 55 al 95% de la secuencia de aminoácidos de la proteína gag, procediendo dicha proteína gag de un clado de VIH o una parte del 55 al 95% de la secuencia de aminoácidos de una proteína gag procedente de uno o más clados de VIH de interés; (2) polipéptidos de p17 y p24 en orden inverso en comparación con la proteína gag vírica y que comprende por lo menos un epítopo de clase I de MHC y por lo menos un epítopo de clase II de MHC que estimula las células colaboradoras CD4⁺; y (3) un polipéptido sintético que comprende por lo menos 10 epítopos de CTL humanos CD8⁺ de una pluralidad de proteínas del VIH diferentes enumeradas en la Tabla 1, presentando el epítopo de CTL entre 8 y 12 aminoácidos, y seleccionándose dichos epítopos de CTL para estimular una respuesta inmunitaria al clado de interés.

14. Inmunógeno de VIH según la reivindicación 13, en el que dicho polipéptido sintético tiene por lo menos un epítopo inmunógeno reconocido por un animal de laboratorio.

15. Inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la SEC. ID. nº 26.

16. Inmunógeno según la reivindicación 15, constituido por la secuencia de aminoácidos representada en la figura SEC. ID. nº 26.

17. Inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho clado de interés se selecciona de entre el grupo constituido por el clado A, B, C, D, E, F, G y H del VIH.

18. Inmunógeno según la reivindicación 17, en el que dicho clado de interés es el clado A del VIH.

19. Inmunógeno según la reivindicación 17, en el que dicho clado de interés es el clado B del VIH.

20. Inmunógeno según la reivindicación 17, en el que dicho clado de interés es el clado C del VIH.

21. Inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dichos epítopos de CTL humanos incluyen por lo menos un epítopo de entre cada una de las proteínas nef, p24, p17, pol, gp41y gp120 del VIH.

22. Inmunógeno según la reivindicación 21, en el que dichos epítopos de CTL humanos incluyen por lo menos un epítopo de entre cada una de las proteínas nef, p24, p17, pol, gp41, gp120, tat y rev del VIH.

23. Inmunógeno según la reivindicación 21, en el que dichos epítopos de CTL humanos incluyen por lo menos un epítopo de entre cada una de las proteínas nef, p24, p17, pol, gp41, gp120, tat, rev, vpr, vpu y vif del VIH.

24. Molécula de ácido nucleico que codifica un inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

25. Ácido nucleico según la reivindicación 24, en el que el inmunógeno es codificado como proteína de fusión.

26. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 24 ó 25, que comprende la secuencia nucleotídica representada en la SEC. ID. nº 27.

27. Vector que comprende una molécula de ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 24, 25 ó 26.

28. Vector en partículas según la reivindicación 27, que comprende además un inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23.

29. Utilización de un inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 y/o una molécula de ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 26, en la preparación de un medicamento destinado a prevenir o a tratar la infección por VIH en un sujeto humano.

30. Bacteria que comprende un inmunógeno según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, o que comprende una molécula de ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 26.

31. Bacteria según la reivindicación 30 que es un patógeno atenuado apto para su administración a un sujeto humano.

32. Molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la SEC. ID. nº 32.

33. Molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que está constituido por la secuencia de aminoácidos representada en la SEC. ID. nº 32.

34. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 32 ó 33, que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la SEC. ID. nº 33.

35. Polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la SEC. ID. nº 32.

36. Polipéptido constituido por la secuencia de aminoácidos representada en la SEC. ID. nº 32.

37. Vector en partículas que comprende la secuencia de ácido nucleico según la reivindicación 32 ó 33 y/o el polipéptido según la reivindicación 35 ó 36.

38. Utilización de una molécula de ácido nucleico según la reivindicación 32 ó 33 y/o de un polipéptido según la reivindicación 35 ó 36, en la preparación de un medicamento destinado a prevenir o a tratar la infección por VIH en un sujeto humano.