(22/04/2020) Un método para preparar ADN genómico para el análisis de secuencias, por reacción homogénea sin el uso de compartimentación física tal como nanogotas, comprendiendo el método: (a) combinar una pluralidad de fragmentos largos que comprenden secuencias de ADN genómico en una sola mezcla con una población de perlas, en las que (i) los fragmentos largos son de 5 kilobases a 750 kilobases de longitud, (ii) cada perla comprende al menos 1000 copias del mismo oligonucleótido inmovilizado sobre la misma, comprendiendo dicho oligonucleótido una secuencia que contiene una etiqueta, (iii) cada secuencia que contiene una etiqueta comprende una secuencia de etiqueta, y (iv) la población de perlas comprende, en conjunto, al menos 10.000 secuencias de etiquetas…

(15/04/2020) Un método automatizado para detectar ácidos nucleicos del VIH-1 en una muestra de sangre, comprendiendo el método: a) proporcionar: i) una muestra de sangre que se sospecha infectada con VIH secada en un soporte sólido, ii) un tampón de elución, iii) un instrumento de preparación de las muestras automatizado, programable, iv) un instrumento de PCR automatizado, programable, v) ADNasa y vi) reactivos de PCR adecuados para la detección de ácidos nucleicos del VIH-1; b) eluir la muestra de sangre del soporte sólido con el tampón de elución para crear una muestra eluida; c) cargar automáticamente la muestra eluida en el instrumento de preparación de las muestras automatizado, programable para la extracción y purificación posterior de ácidos nucleicos para crear una muestra procesada; d) cargar los reactivos de PCR en el instrumento…

(25/03/2020) Un método para analizar al menos dos o más analitos de una pluralidad de células individuales, comprendiendo dicho método: (a) proporcionar una pluralidad de elementos de preservación de contigüidad (CE), en donde cada uno de los CE comprende una célula individual; (b) lisar dicha célula individual dentro de cada uno de los CE, en donde los analitos dentro de dicha célula individual se liberan dentro de cada uno de los CE; (c) proporcionar un primer resto informador a un primer analito dentro de dicha célula individual de cada uno de los CE; (d) proporcionar un segundo resto indicador a un segundo analito dentro de dicha célula individual de cada uno de los CE; (e) modificar dichos analitos de modo que al menos algunos de dichos primer…

(25/03/2020) Procedimiento para producir una o varias gotas de un primer líquido en un segundo líquido inmiscible con el primer líquido mediante un dispositivo para generar una o varias gotas de un primer líquido en un segundo líquido inmiscible con el primer líquido, donde el dispositivo presenta las siguientes características: un cuerpo giratorio que presenta estructuras fluídicas, donde las estructuras fluídicas presentan las siguientes características: una cámara de fluido configurada para contener el segundo líquido; un canal de fluido que se abre en la cámara de fluido y está configurado para hacer que el primer líquido fluya en una dirección de flujo hacia la cámara de fluido ; y una zona de transición (54, 154, 154a,…

(18/03/2020) Un método para secuenciar moléculas de ácido nucleico a partir de una muestra con el uso de índices moleculares únicos (UMI), en el que cada índice molecular único (UMI) es una secuencia oligonucleotídica que se puede usar para identificar una molécula individual de un fragmento de ADN bicatenario en la muestra, que comprende (a) aplicar adaptadores a ambos extremos de los fragmentos de ADN bicatenario en la muestra para obtener productos de adaptador unido a ADN, en donde cada adaptador comprende una región hibridada bicatenaria, un brazo 5' monocatenario, un brazo 3' monocatenario, y un UMI físico en una hebra o en cada hebra del adaptador,…

(11/03/2020) Un método para preparar plantillas inmovilizadas para una reacción de secuenciación de ácido nucleico que comprende: (a) proporcionar un soporte sólido que tiene un gran número de cebadores de amplificación directos e inversos inmovilizados sobre el mismo, en donde un subconjunto de dicho gran número de cebadores de amplificación comprende un punto de escisión; (b) amplificar una plantilla de ácido nucleico objetivo usando el subconjunto de cebadores de amplificación en el soporte para producir un gran número de moléculas de ácido nucleico bicatenario, en donde ambas cadenas de cada molécula de ácido nucleico bicatenario están unidas al soporte sólido en sus extremos 5'; (c) escindir el subconjunto de cebadores de amplificación en el punto de escisión para producir un producto de amplificación linealizado que comprende una cadena…

(19/02/2020) Un procedimiento automatizado para capturar ácidos nucleicos en una muestra líquida, que comprende: (a) poner en contacto una primera parte alícuota de la muestra líquida con partículas de vidrio magnético (MGP) en un recipiente en condiciones que permitan que los ácidos nucleicos de la muestra líquida se unan de forma no covalente a las MGP, en el que las MGP son no porosas y comprenden al menos un núcleo magnético ferromagnético en vidrio; (b) aplicar un campo magnético a las MGP para formar un grupo de MGP; (c) retirar la muestra líquida no unida del grupo de MGP; (d) poner en contacto una segunda parte alícuota de la muestra líquida con el grupo de MGP; (e) resuspender las MGP en la mitad inferior de la segunda parte alícuota…

(12/02/2020) Un método de identificación de la presencia de uno o más biomarcadores asociados al cáncer en una muestra biológica de un individuo que tiene o que se sospecha que tiene cáncer, comprendiendo dicho método: a. aislar ARN sin células (ARNsc) de la muestra biológica usando un soporte sólido, en donde la muestra biológica ha interaccionado con un estabilizador de ARN; b. digerir el ADN existente de la muestra biológica mientras que el ARNsc está sobre el soporte sólido; c. eluir el ARNsc al menos una vez del soporte sólido; d. retrotranscribir el ARNsc en ADNc; e. hacer reaccionar el ADNc con al menos un cebador que es específico para detectar un biomarcador asociado al cáncer,…

(08/01/2020) Procedimiento para la detección de datos estructurales en un ácido nucleico, comprendiendo el procedimiento: a. proporcionar un ARN que ha sido expuesto a un reactivo que proporciona una modificación química, en el que el reactivo comprende un electrófilo que modifica selectivamente nucleótidos sin restricciones en el ARN para formar un aducto 2'-O- de ribosa covalente o en el que el reactivo es sulfato de dimetilo, DMS y forma aductos en la posición N1 de la adenosina y la posición N3 de la citosina; b. sintetizar un ácido nucleico usando una transcriptasa inversa y el ARN proporcionado en la etapa (a) como una plantilla, en el que la síntesis tiene lugar en presencia de Mn2+, en el que la transcriptasa inversa lee a través de la modificación…

(01/01/2020) Un procedimiento que comprende: a) separar células individuales en un compartimento con microesferas conjugadas con oligonucleótidos que comprenden poli(T); b) lisar las células; c) permitir que los transcritos de ARNm liberados de las células se hibriden con oligonucleótidos conjugados con las microesferas; d) agrupar, lavar y resuspender las microesferas en solución con reactivos para retrotranscripción asociada a reacción en cadena de la polimerasa con extensión de solapamiento, que incluye cebadores diseñados para crear un único producto de PCR que comprende ADNc de al menos dos transcritos de interés unidos covalentemente; e) la suspensión de microesferas y solución de reactivos se emulsiona en la fase oleosa para…

(25/12/2019) Un método para tratar una muestra biológica para la extracción del ácido nucleico, que comprende: diluir una muestra biológica en un tampón de extracción para formar una mezcla, en donde el tampón de extracción comprende de 3% en peso a 10% en peso de disolvente orgánico, en donde dicho disolvente orgánico es uno o más entre acetona o etanol; incubar la mezcla a una temperatura de 15 °C a 35 °C durante un tiempo entre 5 segundos y treinta minutos, para hacer que el ácido nucleico presente en la muestra biológica sea extraído en al menos una porción de la muestra biológica para posterior procesamiento; separar al menos una porción del tampón…

(04/12/2019) Un procedimiento para aislar un ácido nucleico diana humano a partir de una muestra de heces humanas, comprendiendo el procedimiento: a) eliminar un inhibidor de ensayo de dicha muestra de heces para producir una preparación de muestra clarificada, en el que la eliminación de dicho inhibidor de ensayo a partir de dicha muestra comprende: a1) homogeneizar dicha muestra de heces para producir un homogenado; a2) centrifugar dicho homogenado para producir un sobrenadante. a3) tratar dicho sobrenadante con una polivinilpirrolidona insoluble para unir el inhibidor, si está presente, en un complejo de inhibidor; y a4) asilar dicho comprende de inhibidor a partir de dicho sobrenadante para producir una preparación de muestra clarificada; b) capturar…

