ANTICUERPOS MONOCLONALES HUMANOS ANTI-TNF ALFA.

ANTICUERPOS MONOCLONALES HUMANOS (MABS) QUE SE UNEN A TNFALFA HUMANO.

SE DESCRIBEN ANTICUERPOS E ISOTIPOS IGG Y IGM. EL REFERIDO ANTICUERPO MONOCLONAL HUMANO SE CONOCE COMO B5 ( F78 HUMANO EN EL FORMATO ELISA CON UNA LEY COMPARABLE A LA TRINEUTRALIZACION DE ALTA AFINIDAD DE MABS DE RATON. TAMBIEN ENLAZA AL TNFALFA CELULAR SUPERFICIAL Y PREVIENE LA SECRECION DE TNFALFA POR LAS LINEAS CELULARES HUMANAS MONOCITICAS

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E94102560.

Solicitante: BAYER HEALTHCARE LLC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 555 White Plains Road Tarrytown, NY 10591.

Inventor/es: LEMBACH, KENNETH J., BOYLE, PETRA, WETZEL, GAYLE D.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 21 de Febrero de 1994.

Fecha Concesión Europea: 16 de Agosto de 2001.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/24B

Clasificación PCT:

  • A61K39/395 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • A61P43/00 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.Medicamentos para usos específicos, no previstos en los grupos A61P 1/00 - A61P 41/00.
  • C07K16/24 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra citoquinas, linfoquinas o interferones.
  • C12P21/08 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › Anticuerpos monoclonales.

Clasificación antigua:

  • A61K39/395 A61K 39/00 […] › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • C07K16/24 C07K 16/00 […] › contra citoquinas, linfoquinas o interferones.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Mónaco, Irlanda.


Fragmento de la descripción:

ANTECEDENTE DE LA INVENCION Campo: La divulgación se refiere de manera general a anticuerpos monoclonales y, específica-mente, a la materia objeto de las reivindicaciones. Técnica anterior: El TNFα es una citocina pluripotente y pleiotrópica. Principalmente, se produce por macrófagos activados; no obstante, su síntesis y secreción se ha observado igualmente usando granulocitos, células B tonsilas, líneas de células B, células asesinas naturales, líneas de células T, aislados de células B malignas crónicas primarias, y células T de sangre periférica.

Igualmente, el TNFα puede expresarse sobre superficies de células, aparentemente en dos formas. Una de ellas, es una proteína de transmembrana tipo 2 integral de 26 kd de peso molecular sobre monocitos, células T y algunas otras células. La otra forma, es el producto de 17 kd secretado que está unido a su receptor.

Entre las muchas actividades del TNFα secretado se encuentran el factor de crecimiento timocito, el factor de crecimiento y maduración de células B, la producción in vivo de necrosis hemorrágica, pérdida de peso, colapso cardiovascular y fallo de órganos múltiple. Naturalmente, estas últimas actividades son la fuente del interés clínico en el TNFα.

Durante el choque séptico, así como en enfermedades inflamatorias, la síntesis y secreción del TNFα, IL-1, IL-6 y IL-8 han sido documentadas. En consecuencia, los sistemas inmunes de algunos individuos están expuestos crónicamente a estas citocinas. Realmente, se han informado de anticuerpos de baja afinidad por el TNFα (A. Fomsgaard y otros, "Autoanticuerpos del factor α de necrosis de tumor en humanos sanos y pacientes con enfermedades inflamatorias e infecciones bacterianas gram-negativas", Scand. J. Immunol., vol. 30, págs. 21923, (1989); y K. Bendtzen y otros, "Auto-anticuerpos del IL-1α y del TNFα en individuos normales y trastornos infecciosos e inmunoinflamatorios", Prog. Leukocyte. Biol., vol. 10B, págs. 447-52, (1990)). No obstante, estos auto-anticuerpos anti-TNFα pueden no ser específicos (H. G. Leusch y otros, "Fracaso en demostrar auto-anticuerpos específicos del TNFα en sueros humanos mediante ELISA y transferencia Western", J. Immunol. Meth., vol. 139, págs. 145-47, (1991)).

Una característica particular del suero humano, así como de los sueros procedentes de otros animales, es su contenido de anticuerpos naturales, denominados polireactivos. Usualmente, estos son anticuerpos IgM que se unen a varios autoantígenos con baja afinidad (A.

B. Hartman y otros, "Los auto-anticuerpos reactivos de órganos procedentes de ratones Balb/c adultos no inmunizados son polireactivos y expresan el uso del gen Vh no influido", Molec. Immunol., vol. 26, págs. 359-70, (1989); y P. Casali y otros, "Linfocitos B CD5+, anticuerpos polireactivos y el repertorio de células B humanas", Immunol. Today, vol. 10, págs. 364-8, (1989)). En consecuencia, podría esperarse que la reactividad de tipo auto-anticuerpo al TNFα fuera de baja actividad y probablemente de reactividad cruzada con otros diversos antígenos.

Se ha informado de algunos anticuerpos neutralizantes de alta afinidad para el IL1α en sueros normales (N. Mae y otros, "Identificación de auto-anticuerpos anti-IL-1α de alta afinidad en suero humano normal como una substancia interfiriente en un ensayo inmunoenzimático sensible para el IL-1α", Lymphokine Cytokine and Research, vol. 10, (No. 1), págs. 61-68, (1991)) o de pacientes (H. Suzuki y otros, "Demostración de auto-anticuerpos neutralizantes contra IL-1α en sueros procedentes de pacientes con artritis reumatoide", J. Immunol., vol. 145, págs. 2140-6, (1990)).

