CITOQUINAS DE MAMIFEROS RELACIONADAS CON LA INTERLEUQUINA-17.POLINUCLEOTIDO QUE LAS CODIFICAN Y SUS UTILIZACIONES.

Un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica el polipéptido IL-174 maduro comprendido en el SEQ ID NO: 14

Citoquinas de mamíferos relacionadas con la interleuquina-17. Polinucleótido que las codifican y sus utilizaciones.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones relacionadas con proteínas que funcionan en el control de la fisiología, el desarrollo, y la diferenciación de células de mamíferos, p. ej., células de un sistema inmunitario de mamífero. En particular, proporciona ácidos nucleicos y proteínas que regulan la fisiología, el desarrollo, la diferenciación, o la función celular de diferentes tipos de células, incluyendo las células hematopoyéticas.

Antecedentes de la invención

El sistema inmunitario de los vertebrados consiste en numerosos órganos y varios tipos de células diferentes. Dos tipos de células principales incluyen los linajes mieloide y linfoide. En el linaje de células linfoides se encuentran las células B, que se caracterizaron originalmente por diferenciarse en hígado fetal o médula ósea adulta, y las células T, que se caracterizaron originalmente por diferenciarse en el timo. Véase, p. ej., Paul (ed. 1998) Fundamental Immunology (4ª ed.) Raven Press, Nueva York.

En muchos aspectos del desarrollo de una respuesta inmunitaria o una diferenciación celular, las proteínas solubles conocidas como citoquinas juegan un papel crítico en la regulación de las interacciones celulares. Estas citoquinas median aparentemente las actividades celulares de muchas maneras. Se ha demostrado, en muchos casos, que modulan la proliferación, el crecimiento, y la diferenciación de células pluripotenciales hematopoyéticas en un enorme número de progenitores que componen los linajes responsables de una respuesta inmunitaria.

No obstante, las moléculas celulares que son expresadas por las diferentes fases evolutivas de las células en estas rutas de maduración todavía no se han identificado completamente. Por otra parte, los papeles y los mecanismos de acción de las moléculas de señalización que inducen, sostienen, o modulan los diferentes estados fisiológicos, evolutivos, o proliferativos de estas células son escasamente conocidos. Claramente, el sistema inmunitario y su respuesta a diferentes estreses tienen relevancia en medicina, p. ej., enfermedades infecciosas, respuestas y tratamientos relacionados con el cáncer, respuestas alérgicas y de rechazo a transplantes. Véase, p. ej., Thorn, et al. Harrison's Principles of Internal Medicine McGraw/Hill, Nueva York.

La ciencia médica cuenta, en gran medida, con el reclutamiento o la supresión apropiados del sistema inmunitario al efectuar curas para respuestas fisiológicas insuficientes o impropias a factores medioambientales. Sin embargo, la falta de conocimiento sobre cómo se regula o se diferencia el sistema inmunitario ha bloqueado la capacidad de modular ventajosamente los mecanismos defensivos normales a sensibilizaciones biológicas. Las condiciones médicas caracterizadas por una regulación anómala o inapropiada del desarrollo o la fisiología de células relevantes siguen siendo de este modo incontrolables. El descubrimiento y la caracterización de citoquinas específicas contribuirán al desarrollo de terapias para una amplia gama de condiciones degenerativas u otras condiciones que afectan al sistema inmunitario, a las células hematopoyéticas, así como a otros tipos de células. La presente invención proporciona soluciones para algunos de estos y muchos otros problemas.

Compendio de la invención

La presente invención se basa, en parte, en el descubrimiento de clones de ADNc que codifican diferentes proteínas de tipo citoquina que muestran una similitud de secuencia significativa con la citoquina denominada CTLA-8.

La invención abarca genes aislados que codifican la proteína IL-174 de la invención, variantes de la proteína codificada, p. ej., mutaciones (muteínas) de las secuencias naturales, variante de especies y alélicas, proteínas de fusión, mímeticos químicos, y otros análogos estructurales y funcionales. También se describe diversos usos de estos diferentes ácidos nucleicos o composiciones de proteínas.

En ciertas realizaciones de ácidos nucleicos, la invención proporciona un polinucleótido aislado o recombinante que comprende la secuencia de una IL-174 de mamífero, que: codifica al menos 16 aminoácidos contiguos del SEQ ID NO: 14; o comprende uno o más segmentos de al menos 33 nucleótidos contiguos del SEQ ID NO: 13. Otras realizaciones incluyen semejante polinucleótido en un vector de expresión, que comprende una secuencia que: codifica al menos 16 aminoácidos contiguos del SEQ ID NO: 14 o comprende al menos 33 nucleótidos contiguos del SEQ ID NO: 13. Ciertas realizaciones incluirán aquellos polinucleótidos que codifican al menos 16 restos aminoácido contiguos del SEQ ID NO: 14; comprenden al menos 33 nucleótidos contiguos del SEQ ID NO: 13; o comprende la porción codificante madura completa del SEQ ID NO: 13.

