Anticuerpos de c-Met.

Un anticuerpo monoclonal de c-Met, o fragmento de unión a antígeno del mismo,

que comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR) y tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR), en el que LCDR1 comprende la secuencia de aminoácidos SVSSSVSSIYLH (SEC ID Nº 53) , LCDR2 comprende la secuencia de aminoácidos STSNLAS (SEC ID Nº 54), LCDR3 comprende la secuencia de aminoácidos QVYSGYPLT (SEC ID Nº 56), HCDR1 comprende la secuencia de aminoácidos GYTFTDYYMH (SEC ID Nº 65), HCDR2 comprende la secuencia de aminoácidos RVNPNRRGTTYNQKFEG (SEC ID Nº 68), y HCDR3 comprende la secuencia de aminoácidos ANWLDY (SEC ID Nº 69).

Anticuerpos de c-Met

La presente invención se refiere a anticuerpos que se unen a c-Met y a su uso en el tratamiento de afecciones y trastornos en los que la patogenia está mediada por este receptor.

c-Met, un miembro de la superfamilia de tirosina quinasa, es el receptor para el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) . La unión de HGF a c-Met conduce a la dimerización o multimerización del receptor, la fosforilación de múltiples residuos de tirosina en la región intracelular, la activación catalítica, y la señalización aguas abajo. c-Met también se activa a través de mecanismos independientes de ligando, incluyendo sobreexpresión del receptor, amplificación y mutación. La activación de c-Met aumenta la proliferación celular, la migración, la morfogénesis, la supervivencia (incluyendo la protección de la apoptosis) y la síntesis de la proteasa, las características que están asociadas con el fenotipo de células invasoras y desenlaces clínicos malos y la resistencia a fármacos en pacientes con cáncer. La vía de señalización de c-Met es una de las vías mal reguladas con más frecuencia en los cánceres humanos, y se produce en casi todos los tipos de tumores sólidos.

La publicación internacional PCT WO 09/007427 divulga anticuerpos frente c-Met humanizados con injertos de CDR. El anticuerpo murino 224G11 divulgado en dicha publicación no se unía al dominio c-Met Sema. Otras propiedades funcionales del derivado de IgG1 humanizada de este anticuerpo murino denominado Mab h224G11, se comunican en los resúmenes nº 835 (datos in vitro) y 2792 (datos in vivo) y sus pósteres adjuntos presentados en la reunión de la American Association for Cancer Research (Denver, CO) en Abril de 2009. Estos resúmenes y pósteres divulgan que el Mab h224G11 bivalente está desprovisto de propiedades agonistas, se comporta como antagonista completo de c–Met, y disminuye potencialmente la dimerización de c–Met. Se notifica que 224G11 murino regula por disminución c–Met y bloquea la fosforilación de c–Met in vivo. En el caso de otros receptores, la dimerización es un requisito previo para la internalización y degradación del receptor. Estos resúmenes y pósteres no divulgan datos relativos a la internalización de c-Met. Además, el epítopo al que el anticuerpo humanizado se une dentro de c-Met no se identifica.

La publicación internacional PCT WO 05/016382 También divulga anticuerpos c-Met, pero no identifica el epítopo (s) al que se unen los anticuerpos. Se proporciona un ejemplo de mapeo de epítopos, sin embargo, los resultados presentados indican simplemente que anticuerpos frente a c-Met se unen a un epítopo común, mientras el séptimo anticuerpo frente a c-Met se une a un epítopo distinto. Los epítopos particulares a los que se unen estos anticuerpos c-Met no se proporcionan.

Existe una necesidad de anticuerpos antagonistas humanos frente a c-Met, cuya unión a la cadena α de c-Met humano facilita la internalización del receptor de la superficie celular, en presencia y / o ausencia de HGF. Existe una necesidad de anticuerpos antagonistas frente a c-Met humanos, cuya unión a la cadena α de c-Met humano facilita la internalización del receptor de la superficie celular, en células que comprenden variantes de c-Met que contienen ganancia de mutaciones de función. También hay una necesidad de anticuerpos antagonistas frente a c-Met humanos que inducen la degradación de c-Met y la reducción de c-Met fosforilados. Tales actividades antagonistas podrían disminuir el número de sitios de unión disponibles para HGF en las superficies de células tumorales, y terminar la activación de la vía causada por la sobreexpresión, amplificación, o mutación de c-Met. Al mismo tiempo, dichos anticuerpos antagonistas deben inhibir la unión de HGF a c-Met y la activación de c-Met inducida por HGF, e inducir poca o ninguna actividad agonista de sí mismos.