A pesar de estas consideraciones, los autores de la presente invención no tienen conocimiento de la descripción de ningún anticuerpo humano monoclonal que se una específicamente al TNFα, incluso aunque se ha pensado que dichos anticuerpos pueden tener un valor clínico significativo. De acuerdo con ello, persiste la necesidad de disponer de anticuerpos monoclonales monoespecíficos para el TNFα.

RESUMEN DE LA INVENCION

Los inventores las presentes han fabricado anticuerpos humanos monoclonales que se unen tanto al TNFα humano como de ratón. Los anticuerpos se unen al TNFα humano recombinante (rhTNFα) con un título comparable a tres mAbs de ratón neutralizantes de alta afinidad, cuando se ensayan mediante ELISA. Los anticuerpos más completamente caracterizados son los del isotipo IgM, aunque también se han preparado anticuerpos del isotipo IgG. Mediante ensayos de unión de competencia, el anticuerpo parece unirse a epítopos sobre el rhTNFα distintos de los unidos mediante los mAbs de ratón neutralizantes hasta ahora descritos. Los análisis de especificidad indican que el auto-anticuerpo IgM humano se une tanto al TNFα recombinante humano como de ratón, pero no a otros antígenos comúnmente reconocidos por auto-anticuerpos IgM naturales polireactivos. El alto nivel de identidad de aminoácidos entre las moléculas del TNFα humano y de ratón, sugiere que el anticuerpo es monoespecífico para un epítopo dado compartido por estas dos formas del TNFα.

Igualmente, el anticuerpo B5 se une al TNFα de superficie de células (csTNFα) sobre células T humanas, células B, monocitos, una diversidad de líneas de células de linaje linfoide y monocito de origen humano, así como astrocitomas, un carcinoma de pulmón, y un melanoma. Igualmente, el anticuerpo se une a linfocito de chimpancé y a la línea de células de linfoma T de ratón de csTNFα. La unión del anticuerpo a cdTNFα es específica, puesto que puede ser inhibida por el TNFα pero no por el TNFß, un mAb anti-TNFα de ratón neutralizante, ni tampoco mediante una forma recombinante del dominio extracelular del receptor del TNF p55 (TNFR). El auto-anticuerpo B5 puede inhibir la secreción del TNFα inducida por LPS mediante

células de la línea de células tipo monocito humano THP-1.

Se han descrito en la literatura varios anticuerpos TNFα anti-humano de ratón monoclonales. No obstante, ninguno de ellos, se unen igualmente al TNFα de ratón.

La especificidad, la naturaleza auto-anticuerpo, la unión al TNFα de superficie de célula y la capacidad para inhibir la secreción del TNFα hacen del B5 un nuevo mAb.

A continuación, se describe la caracterización de los anticuerpos y su forma de obtenerlos.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

Las Figuras 1A y 1B muestran, en formato de gráfica, una comparación de la unión en formato ELISA en fase sólida al rhTNFα de los anticuerpos monoclonales B5 (humano) y A10G10 (múrido). Las placas ELISA se recubrieron con diversas concentraciones de TNF y, a continuación, se dejaron unirse dosis valoradas de mAb. Se muestran las curvas de unión para cada anticuerpo para las diversas concentraciones de recubrimiento del TNF.

Las Figuras 2A y 2B muestran, en formato de gráfica, la carencia de competencia por la unión al TNFα entre mAbs de ratón y mAb B5. La Figura 2A muestra la unión de tres mAbs anti-TNF de ratón y la unión de mAb anti-rFVIII C7F7 de control a rhTNFα en fase sólida. La Figura 2B muestra la carencia de inhibición de unión de B5 al TNF unido en placa cuando los monoclonales de ratón se dejaron primeramente unir a placas de TNF y posteriormente se agregó el anticuerpo B5.

La Figura 3 muestra, en formato de gráfica, la unión de mAbs IgM anti-TNF humano a rhTNFα capturado y presentado como un complejo mediante la combiinación de los mAbs de ratón unidos en placa a Al10G10, B6 y A6. Las placas ELISA se pre-recubrieron con los tres mAbs de ratón y, a continuación, se incubaron con rhTNFα. Las placas se lavaron y, a continuación, se dejaron unir 20 ug/ml de los mAbs IgM humanos indicados. Las barras rellenas muestran la unión de los mAbs IgM humanos a los tres mAbs de ratón que han sido incubados con el TNF, las barras rayadas muestran la unión de los mAbs IgM cuando los mAbs de ratón unidos no han sido expuestos al TNF.

Las Figuras 4A-4F muestran, en forma de gráfica múltiple, los resultados de un análisis de la especificidad de la unión de varios anticuerpos monoclonales. Las placas se prerecubrieron o bien con TNFα humano recombinante (º), linfotoxina humana recombinante (º), insulina humana (º),...

 


Reivindicaciones:

1. Una composición farmacéutica que contiene un anticuerpo monoclonal humano

que se une al factor alfa de necrosis tumoral humano y que es capaz de inhibir la secreción del 5 factor alfa de necrosistumoral humano inducido por LPS por las células monocitos humanos.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el anticuerpo es un anticuerpo del tipo IgM o IgG.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el anticuerpo es adecuado para administración intravenosa.

10 4. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el anticuerpo se expresa por la línea celular depositada en la ATCC con la designación CRL 11306.


 

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