Se proporcionan diferentes métodos, p. ej., elaboración de: a) un polipéptido que comprende expresar el vector de expresión descrito, produciendo de ese modo el polipéptido; b) un ácido nucleico dúplex que comprende poner en contacto un polinucleótido descrito con un ácido nucleico complementario, dando como resultado de ese modo la producción del ácido nucleico dúplex; o c) un polinucleótido descrito que comprende amplificar utilizando un método de PCR.

También se describe en la presente memoria un polinucleótido aislado o recombinante que hibrida en condiciones de lavado restrictivas de al menos 55ºC y una concentración de sal de menos de 400 mM con el polinucleótido (IL-174) descrito que consiste en la porción codificante del SEQ ID NO: 13. Tales polinucleótidos descritos incluyen los polinucleótidos en los que las condiciones de lavado son de al menos 65ºC y una concentración de sal de menos de 300 mM. En otras realizaciones, se proporcionan polinucleótidos que comprenden al menos 50 nucleótidos contiguos del SEQ ID NO: 13 (IL-174).

Se describen ciertos kits, p. ej., que comprenden un polinucleótido descrito, y: a) instrucciones para el uso del polinucleótido para la detección; b) instrucciones para deshacerse del polinucleótido u otros reactivos del kit; o c) tanto a como b.

También se proporcionan diferentes células, p. ej., una célula que contiene el vector de expresión descrito, donde la célula es: una célula procariótica; una célula eucariótica; una célula bacteriana; una célula de levadura; una célula de insecto; una célula de mamífero; una célula de ratón; una célula de primate; o una célula humana.

Las realizaciones de polipéptidos incluyen, p. ej., un polipéptido IL-174 antigénico aislado o recombinante que comprende al menos un segmento de 16 aminoácidos contiguos idénticos del SEQ ID NO: 14. Otras realizaciones incluyen un polipéptido descrito, donde el polipéptido IL-174: a) comprende el SEQ ID NO: 14 maduro; b) se une selectivamente a un anticuerpo policlonal generado contra un inmunógeno del SEQ ID NO: 14 maduro; c) comprende una pluralidad de segmentos polipeptídicos distintos de 16 aminoácidos contiguos del SEQ ID NO: 14; d) tiene una longitud de al menos 30 aminoácidos; o e) muestra al menos dos epítopos no solapantes que son selectivos para el SEQ ID NO: 14 maduro. Otras realizaciones diferentes incluyen semejante polipéptido descrito, que: a) es una composición estéril; b) no está glicosilado; c) está desnaturalizado; d) es un polipéptido sintético; e) está anclado a un sustrato sólido; o f) es una proteína de fusión con una etiqueta de detección o purificación.

También se proporcionan los métodos de utilización de los polipéptidos descritos, p. ej.,: a) para marcar el polipéptido, que comprenden marcar el polipéptido con una marca radiactiva; b) para separar el polipéptido de otro polipéptido en una mezcla, que comprende hacer circular la mezcla en una matriz de cromatografía, separando de ese modo los polipéptidos; c) para identificar un compuesto que se une selectivamente al polipéptido, que comprende incubar el compuesto con el polipéptido en condiciones apropiadas; haciendo de ese modo que el compuesto se una al polipéptido; o d) para conjugar el polipéptido a una matriz, que comprende transformar el polipéptido con un agente reactivo, y conjugar el polipéptido con la matriz.

También se describen anticuerpos, incluyendo un compuesto de unión que comprende una porción de unión al antígeno de un anticuerpo que se une selectivamente con semejante polipéptido descrito, donde el polipéptido IL-174 comprende el SEQ ID NO: 14. El compuesto...

1. Un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica el polipéptido IL-174 maduro comprendido en el SEQ ID NO: 14.

2. El polinucleótido de la reivindicación 1 que comprende la porción codificante madura completa del SEQ ID NO: 13.

3. Un polinucleótido que codifica al menos 16 aminoácidos contiguos del polipéptido IL-174 maduro comprendido en el SEQ ID NO: 14.

4. Un polinucleótido que comprende al menos 33 nucleótidos contiguos del SEQ ID NO: 13.

5. Un vector de expresión, que comprende un polinucleótido de la reivindicación 1.

6. Una célula anfitriona que contiene un vector de expresión de la reivindicación 5, donde la célula es: