Bibliotecas universales del dominio de unión del lado inferior de tipo iii de la fibronectina de tipo III.

Un procedimiento para formar una biblioteca de polipéptidos del dominio de fibronectina de tipo 3 (Fn3) útiles para explorar la presencia de uno o más polipéptidos que tienen una actividad enzimática o de unión seleccionada,

donde dichos polipéptidos tienen las secuencias de aminoácidos de tipo silvestre en las regiones de cadena beta A, AB, B, C, CD, D, E, EF, F y G del 10º módulo de fibronectina de tipo III de la fibronectina humana que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 1, el procedimiento que comprende las etapas de:

(i) alinear secuencias de bucle de aminoácidos AB, CD y EF en una colección de polipéptidos del dominio de fibronectina de tipo 3 nativo,

(ii) segregar las secuencias de bucle alineadas según la longitud del bucle,

(iii) para un bucle y una longitud bucle seleccionados de la etapa (ii), realizar un análisis de frecuencia posicional de aminoácidos para determinar las frecuencias de aminoácidos en cada posición del bucle, en el que la longitud del bucle EF está fijada en 6 aminoácidos (EF/6),

(iv) para cada bucle y longitud de bucle analizados en la etapa (iii), identificar en cada posición un aminoácido de consenso conservado o semiconservado seleccionado y otros aminoácidos de variante natural,

(v) para al menos el bucle EF, formar:

(1) una biblioteca de secuencias de mutagénesis expresadas por una biblioteca de secuencias codificantes que codifican, en cada posición del bucle, el aminoácido de consenso, y si el aminoácido de consenso tiene una frecuencia de aparición igual o inferior a una frecuencia umbral seleccionada de al menos un 50 %, un único aminoácido diana común y cualquier aminoácido coproducido, o

(2) una biblioteca de secuencias combinatorias de variantes naturales expresadas por una biblioteca de secuencias codificantes que codifican en cada posición del bucle, un aminoácido de consenso y, si el aminoácido de consenso tiene una frecuencia de aparición igual o inferior a una frecuencia umbral seleccionada de al menos un 50 %, otros aminoácidos de variantes naturales, incluidos aminoácidos semiconservados y aminoácidos variables cuya frecuencia de aparición está por encima de un umbral mínimo seleccionado en esa posición, o sus equivalentes químicos,

(vi) incorporar la biblioteca de secuencias codificantes en las secuencias codificantes de Fn3 marco para formar una biblioteca de expresión de Fn3, y

(vii) expresar los polipéptidos de Fn3 de la biblioteca de expresión.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2010/066250.

Solicitante: NOVARTIS AG.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: LICHTSTRASSE 35 4056 BASEL SUIZA.

Inventor/es: LOEW,ANDREAS, VASH,BRIAN EDWARD.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N15/10 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
  • C40B30/04 C […] › C40 TECNOLOGIA COMBINATORIA.C40B QUIMICA COMBINATORIA; BIBLIOTECAS, p. ej. QUIMIOTECAS, BIBLIOTECAS IN SILICO. › C40B 30/00 Procedimientos de selección de bibliotecas. › midiendo la capacidad para unirse específicamente a una molécula diana, p. ej. unión anticuerpo-antígeno, unión receptor-ligando.
  • C40B40/02 C40B […] › C40B 40/00 Bibliotecas per se , p. ej. arrays, mezclas. › Bibliotecas contenidas en o exhibidas por microorganismos, p. ej. bacterias o células animales; Bibliotecas contenidas en o exhibidas por vectores, p. ej. plásmidos; Bibliotecas que únicamente contienen microorganismos o vectores.
  • C40B50/02 C40B […] › C40B 50/00 Procedimientos de creación de bibliotecas, p. ej. síntesis combinatoria. › Creación de bibliotecas mediante métodos in silico o métodos matemáticos.

PDF original: ES-2691717_T3.pdf

 

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