Secuenciación de alto rendimiento de múltiples transcritos de una única célula.
Un procedimiento que comprende:
a) separar células individuales en un compartimento con microesferas conjugadas con oligonucleótidos que comprenden poli(T);
b) lisar las células;
c) permitir que los transcritos de ARNm liberados de las células se hibriden con oligonucleótidos conjugados con las microesferas;
d) agrupar, lavar y resuspender las microesferas en solución con reactivos para retrotranscripción asociada a reacción en cadena de la polimerasa con extensión de solapamiento, que incluye cebadores diseñados para crear un único producto de PCR que comprende ADNc de al menos dos transcritos de interés unidos covalentemente;
e) la suspensión de microesferas y solución de reactivos se emulsiona en la fase oleosa para crear gotitas con no más de una microesfera por gotita;
f) realizar una retrotranscripción asociada a reacción en cadena de la polimerasa con extensión de solapamiento para formar una molécula de ADN individual que comprende al menos dos ADNc de los al menos dos transcritos derivados de una única célula, en el que los al menos dos ADNc comprenden secuencias de TCR emparejadas o secuencias de VH y VL emparejadas; y
g) secuenciar el ADNc asociado con las microesferas.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2013/046130.
Solicitante: THE BOARD OF REGENTS OF THE UNIVERSITY OF TEXAS SYSTEM.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 210 West 7th Street Austin, TX 78701 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: GEORGIOU,GEORGE, HUNICKE-SMITH,SCOTT, DEKOSKY,BRANDON, ELLINGTON,ANDY.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/6806 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › Preparación de ácidos nucleicos para análisis, p. ej. para el ensayo de la reacción en cadena de la polimerasa [PCR] (C12Q 1/6804 tiene prioridad).
PDF original: ES-2774165_T3.pdf
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