EPITOPOS DE VIH Y COMPOSICION FARMACEUTICA QUE LOS CONTIENE.

Péptido que comprende un epítopo que consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre SEC ID nº 1,

SEC ID nº 2, y SEC ID nº 3, estando dicho péptido asociado a un complejo biotinilado compuesto por una cadena alfa (DRalfa) y una cadena ß (DRß) de un HLA de tipo II, por un brazo espaciador, y por estreptavidina para formar un tetrámero de clase II

Epítopos de VIH y composición farmacéutica que los contiene.

La presente invención se refiere a unos epítopos derivados de antígenos víricos capaces de enlazarse específicamente a las moléculas HLA-DR1 y de inducir una respuesta inmunitaria en unos sujetos de fenotipos HLA-DR1, así como a sus análogos funcionales.

La presente invención se refiere asimismo a unas composiciones farmacéuticas que contienen unos péptidos que comprenden estos epítopos y/o a sus análogos funcionales, así como a unos métodos de diagnóstico para determinar el estado inmunitario de un individuo susceptible de presentar una infección vírica que comprenden la utilización de estos péptidos.

Más precisamente, la presente invención se refiere a unos epítopos inmunógenos derivados de un antígeno del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), la proteína p24, que consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre SEC ID nº 1, SEC ID nº 2, y SEC ID nº 3.

Los virus del tipo VIH son unos virus que provocan una infección crónica, es decir, que no inducen una respuesta inmunitaria suficiente para eliminar la infección.

Esta infección puede desembocar en la aparición de un síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Esta enfermedad se caracteriza en particular por una susceptibilidad aumentada a las infecciones por unos agentes patógenos oportunistas, o por la aparición de formas agresivas del sarcoma de Kaposi, o por la aparición de linfomas de célula B, asociada a una disminución importante del número de células T CD4+.

Numerosas estrategias vacunales han sido desarrolladas con el fin de luchar contra esta infección. La mayoría de estas estrategias recurren a unos medios que prevén mejorar la producción de anticuerpos con el fin de prevenir la infección en caso de exposición al VIH, o a unos medios que prevén activar unos linfocitos T citotóxicos (o CD8+ o CTL) con el fin de detectar y destruir las células infectadas, y así controlar y eliminar la infección.

Diferentes proteínas de la cápsida vírica del VIH han sido utilizadas con el fin de producir unos anticuerpos. Así, a partir del documento US nº 6.593.079, se conoce utilizar unos péptidos del antígeno p24 de la proteína Gag del VIH con el fin de producir unos anticuerpos.

Parece que la respuesta que depende de las células T CD4+ o linfocitos T-auxiliares (o HTL) interviene de manera importante en el mantenimiento de las funciones celulares T CD8+ adecuadas y en el control de la viremia.

Sin embargo, las células T CD4+ que responden específicamente al VIH parecen ser preferentemente infectadas y eliminadas por el VIH, limitando así la capacidad de las vacunas potenciales para activar las células T auxiliares después del inicio de la infección (Douek et al., Nature, 2002, 417: 95-98). Los pacientes infectados crónicamente son incapaces de iniciar una respuesta celular de tipo T tanto contra unos antígenos del VIH como contra unos antígenos de agentes patógenos oportunistas. Así, la pérdida de la respuesta HTL desempeña una función central durante el desarrollo de una infección con VIH.

A pesar de la función central de estas células en el control de la infección con el VIH, sólo un pequeño número de epítopos limitados CD4+ inmunogénicos han sido identificados hasta ahora (Wilson et al., J. Virol, 2001, 75:4195-207; Kaufmann et al., J. Virol., 2004, 78: 4463-77).

Así, existe una necesidad de nuevos epítopos limitados CD4+ que permitan activar una respuesta dependiente de los linfocitos T CD4+ dirigida contra unos antígenos del VIH.

Existe asimismo una necesidad de disponer de composiciones farmacéuticas, en particular de vacunas, destinadas a prevenir y/o tratar unas infecciones con el VIH.

Por otro lado, es importante poder calificar la respuesta inmunitaria y/o el estado inmunitario de un paciente susceptible de padecer una infección con VIH con el fin de poder determinar su sensibilidad a la enfermedad y ajustar lo mejor posible el tratamiento a administrar.

