CITOQUINA DE MAMIFERO: INTERLEUQUINA-B30 Y REACTIVOS CORRESPONDIENTES.

Un polinucleótido aislado o recombinante que codifica un polipéptido seleccionado del grupo que consta de las SEC ID N os : 2, 4 y 5

Citoquina de mamífero: interleuquina-B30 y reactivos correspondientes.

Campo técnico

La presente invención tiene que ver con composiciones relacionadas con proteínas que funcionan en el control de la biología y la fisiología de células de mamífero, por ejemplo de células del sistema inmune de mamífero. En particular, proporciona genes purificados, proteínas, anticuerpos y reactivos relacionados útiles para regular, por ejemplo, la activación, el desarrollo, la diferenciación y la función de diferentes tipos celulares, incluyendo células hematopoyéticas.

Antecedentes de la invención

La tecnología del ADN recombinante se refiere en general a la técnica de integrar información genética procedente de una fuente donante en vectores para un procesamiento posterior, tal como a través de la introducción en un huésped, mediante el cual la información genética transferida es copiada y/o expresada en el nuevo entorno. Comúnmente, la información genética existe en forma de ADN complementario (ADNc) derivado del ARN mensajero (ARNm) que codifica un producto proteico deseado. El transportador es frecuentemente un plásmido que tiene la capacidad de incorporar el ADNc para su replicación posterior en un huésped y, en algunos casos, de controlar realmente la expresión del ADNc y dirigir de este modo la síntesis del producto codificado en el huésped.

Durante algún tiempo se ha sabido que la respuesta inmune de los mamíferos está basada en una serie de interacciones celulares complejas, lo que se denomina "la red inmune". Una investigación reciente ha proporcionado un nueva percepción del funcionamiento interno de esta red. Aunque queda claro que gran parte de la respuesta gira, de hecho, alrededor de interacciones similares a una red de linfocitos, macrófagos, granulocitos y otras células, los inmunólogos mantienen actualmente en general la opinión de que proteínas solubles conocidas como linfoquinas, citoquinas o monoquinas, desempeñan una función crítica en el control de estas interacciones celulares. Existe por tanto un considerable interés en el aislamiento, la caracterización y los mecanismos de acción de factores moduladores celulares, una comprensión de los cuales dará lugar a avances significativos en el diagnóstico y la terapia de numerosas anormalidades médicas, por ejemplo de enfermedades del sistema inmune. Algunos de estos factores son factores de crecimiento hematopoyéticos, por ejemplo el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF). Ver, por ejemplo, Thomson (1994; ed.) The Cytokine Handbook (2ª ed.) Academic Press, San Diego; Metcalf y Nicola (1995) The Hematopoietic Colony Stimulating Factors Cambridge University Press; y Aggarwal y Gutterman (1991) Human Cytokines Blackwell Pub. Ito y col. (Pig STAT2 cDNA entrada de la base de datos de la EMBL SSAB4061, Nº de Acceso AB004061, 1997) describen una secuencia para pigSTAT2.

Las linfoquinas median aparentemente actividades celulares de una variedad de formas. Se ha demostrado que apoyan la proliferación, el crecimiento y la diferenciación de células madre hematopoyéticas pluripotenciales en un gran número de progenitores que comprenden diversos linajes celulares que constituyen un sistema inmune complejo. Son necesarias interacciones correctas y equilibradas entre los componentes celulares para obtener una respuesta inmune sana. Los diferentes linajes celulares a menudo responden de manera diferente cuando se administran linfoquinas junto con otros agentes.

Linajes celulares especialmente importantes para el sistema inmune incluyen dos clases de linfocitos: las células B que pueden producir y secretar inmunoglobulinas (proteínas que tienen la capacidad de reconocer y unirse a materiales extraños para llevar a cabo su eliminación), y las células T de varios subgrupos que secretan linfoquinas e inducen o suprimen a las células B y a otras células varias (incluyendo otras células T) que constituyen la red inmune. Estos linfocitos interaccionan con muchos otros tipos celulares.

Otro linaje celular importante está constituido por el mastocito (que no ha sido identificado positivamente en todas las especies de mamífero), que es una célula de tejido conectivo que contiene gránulos situada próxima a los capilares por todo el organismo. Estas células se encuentran en concentraciones especialmente elevadas en los pulmones, la piel y los tractos gastrointestinal y genitourinario. Los mastocitos desempeñan un papel fundamental en las enfermedades relacionadas con la alergia, particularmente en la anafilaxis, según sigue: cuando antígenos seleccionados se entrecruzan con una clase de inmunoglobulinas unidas a receptores en la superficie de los mastocitos, los mastocitos se desgranulan y liberan mediadores, por ejemplo histamina, serotonina, heparina y prostaglandinas, que producen reacciones alérgicas, por ejemplo anafilaxis.

La investigación para conocer mejor y tratar las diferentes enfermedades inmunes ha estado dificultada por la incapacidad general para mantener células del sistema inmune in vitro. Los inmunólogos han descubierto que el cultivo de estas células puede ser llevado a cabo mediante la utilización de sobrenadantes de células T y de sobrenadantes de otras células, que contienen diferentes factores de crecimiento, incluyendo muchas de las linfoquinas.

