Kit para la inducción de una respuesta inmunitaria dirigida contra VIF en un gato,

que comprende, acondicionadas por separado: farmacéuticamente aceptable, uno o varios plásmido(s) que expresan in vivo env y gag/pro de VIF, - una segunda composición inmunógena que comprende, en un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, uno o varios vector(es) vírico(s) atenuado(s) que expresan in vivo env y gag/pro de VIF, en la que el o los vector(es) vírico(s) atenuado(s) son uno o varios virus de la viruela del canario atenuado(s) o uno o varios virus de la viruela aviar atenuado(s);

CAMPO DE LA INVENCIÓN

[001] La presente invención tiene por objeto la inmunización por inducción de una respuesta inmunitaria contra el virus de la inmunodeficiencia felina. Tiene igualmente por objeto kits de inmunización.

[002] El virus de la inmunodeficiencia felina (VIF) es un retrovirus de ARN monocatenario de polaridad positiva que pertenece a la familia de los lentivirus.

[003] Muy extendido en todo el planeta, el VIF afecta principalmente a los felinos, en particular los gatos.

[004] La enfermedad se caracteriza por un deterioro y supresión del sistema inmunitario, lo que permite el desarrollo de enfermedades oportunistas y que pueden producir la muerte.

[005] La molécula de ARN del VIF está compuesta por varios marcos de lectura abiertos (MLA) que codifican las proteínas estructurales, concretamente env y gag, las enzimas víricas, concretamente pol y pro, los transactivadores, concretamente tat y rev. El MLA rev está compuesto por dos exones.

[006] Se han propuesto vacunas inactivadas, pero para que sean protectoras requieren cantidades muy elevadas de antígenos, lo que representa problemas de industrialización.

[007] Se han intentado otros enfoques basados en vacunas, en particular el uso de la proteína de la envoltura en forma de subunidad o expresada mediante un vector de expresión recombinante. Estos trabajos no han conseguido resultados satisfactorios. Tampoco han puesto en evidencia fenómenos de facilitación que pudieran traducirse por una viremia más precoz entre los animales vacunados que entre los animales placebos.

[008] El artículo de Cuisinier (Cuisinier A. M. y col., Vaccine, 1997, 15(10), 1085-1094) recuerda que tras los ensayos de vacunación mediante virus inactivados se encontró que la glicoproteína superficial gp120 sería determinante para la protección. Recuerda igualmente que varios ensayos de vacunación que usaron la proteína env recombinada no permitieron inducir una protección. Los autores describen experiencias de vacunación de gatos mediante administración intramuscular de ADN que codificaba gp120 y p10 (nucleocápsida) del VIF. La administración de ADN que codificaba gp120 de VIF sólo indujo una protección parcial. En el caso de combinar gp120 y p10 no se observó protección.

[009] Por su parte, el artículo de Richardson (Richardson J. y col., J. Virol.,

1997, 71(12), 9640-9649) informa de la administración de plásmidos que codificaban env de [0010] VIF un fenómeno de facilitación. Este fenómeno también ha sido observado en la vacunación mediante proteínas recombinadas del VIF (Lutz H. y col., AIDS Research and Human Retroviruses, 1996, 12(5), 431-433) y de virus vaccinia que expresaba env de VIF (Osterhaus A. D. M. E. y col., AIDS Research and Human Retroviruses, 1996, 12(5), 437-441). [0011] El documento WO-A-98/21354 describe un protocolo de vacunación contra VIF en el que se administra previamente un virus de la viruela del canario vector recombinado teniendo como inserción env y gag/pro de VIF, y a continuación el producto VIF inactivado en linfocitos T. [0012] En Cuisinier A. M. y col., Vaccine, 1999, 17, 415-425, la administración de ADN que expresaba gp120 sigue siendo el origen de los fenómenos de facilitación. [0013] La solicitud de patente WO-A-9530019 describe un protocolo de vacunación contra el VIF que utiliza la expresión de varias proteínas de VIF mediante vectores de tipo virus del herpes felino o baculovirus en una estrategia primera de administración / refuerzo. [0014] La solicitud de patente EP-A-1074625 describe un protocolo de vacunación polinucleotídica de los gatos contra el VIF. La estrategia utiliza tanto en la primera administración como en la de refuerzo, plásmidos que expresaban concretamente proteínas env y gag-pro de VIF en administración intramuscular a gatos con un intervalo de 4 semanas. [0015] El artículo de I. RAMSHAW Y COL., "The prime-boost strategy: exciting prospects for improved vaccination" IMMUNOLOGY TODAY, vol. 21, nº 4, 2000, páginas 163-165, realiza una revisión de los ensayos con estrategias de inmunización mediante primera administración con un ADN que codificaba las proteínas víricas y refuerzos con vectores del virus de la viruela en caso de infección lentivírica. Rawshaw y col. Destacan que los resultados varían, pero que la secuencia de ADN en primera administración / vector del virus de la viruela en refuerzo, así como la elección del vector del virus de la viruela resultan cruciales para obtener una buena respuesta inmunitaria. [0016] De este modo, se han estudiado diferentes enfoques de vacunación, es decir, vacunas inactivadas, vacunas de subunidades, y vacunas recombinantes (vectores víricos y ADN). No existe en la actualidad una solución satisfactoria, ni una orientación clara para la investigación.

