Producción de ácido nucleico circular monocatenario.

Un método para generar ácido nucleico circular monocatenario a partir de una muestra del ácido nucleico diana,

comprendiendo dicho método:

a) formar un complejo que comprende una transposasa y una pluralidad de polinucleótidos en horquilla, teniendo cada uno de dichos polinucleótidos en horquilla una región dúplex que comprende una secuencia de reconocimiento de la transposasa.

b) mezclar dicho complejo con dicho ácido nucleico diana, fragmentando de este modo dicho ácido nucleico diana y ligando dichos polinucleótidos en horquilla a dicho ácido nucleico diana, para formar fragmentos de ácido nucleico unidos en horquilla, teniendo cada fragmento de ácido nucleico unido en horquilla una región del fragmento del ácido nucleico diana dúplex y un hueco del segmento de la base nucleotídica entre cada región del fragmento de ácido nucleico diana y su correspondiente polinucleótido en horquilla;

c) poner en contacto dichos fragmentos unidos en horquilla con una ligasa, ligando de este modo las regiones del fragmento del ácido nucleico diana dúplex de dichos fragmentos unidos en horquilla para formar un ácido nucleico circular monocatenario que comprende un par de bucles opuestos y una región dúplex intermedia, comprendiendo dicha región dúplex un par de espacios de huecos del segmento de la base nucleotídica; y

d) poner en contacto dicho ácido nucleico circular monocatenario simple de la etapa c) con una polimerasa y nucleótidos trifosfatos, llenando de este modo dichos huecos del segmento de la base nucleotídica.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/027753.

Solicitante: IBIS BIOSCIENCES, INC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 2251 Faraday Avenue Suite 150 Carlsbad, CA 92008 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: ESHOO,MARK,W, PICURI,JOHN.

Fecha de Publicación: 19 de Abril de 2017.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
C12N15/66 C12N 15/00 […] › Métodos generales para insertar un gen en un vector para formar un vector recombinante, utilizando la escisión y la unión; Utilización de "linkers" no funcionales o de adaptadores, p. ej. "linkers" que contienen la secuencia para una endonucleasa de restricción.
C12N9/22 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Ribonucleasas.
C12P19/34 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
C40B40/08 C […] › C40 TECNOLOGIA COMBINATORIA. › C40B QUIMICA COMBINATORIA; BIBLIOTECAS, p. ej. QUIMIOTECAS (bibliotecas combinatorias in silico de ácidos nucleicos, proteínas o péptidos G16B 35/00; química combinatoria in silico G16C 20/60). › C40B 40/00 Bibliotecas per se , p. ej. arrays, mezclas. › Bibliotecas que contienen ARN o ADN que codifican proteínas, p. ej. genotecas.
C40B50/06 C40B […] › C40B 50/00 Procedimientos de creación de bibliotecas, p. ej. síntesis combinatoria. › Procedimientos bioquímicos, p. ej. empleando enzimas o microorganismos enteros viables.

PDF original: ES-2626411_T3.pdf

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