Anticuerpos anti-VEGF.

Anticuerpo anti-factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) aislado en donde el anticuerpo comprende:

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº:1;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº:2;

(3) una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº:3

(4) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº:4 o SEC ID Nº: 5;

(5) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº:6; y

(6) una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº:7.

Anticuerpos anti-VEGF Campo de la invención

La presente invención se refiere generalmente a secuencias de polipéptido seleccionadas y anticuerpos anti-VEGF con propiedades para fines de investigación, terapéuticos y diagnósticos.

Antecedentes de la invención

El desarrollo de un sistema vascular es un requisito fundamental para numerosos procesos fisiológicos y patológicos. Los tejidos de crecimiento activo tales como embriones y tumores requieren un suministro adecuado de sangre. Estos satisfacen esta necesidad produciendo factores proangiogénicos, que estimulan la formación de nuevos vasos sanguíneos a través de un proceso denominado angiogénesis. La formación de tubos vasculares es un suceso biológico complejo pero ordenado que implica la totalidad o gran parte de las siguientes etapas: a) las células endoteliales (EC) proliferan a partir de EC existentes o se diferencian a partir de células progenitoras; b) las EC migran y coalescen para formar estructuras de tipo cordón; c) los cordones vasculares experimentan a continuación tubulogénesis para formar vasos con un lumen central; b) los cordones o los vasos existentes emiten brotes para formar vasos secundarios; e) el plexo vascular primitivo experimenta remodelación y reforma adicionales; y f) se reclutan células periendoteliales para revestir los tubos endoteliales, proporcionando funciones de mantenimiento y moduladoras a los vasos; incluyendo tales células pericitos para capilares pequeños, células de músculo liso para capilares más grandes, y células de miocardio en el corazón. Flanahan, D. Science 277:48-5 (1997); Flogan, B. L. & Kolodziej, P. A. Nature Reviews Genetics. 3:513-23 (22); Lubarsky, B. & Krasnow, M. A. Cell. 112:19-28 (23).

Está bien establecido que la angiogénesis está implicada en la patogénesis de diversos trastornos. Estos incluyen tumores y metástasis sólidos, aterosclerosis, fibroplasia retrolental, hemangiomas, inflamación crónica, enfermedades neovasculares intraoculares tales como retinopatías proliferativas, por ejemplo, retinopatía diabética, degeneración vascular relacionada con la edad (AMD), glaucoma neovascular, rechazo inmune de tejido corneal trasplantado y otros tejidos, artritis reumatoide, y psoriasis. Folkman et al., J. Biol. Chem., 267:1931-1934 (1992); Klagsbrun et al., Annu. Rev. Physiol. 53:217-239 (1991); y Garner A., "Vascular diseases," en: Pathobiology of Ocular Disease. A Dynamic Approach, Garner A., Klintworth GK, eds., 2- edición (Marcel Dekker, NY, 1994), pp 1625-171.

El caso de crecimiento tumoral, la angiogénesis parece ser crucial para la transición desde hiperplasia a neoplasia, y para proporcionar alimento para el crecimiento y la metástasis del tumor. Folkman ef ai, Nature 339:58 (1989). La neovascularización permite que las células del tumor adquieran un crecimiento aventajado y autonomía proliferativa en comparación con las células normales. Un tumor comienza habitualmente como una célula anómala individual, que puede proliferar solo hasta un tamaño de unos pocos milímetros cúbicos debido a la distancia a los lechos capilares disponibles, y puede permanecer "latente" sin crecimiento adicional ni diseminación durante un período de tiempo prolongado. Algunas células tumorales cambian entonces al fenotipo angiogénico para activar células endoteliales, que proliferan y maduran en nuevos vasos sanguíneos capilares. Estos vasos sanguíneos recién formados no solo permiten el crecimiento continuado del tumor principal, sino también la diseminación y recolonización de células tumorales metastásicas. En este sentido, se ha observado una correlación entre la densidad de microvasos en las secciones tumorales y la supervivencia del paciente en cáncer de mama así como en otros tumores diversos. Weidner ef ai, N. Engl. J. Med 324:1-6 (1991); Florak et ai, Lancet 34:112-1124 (1992); Macchiarini et ai, Lancet 34:145-146 (1992). Los mecanismos precisos que controlan el cambio angiogénico no se comprenden bien, pero se cree que la neovascularización de la masa tumoral da como resultado del balance neto de una multitud de estimuladores e inhibidores de la angiogénesis (Folkman, Nat Med 1 (1 ):27-31 (1995)).

El proceso de desarrollo vascular está regulado de forma estricta. Flasta la fecha, se ha mostrado que un considerable número de moléculas, la mayoría factores secretados producidos por células circundantes, regulan la diferenciación, proliferación, migración y coalescencia de las EC en estructuras de tipo cordón. Por ejemplo, se ha identificado el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) como el factor clave implicado en la estimulación de la angiogénesis y en la inducción de la permeabilidad vascular. Ferrara et ai, Endocr. Rev. 18:4-25 (1997). El descubrimiento de que la pérdida de incluso un solo alelo de VEGF da como resultado la letalidad embriónica indica el papel irreemplazable desempeñado por este factor en el desarrollo y la diferenciación del sistema vascular. Además, se ha mostrado que el VEGF es un mediador clave de la neovascularización asociada con tumores y trastornos intraoculares. Ferrara et ai, Endocr. Rev., citado anteriormente. El ARNm de VEGF se sobreexpresa en la mayoría de los tumores humanos examinados. Berkman et ai, J. Clin. Invest. 91:153-159 (1993); Brown et ai, Pluman Pathol. 26:86-91 (1995); Brown et ai, Cáncer Res. 53:4727-4735 (1993); Mattern et ai, Brit. J. Cáncer 73:931-934 (1996); Dvorak et ai, Am. J. Pathol. 146:129-139 (1995).

Además, los niveles de concentración de VEGF en fluidos oculares correlaciona altamente con la presencia de

proliferación activa de vasos sanguíneos en pacientes con retinopatía diabética y otras retinopatías relacionadas con isquemia. Aiello et al., N. Engl. J. Med. 331:148-1487 (1994). Además, los estudios han demostrado la localización de VEGF en membranas neovasculares coroidales en pacientes afectados por AMD. López et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 37:855-868 (1996).

Los anticuerpos neutralizantes anti-VEGF suprimen el crecimiento de diversas líneas celulares tumorales humanas en ratones desnudos (Kim et al., Nature 362:841-844 (1993); Warren et al., J. Clin. Invest. 95:1789-1797 (1995); Borgstrom et al., Cáncer Res. 56:432-439 (1996); Melnyk et al., Cáncer Res. 56:921-924 (1996)) y también inhiben la angiogénesis intraocular en modelos de trastornos isquémicos de la retina. Adamis et al., Arch. Ophthalmol. 114:66-71 (1996). Por lo tanto, los anticuerpos monoclonales anti-VEGF u otros inhibidores de la acción de VEGF son candidatos prometedores para el tratamiento de tumores y diversos trastornos neovasculares intraoculares. Tales anticuerpos se describen, por ejemplo, en el documento de Patente EP 817,648 publicado el 14 de enero de 1998; y en los documentos de Patente W98/45331 y W98/45332, ambos publicados el 15 de octubre de 1998. Uno de los anticuerpos anti-VEGF, bevacizumab, ha sido aprobado por la FDA para su uso en combinación con un régimen de quimioterapia para tratar cáncer colorrectal metastásico (CRC) y cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC). Y el bevacizumab se está investigando en numerosos ensayos clínicos en curso para tratar diversas indicaciones de cáncer.

También se conocen otros anticuerpos anti-VEGF, los anticuerpos anti-Nrp1 y anti-Nrp2, y se describen, por ejemplo, en Liang et al., J Mol Biol 366, 815-829 (27) y Liang et al., J Biol Chem 281, 951-961 (26), el documento de Publicación PCT N2 W27/5647 y el documento de Solicitud PCT N2 PCT/US27/69179.

Sumario de la invención

La invención proporcionar nuevos anticuerpos anti-VEGF y usos de los mismos, como se define en las reivindicaciones.

En una realización, se proporciona un anticuerpo que se une a VEGF o un fragmento del mismo, en la que el anticuerpo comprende:

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2:1;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2: 2;

(3) una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2: 3

(4) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2: 4;

(5) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2: 6; y

(6) una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2: 7.

En otra realización, se proporciona un anticuerpo que se une a VEGF o un fragmento del mismo, en la que el anticuerpo comprende:

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2: 1;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2: 2;

(3) una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2: 3

(4) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2: 5;

(5) una HVR-L2 que comprende... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo anti-factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) aislado en donde el anticuerpo comprende:

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2:1;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2:2;

(3) una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2:3

(4) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2:4 o SEC ID N2: 5;

(5) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2:6; y

(6) una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2:7.

2. El anticuerpo anti-VEGF aislado de la reivindicación 1, en el que el dominio variable de cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2: 44 o 45 y en el que el dominio variable de cadena pesada comprende opcionalmente la secuencia de aminoácidos de SEC ID N2: 43.

3. El anticuerpo de las reivindicaciones 1 o 2, en donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, y/o es humanizado o humano.

4. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el anticuerpo comprende además una secuencia de marco y al menos una parte de la secuencia de marco es una secuencia de marco de consenso humana.

5. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que es un anticuerpo monoclonal de longitud completa.

6. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el anticuerpo es biespecífico.

7. Polinucleótido que codifica el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6.

8. Vector que comprende el polinucleótido de la reivindicación 7, en donde el vector es opcionalmente un vector de expresión.

9. Célula anfitriona que comprende el vector de la reivindicación 8.

1. La célula anfitriona de la reivindicación 9, en donde la célula anfitriona es procariota, eucariota o de mamífero.

11. Inmunoconjugado que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 conjugado con un agente, tal como un fármaco o un agente citotóxico.

12. Método para preparar el anticuerpo anti-VEGF de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o el inmunoconjugado de la reivindicación 11, comprendiendo dicho método (a) expresar el vector de la reivindicación 8 en una célula anfitriona adecuada, y (b) recuperar el anticuerpo o inmunoconjugado.

13. El método de la reivindicación 12, en el que la célula anfitriona es procariota o eucariota.

14. Composición que comprende (i) el anticuerpo anti-VEGF de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 o (ii) el polinucleótido de la reivindicación 7, en donde la composición comprende además opcionalmente un vehículo.

15. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, la composición de la reivindicación 14 o el inmunoconjugado de la reivindicación 11 para su uso en un método terapéutico.

16. El anticuerpo, la composición o el inmunoconjugado para el uso de acuerdo con la reivindicación 15, en donde el anticuerpo, la composición o el inmunoconjugado son para uso en un método para el tratamiento de un tumor, un cáncer o un trastorno proliferativo celular, y/o para inhibir angiogénesis o permeabilidad vascular, en donde dicho método de tratamiento comprende administrar dichos anticuerpo composición o inmunoconjugado a un sujeto que lo necesita.

17. El anticuerpo, la composición o el inmunoconjugado para el uso de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el tumor, el cáncer o el trastorno proliferativo celular son cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de mama, glioblastoma o cáncer de células renales.