De todo lo anterior es evidente que el descubrimiento y el desarrollo de nuevas linfoquinas, por ejemplo relacionadas con G-CSF y/o IL6, podría contribuir a nuevas terapias para un amplio rango de condiciones degenerativas o anormales que implican directamente o indirectamente a las células del sistema inmune y/o a las células hematopoyéticas. En particular, sería muy ventajoso el descubrimiento y el desarrollo de linfoquinas que incrementaran o potenciaran las actividades beneficiosas de las linfoquinas conocidas. La presente invención proporciona nuevas composiciones de interleuquinas y compuestos relacionados, así como métodos para su utilización.

Resumen de la invención

La presente invención está dirigida a la interleuquina-B30 (IL-B30) de mamífero, por ejemplo de roedores, canina, felina, de primate, y a sus actividades biológicas. Incluye ácidos nucleicos que codifican los propios polipéptidos y métodos para su producción y utilización. Los ácidos nucleicos de la invención son caracterizados, en parte, por su homología con secuencias de ADN complementario (ADNc) clonadas incluidas en la presente, y/o por ensayos funcionales para determinar actividades similares a las de factores de crecimiento o a las de citoquinas, por ejemplo G-CSF (ver Nagata (1994) en Thomson The Cytokine Handbook 2ªed., Academic Press, San Diego) y/o IL-6 (ver Hirano (1994) en Thomson The Cytokine Handbook 2ªed., Academic Press, San Diego), aplicados a los polipéptidos que están codificados típicamente por estos ácidos nucleicos. Se proporcionan métodos para modular o intervenir en el control de una respuesta fisiológica o una respuesta inmune dependientes de un factor de crecimiento.

La presente invención está basada en parte en el descubrimiento de una nueva secuencia de citoquina que presenta una similitud de secuencias y estructural significativa con G-CSF e IL-6. En particular, proporciona, en la medida en la que está abarcado por las reivindicaciones adjuntas, un gen de primate, por ejemplo humano, que codifica una proteína cuyo tamaño maduro es de 168 aminoácidos aproximadamente, y secuencias de cerdo y murinas, por ejemplo de ratón. Equivalentes funcionales que presenten una homología de secuencias significativa estarán disponibles a partir de otros mamíferos, por ejemplo, vaca, caballo y rata, y de otras especies distintas de mamífero.

Por consiguiente, en un primer aspecto, la presente invención proporciona un polinucleótido aislado o recombinante que codifica un polipéptido seleccionado del grupo que consta de las SEC ID N^os: 2, 4 y 5. La invención proporciona también un polinucleótido aislado o recombinante que codifica un polipéptido maduro seleccionado del grupo que consta de las SEC ID N^os: 2, 4 y 5. La invención proporciona además un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a un polipéptido con una secuencia de aminoácidos que consta de las secuencias de las SEC ID N^os: 2, 4 ó 5. La invención proporciona además un polipéptido aislado que contiene la secuencia de aminoácidos de las SEC ID N^os: 2, 4 ó 5, o que contiene el polipéptido maduro de las SEC ID N^os: 2, 4 ó 5.

Se describen también en la presente: una proteína o péptido IL-B30 sustancialmente...

1. Un polinucleótido aislado o recombinante que codifica un polipéptido seleccionado del grupo que consta de las SEC ID N^os: 2, 4 y 5.

2. Un polinucleótido aislado o recombinante que codifica un polipéptido maduro seleccionado del grupo que consta de las SEC ID N^os: 2 y 4.

3. El polinucleótido de la Reivindicación 1, que contiene la porción codificadora de la SEC ID Nº: 1 ó 3.

4. El polinucleótido de la Reivindicación 2, que contiene la porción codificadora madura de la secuencia de nucleótidos de la SEC ID Nº: 1 ó 3.

5. Un vector de expresión que contiene el polinucleótido de la Reivindicación 2.

6. Una célula huésped que contiene el vector de expresión de la Reivindicación 5.

7. La célula huésped de la Reivindicación 6, donde la célula huésped es una célula eucariótica.

8. Un método para producir un polipéptido que comprende la expresión de un polinucleótido recombinante de la Reivindicación 2.

9. Un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a un polipéptido con una secuencia de aminoácidos que consta de la secuencia de la SEC ID Nº: 2, 4 ó 5.

10. El anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno del mismo de la Reivindicación 9, donde dicho anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo es un anticuerpo monoclonal, Fab o F(ab)2.

11. El anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno del mismo de la Reivindicación 9, donde dicho anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo está marcado de forma detectable.

12. Un método para utilizar el anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno del mismo de la Reivindicación 9, que comprende la puesta en contacto de dicho anticuerpo o de dicho fragmento de unión al antígeno del mismo con una muestra biológica que contenga un antígeno, donde dicho contacto tiene como resultado la formación de un complejo anticuerpo:antígeno o de un complejo fragmento de unión al antígeno:antígeno.

13. El método de la Reivindicación 12, en el que dicha muestra biológica es de un humano.

14. Un kit que contiene el anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo de la Reivindicación 9 y: