Preparación de bibliotecas de ácido nucleico marcado usando protocolo de adición en un solo tubo.
Un método para preparar una biblioteca de fragmentos de ácido nucleico marcados que comprende:
(a) poner en contacto una célula individual directamente con un reactivo de lisis para generar un lisado celular, en donde el reactivo de lisis tiene una o más proteasas, y en donde el lisado celular contiene un ácido nucleico objetivo; (b) inactivar la una o más proteasas para formar un lisado celular inactivado, y (c) aplicar directamente al menos una transposasa y al menos una composición de extremos de transposón que contiene una cadena transferida al lisado celular inactivado en condiciones donde el ácido nucleico objetivo y la composición de extremos de transposón experimentan una reacción de transposición para generar una mezcla, en donde: el ácido nucleico objetivo se fragmenta para generar una pluralidad de fragmentos de ácido nucleico objetivo, la cadena transferida de la composición de extremos de transposón se une a los extremos 5' de cada uno de una pluralidad de fragmentos de ácido nucleico objetivo para generar una pluralidad de fragmentos de ácido nucleico objetivo marcados en 5'; el ácido nucleico objetivo es un ADN bicatenario, y en donde el ácido nucleico objetivo permanece como el ADN bicatenario antes de aplicar una transposasa y una composición de extremos de transposón en la etapa (c).
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2015/037653.
Solicitante: ILLUMINA, INC.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 5200 Illumina Way San Diego, CA 92122 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: KAPER,FIONA, CANN,GORDON.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
- C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2811518_T3.pdf
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