Cebadores y métodos de amplificación.
Un procedimiento para generar ácido nucleico amplificado a partir de ARN que comprende:
a) exponer una secuencia molde de ARN a un conjunto de cebadores en condiciones de transcripción inversa, de tal manera que se genere una población mixta de las primeras cadenas de ADNc,
en la que dicho conjunto de cebadores comprende cebadores individuales, comprendiendo cada uno: i) un sitio de secuencia de restricción en 5', (ii) una secuencia hexamérica aleatoria en 3' y (iii) una secuencia de código de barras localizada entre el sitio de secuencia de restricción en 5' y la secuencia hexamérica aleatoria en 3', en la que dicho sitio de secuencia de restricción en cada uno de dichos cebadores individuales es idéntico y en la que dicho conjunto de cebadores comprende todas o casi todas las posibles secuencias hexaméricas aleatorias y en la que cada uno de dichas primeras cadenas de ADNc tiene uno de dichos cebadores individuales en su extremo 5';
b) exponer dicha población mixta de las primeras cadenas de ADNc a dicho conjunto de cebadores en condiciones de polimerización, de tal manera que se genera una población mixta de moléculas de ADNc de doble cadena,
c) digerir dicha población mixta de moléculas de ADNc de doble cadena con una enzima de restricción específica de dicho sitio de secuencia de restricción en 5',
d) tratar dicha población mixta de moléculas de ADNc de doble cadena con un agente de unión, de tal manera que las moléculas individuales de ADNc de doble cadena se ligan entre sí para formar una población mixta de concatémeros;
e) exponer dicha población mixta de concatémeros a cebadores aleatorios en condiciones de amplificación del genoma completo de tal manera que se genere ácido nucleico amplificado;
f) digerir, al menos parcialmente, dicho ácido nucleico amplificado con la misma enzima de restricción específica de dicho sitio de secuencia de restricción en 5', generando de este modo una pluralidad de secuencias digeridas;
y
g) ligar las secuencias adaptadoras de la secuenciación a los extremos de dicha pluralidad de secuencias digeridas para generar una población mixta de moldes de secuenciación ligados al adaptador, en los que dichas secuencias adaptadoras de la secuenciación contienen un sitio de enzima de restricción que es idéntico al sitio de secuencia de restricción en 5' en el conjunto de cebadores.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2012/071308.
Solicitante: IBIS BIOSCIENCES, INC.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 2251 Faraday Avenue Suite 150 Carlsbad, CA 92008 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: ESHOO,MARK,W, GRAY,PHILLIP N.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12P19/34 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
- C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2626058_T3.pdf
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