Tras un importante esfuerzo de investigación, el solicitante ha podido poner a punto una técnica de inducción de una respuesta inmunitaria en gatos contra el VIF que utiliza composiciones inmunogénicas recombinantes tipo vector vírico y ADN (plásmido). De forma notable, la técnica puesta a punto permite utilizar la expresión de env sin generar problemas de facilitación. [0018] Así, la invención queda definida por las reivindicaciones, y tiene como primer objeto un procedimiento de inducción de una respuesta inmunitaria en gatos contra el VIF mediante un protocolo de administración que comprende al menos una primera administración y al menos una administración de refuerzo que utilice al menos los inmunógenos conocidos gag/pro y env. Las composiciones inmunógenas utilizadas en la primera administración son de naturaleza distinta a las de las utilizadas en refuerzo. Este protocolo de administración se denomina "prime-boost". El protocolo prime-boost según la invención comprende una primera administración intramuscular con una composición inmunógena que comprende, en un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, un plásmido que contiene y que expresa in vivo un polinucleótido que codifica env y gag/pro de VIF, seguida por un refuerzo con un intervalo de 3 a 6 semanas con una composición inmunógena que comprende, en un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, un vector vírico atenuado que contiene y que expresa in vivo un polinucleótido que codifica env y gag/pro de VIF, siendo el vector vírico un virus de la viruela del canario o de la viruela aviar atenuado. [0019] La primera administración puede comprender una o varias administraciones de las mismas composiciones inmunógenas basadas en plásmidos. Igualmente, la administración de refuerzo puede comprender una o varias administraciones de las mismas composiciones inmunógenas basadas en vectores del virus de la viruela aviar atenuados. Según una realización particular de la invención, el protocolo comprende dos administraciones sucesivas de una misma composición inmunógena basada en plásmidos, seguida por una administración de una composición inmunógena basada en vectores del virus de la viruela aviar atenuados como refuerzo. [0020] Las distintas administraciones se realizan en intervalos de 3 a 6 semanas y más concretamente de aproximadamente 4 semanas. Según una realización preferida, se prevé además un refuerzo anual, preferentemente mediante la composición inmunógena basada en vectores víricos. Preferentemente los animales tienen al menos de 6 a 8 semanas en el momento de la primera administración. [0021] Los plásmidos y les vectores víricos utilizados en el protocolo prime/boost expresan a la vez env y gag/pro.

En la invención, el término proteína engloba los fragmentos, incluyendo péptidos y polipéptidos que tengan sustancialmente la misma actividad inmunológica que la proteína completa. La expresiones gen env, gen gag, gen gag/pro, etc. Incluyen por tanto los fragmentos polinucleotídicos que codifican estos fragmentos de proteína, péptidos y polipéptidos. [0023] Para controlar su expresión, los polinucleótidos están funcionalmente asociados a un promotor, y eventualmente, a secuencias potenciadoras (en inglés «enhancer»), a secuencias estabilizadoras y/o a secuencias señal que permitan la secreción de la proteína. [0024] Otras proteínas de VIF se pueden expresar junto a env y gag/pro, en primera administración y/o en refuerzo. Se puede expresar concretamente la proteína tat y/o la proteína rev, preferentemente tat y opcionalmente rev. Pueden expresarse en los mismos plásmidos y/o vectores víricos que los utilizados para env y gag/pro o en los plásmidos y/o vectores víricos apropiados. [0025] Según una realización particular, varias cepas de VIF están...