Así, existe la necesidad de disponer de un marcador que permita caracterizar el estado inmunitario de un paciente.

Existe asimismo la necesidad de disponer de un método de diagnóstico que permita calificar el estado inmunitario de un sujeto susceptible de padecer una infección con VIH, así como, llegado el caso, evaluar la respuesta de su sistema inmunitario a un tratamiento.

La presente invención tiene en particular por objetivo satisfacer estas necesidades.

Los inventores han identificado tres epítopos derivados del antígeno p24, procedentes de la proteína Gag del VIH, específicos del fenotipo HLA-DR1.

Según uno de sus primeros aspectos, la presente invención se refiere a un péptido que comprende por lo menos un epítopo que consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre SEC ID nº 1, SEC ID nº 2, y SEC ID nº 3, y a unos análogos funcionales de ésta.

Los inventores han observado que estos epítopos eran capaces de inducir la proliferación, in vitro, de células T CD4+ procedentes de ratones transgénicos HLA-DR1 invalidados H-2 clase II (IAß^b) (Pajot et al, Int. Immunol, 2004, 16: 1275-1282) vacunados con la ayuda de la proteína p24. Por otro lado, estos péptidos son capaces de inducir una respuesta celular de tipo T CD4+ a partir de células que proceden de pacientes que padecen el VIH, en particular el VIH-1, o de individuos seronegativos, a consecuencia de la activación de estas células por unas células presentadoras de antígeno. Las células T CD4+ que proliferan en respuesta a los péptidos según la invención se caracterizan por un fenotipo HLA-DR1 y la respuesta biológica se caracteriza por la secreción de una citoquina, la IFN-?? medida por ELISPOT.

En el sentido de la presente invención, se entiende designar mediante la expresión "análogos funcionales" cualquier péptido o análogo peptídico capaz de imitar la actividad inmunogénica de los péptidos según la invención, a saber, en particular, de presentar la capacidad de enlazarse a las moléculas HLA-DR1, e inducir una respuesta biológica en unos linfocitos T CD4+.

HLA significa "Human Leukocyte Antigen" y es equivalente a CMH, "complejo Mayor de Histocompatibilidad". Los HLA (o CMH) corresponden a un conjunto de genes divididos en clases I y II, que presentan un polimorfismo muy alto, y que codifican para unas moléculas cuya función es presentar unos fragmentos peptídicos en la superficie de las células.

En el sentido de la presente invención, se entiende designar mediante el término "inmunógeno", cualquier sustancia susceptible de provocar una respuesta inmunitaria. Un inmunógeno, o una sustancia inmunogénica, es funcionalmente distinto de un antígeno. Un antígeno se define como cualquier sustancia susceptible de enlazarse a un anticuerpo específico. Por consiguiente, todos los antígenos son considerados como susceptibles de inducir una respuesta de tipo anticuerpo, pero algunos deben ser enlazados a un inmunógeno con el fin de poder actuar de esta forma. Así, aunque todos los inmunógenos sean unos antígenos, todos los antígenos no son inmunogénicos.

Según otro de sus aspectos, la presente invención se refiere a un péptido que comprende un epítopo que consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre SEC ID nº 1, SEC ID nº 2, y SEC ID nº 3, y a unos análogos funcionales de ésta, y que presenta una longitud inferior o igual a 24 aminoácidos.

Según otro de sus aspectos, la presente invención se refiere a un péptido multiepítopo que comprende por lo menos un epítopo que consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre SEC ID nº 1, SEC ID nº 2, y SEC ID nº 3, y a unos análogos funcionales de ésta.

Según todavía otro objeto, la presente invención se refiere a la utilización de por lo menos un péptido según la invención y/o un ácido nucleico que codifica para dicha secuencia para la preparación de una composición farmacéutica destinada a la prevención y/o al tratamiento de una infección por un virus de la inmunodeficiencia humana en unos pacientes de fenotipo HLA-DR1.

Según todavía otro objeto, la presente invención se refiere a un péptido según la invención asociado a un complejo biotinilado compuesto por una cadena a (DRa) y por una cadena ß (DRß) de un HLA de tipo II, por un brazo espaciador y por estreptavidina para formar un tetrámero de clase II.