(13/11/2019) Un método para cuantificar una secuencia de ácido nucleico diana en una muestra, que comprende las etapas de: (a) poner en contacto la muestra con un primer oligonucleótido de amplificación que comprende una secuencia específica diana 3' específica para una primera parte de la secuencia de ácido nucleico diana y es capaz de extenderse por una transcriptasa inversa, bajo condiciones que permiten la hibridación del primer oligonucleótido de amplificación con la primera parte de la secuencia de ácido nucleico diana, generando así un híbrido de preamplificación que comprende el primer oligonucleótido de amplificación y la secuencia de ácido nucleico diana, en donde el primer oligonucleótido de amplificación comprende además una secuencia promotora 5' para una ARN polimerasa; …

(09/10/2019) Un dispositivo microfluídico que comprende: un sustrato transparente para formar imágenes y que tiene una pluralidad de canales celulares separados y definidos espacialmente que tienen una dimensión para alojar células en monocapa; un primer extremo respectivo de dicha pluralidad de canales celulares separados y definidos espacialmente que está en conexión fluida con un canal de entrada de flujo ; y un segundo extremo respectivo de dicha pluralidad de canales celulares separados y definidos espacialmente que está en conexión fluida con un primer extremo de un primer canal de lavado respectivo que presenta un segundo extremo en conexión fluida con un canal de salida de flujo , donde dicho canal de salida de flujo está en conexión fluida…

(21/08/2019) Un procedimiento de determinación de la calidad de un jugo o sidra que comprende: aislar ADN de dicho jugo o sidra de acuerdo con un procedimiento mejorado para aislar ácidos nucleicos de un líquido, el procedimiento comprende: separar los componentes sólidos de los componentes solubles líquidos en dicho líquido; lisar las células presentes en dicho componente sólido para liberar ácidos nucleicos, polisacáridos, lípidos y proteínas; generar una fase orgánica, una interfaz, y una fase acuosa en la que dichos lípidos están en dicha fase orgánica; en la que dichas proteínas están en dicha interfaz; y en la que dichos ácidos nucleicos y polisacáridos están en dicha fase acuosa; separar dicha fase acuosa de dicha fase orgánica y dicha interfaz; y separar dichos ácidos nucleicos en dicha fase acuosa de…

(31/07/2019) Un ácido nucleico dirigido a ácido nucleico guía sencillo diseñado capaz de formar un complejo con una proteína Cas9 de CRISPR de Tipo II, comprendiendo el ácido nucleico dirigido a ácido nucleico guía sencillo diseñado: una secuencia espaciadora, que comprende una secuencia que puede hibridarse con la secuencia de ácido nucleico diana; un dúplex que comprende una región de hibridación entre una secuencia de repetición CRISPR mínima y una secuencia de crtra mínima, en donde la secuencia espaciadora está en 5' del dúplex y una región de protuberancia que no está seguida por un primer tallo, en donde la región de protuberancia comprende una región de nucleótidos no emparejados, y en donde la región de protuberancia comprende una purina no emparejada en el lado de la secuencia de repetición CRISPR mínima de…

(19/06/2019) Un método de procesamiento de una muestra de ácido nucleico, que comprende: (a) hibridar una población de cebadores directos de la fórmula 5'-A-Y-Z con una población de moléculas de ácido nucleico molde , donde: (i) la región A proporciona un sitio de unión a cebador cuando se copia por una polimerasa y es la misma en todos los cebadores de la población de cebadores directos; (ii) la región Y varía entre los diferentes cebadores de la población de cebadores y proporciona una secuencia de recuento; y (iii) la región Z es complementaria a un primer sitio en un polinucleótido diana en una población de moléculas de ácido nucleico molde y es la misma en todos los cebadores de dicha población de cebadores; y dicha hibridación se realiza en presencia de i) un…

(03/04/2019) Una composición lista para PCR para la detección de un miembro del complejo M. tuberculosis en una muestra biológica que comprende como componentes: una mezcla de desoxinucleótidos trifosfatados que comprende cantidades sustancialmente equivalentes de dATP, dCTP, dGTP y dTTP, presentes colectivamente en la composición a una concentración de 0,1 mM a 1 mM; un agente quelante seleccionado del grupo que consiste en ácido etilenglicol tetraacético, ácido hidroxietiletilendiaminotriacético, ácido dietilentriamino pentaacético, N,N-bis(carboximetil)glicina, etilendiaminotetraacético, citrato anhidro, citrato de sodio, citrato de calcio, citrato de amonio, bicitrato de amonio, ácido cítrico, citrato de…