1. Kit para la inducción de una respuesta inmunitaria dirigida contra VIF en un gato, que comprende, acondicionadas por separado: -una primera composición inmunógena que comprende, en un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, uno o varios plásmido(s) que expresan in vivo env y gag/pro de VIF, -una segunda composición inmunógena que comprende, en un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, uno o varios vector(es) vírico(s) atenuado(s) que expresan in vivo env y gag/pro de VIF, en la que el o los vector(es) vírico(s) atenuado(s) son uno o varios virus de la viruela del canario atenuado(s) o uno o varios virus de la viruela aviar atenuado(s);

2. Kit según la reivindicación 1, en el que la primera composición inmunógena y/o la segunda composición inmunógena expresa in vivo tat de VIF.

3. Kit según la reivindicación 1 ó 2, en el que el o los vector(es) vírico(s) atenuado(s) son uno o varios virus de la viruela del canario atenuado(s).

4. Kit según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende composiciones inmunógenas para inducir una respuesta inmunitaria dirigida contra VIF en un gato o en varios gatos.

5. Kit según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende dos dosis de composición inmunógena basada en plásmidos por una dosis de composición inmunógena basada en vectores víricos atenuados.

6. Kit según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la composición inmunógena basada en plásmidos y/o la composición inmunógena basada en vectores víricos atenuados contiene un adyuvante.

7. Kit según la reivindicación 6, en el que el adyuvante es una citocina.

8. Kit según la reivindicación 7, en el que la citocina es un GM-CSF de felino.

9. Kit según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que la segunda composición inmunógena es para una administración en refuerzo de la primera composición inmunógena.

10. Kit según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la primera y la segunda composición inmunógena son para administración por vía intramuscular.

11. Utilización de una parte de uno o varios plásmido(s) que expresan in vivo env y gag/pro de VIF, para la producción de una primera composición inmunógena que comprende el o los plásmido(s) y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, para una primera administración a un gato, y por otra parte de uno o varios vector(es) vírico(s) atenuado(s) que expresan in vivo env y gag/pro de VIF, para la producción de una segunda composición inmunógena que comprende el o los vector(es) vírico(s) atenuado(s) y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, para una administración de refuerzo a un intervalo de 3 a 6 semanas al mismo gato, en la que la administración de la primera y la segunda composición inmunógena se realiza por vía intramuscular, y el o los vector(es) vírico(s) atenuado(s) son uno o varios virus de la viruela del canario atenuado(s) o uno o varios virus de la viruela aviar atenuado(s).

12. Utilización de uno o varios plásmido(s) que expresan in vivo env y gag/pro de VIF, para la producción de una composición inmunógena que comprende el o los plásmido(s) y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable para la inducción de una respuesta inmunitaria dirigida contra VIF en un gato, destinada a ser administrada por vía intramuscular al gato en una primera administración, realizándose el refuerzo tras de 3 a 6 semanas mediante una composición inmunógena que comprende uno o varios vector(es) vírico(s) atenuado(s) que expresan in vivo env y gag/pro de VIF y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que el o los vector(es) vírico(s) atenuado(s) son uno o varios virus de la viruela del canario atenuado(s) o uno o varios virus de la viruela aviar atenuado(s).

13. Utilización de uno o varios vector(es) vírico(s) atenuado(s)que expresaba in vivo env y gag/pro de VIF, para la producción de una composición inmunógena que

comprende el o los vector(es) vírico(s) atenuado(s) y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, para la inducción de una respuesta inmunitaria dirigida contra VIF en un gato, destinada a ser administrada por vía intramuscular al gato en refuerzo a un intervalo de 3 a 6 semanas de una composición inmunógena que comprende uno o varios plásmido(s) que expresan in vivo env y gag/pro de VIF y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que el o los vector(es) vírico(s) atenuado(s) son uno o varios virus de la viruela del canario atenuado(s) o un virus de la viruela aviar atenuado(s).

14. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, en la que el o los plásmido(s) y/o el o los vector(es) vírico(s) atenuado(s) comprenden y expresan in vivo un polinucleótido que codifica tat de VIF.

15. Utilización según la reivindicación 14, en la que el o los vector(es) vírico(s) atenuado(s) son uno o varios virus de la viruela del canario atenuado(s).

16. Utilización según la reivindicación 15, en la que las dos composiciones inmunógenas son para una administración con un intervalo aproximado de 4 semanas.

17. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 16, en la que la composición inmunógena basada en plásmidos y/o la composición inmunógena basada en vectores víricos atenuados contiene un adyuvante.

18. Utilización según la reivindicación 17, en la que el adyuvante es una citocina.

19. Utilización según la reivindicación 18, en la que la citocina es un GM-CSF de felino.