Los compuestos anticuerpos de la presente invención satisfacen estas necesidades. Se unen a epítopos en la cadena el α del dominio Sema de c-Met humano, inhibiendo la unión de HGF a c-Met y la activación del receptor, mientras que induce poca o ninguna actividad agonista. Los anticuerpos de la presente invención también inducen la internalización del receptor en presencia o ausencia de HGF y también en células que comprenden variantes de c-Met que contienen ganancia de mutaciones de funciones. Inducen la degradación de c-Met e inducen la reducción de c-Met humano fosforilado e inhiben la proliferación dependiente de HGF y e independiente e HGF de las células tumorales que expresan este receptor. En vista de estas propiedades, estos compuestos de anticuerpos deben ser terapéuticamente útiles en el tratamiento de cánceres mediados por c-Met a través de una variedad de diferentes mecanismos.

Además, los presentes compuestos de anticuerpos poseen un número de otras propiedades deseables. Exhiben una afinidad (KD) alta por c-Met, bloquean la fosforilación de c-Met mediada por HGF y la señalización corriente abajo, la proliferación celular y la migración celular; e inducen únicamente fosforilación débil de c-Met, mientras inducen poca o ninguna actividad agonista biológica similar a HGF, tal como la inducción de la proliferación de células tumorales, motilidad, invasión, tubulogénesis, angiogénesis, o efectos antiapoptóticos. Inhiben la activación de la vía de c-Met tanto dependiente de ligando (HGF) como independiente y de ligando. Adicionalmente, los compuestos de anticuerpos de la presente invención se unen preferentemente al dominio extracelular (DEC) de c-Met humano en comparación con los DEC de los receptores estrechamente relacionados Ron y Plexina A2, y no causan "desprendimiento" del DEC de c-Met.

Según la presente invención, se proporciona un anticuerpo monoclonal frente a c-Met, o fragmento de unión a

antígeno del mismo, que comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR) y tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR) , en el que LCDR1 comprende la secuencia de aminoácidos SVSSSVSSIYLH (SEC ID Nº 53) , LCDR2 comprende la secuencia de aminoácidos STSNLAS (SEC ID Nº 54) , LCDR3 comprende la secuencia de aminoácidos QVYSGYPLT (SEC ID Nº 56) , HCDR1 comprende la secuencia de aminoácidos GYTFTDYYMH (SEC ID Nº 65) , HCDR2 comprende la secuencia de aminoácidos RVNPNRRGTTYNQKFEG (SEC ID Nº 68) , y HCDR3 comprende la secuencia de aminoácidos ANWLDY (SEC ID Nº 69) .

Preferiblemente, el anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la presente invención se une a un epítopo dentro de la cadena α de c-Met humano e induce la internalización de c-Met humano de la superficie celular.

Más preferiblemente, el anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la presente invención induce internalización independiente del factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) del c-Met de la superficie celular.

Incluso más preferiblemente, el anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la presente invención se une dentro de una secuencia de aminoácidos seleccionada de:

a) 121VVDTYYDDQL130 (SEC ID Nº 77) ,

b) 131ISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQS156 (SEC ID Nº 78) ,

c) 179ALGAKVLSSVKDRFINF195 (SEC ID Nº 79) , y

d) 216VRRLKETKDGFM227 (SEC ID Nº 80) .

Se prefiere que el anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la presente invención se une dentro de una secuencia de aminoácidos seleccionada de:

a. 123DTYYDD128 (SEC ID Nº 81) ,

b. 144HVFPHNHTADIQS156 (SEC ID Nº 82) ,

c. 192FINF195 (SEC ID Nº 83) , y

d. 220KETKDGFM227 (SEC ID Nº 84) .

Aún más preferido es un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la presente invención que se une una secuencia de aminoácidos dentro del epítopo conformacional que se caracteriza por 123DTYYDD128 (SEC ID Nº 81) , 144HVFPHNHTADIQS156 (SEC ID Nº 82) , 192FINF195 (SEC ID Nº 83) y 220KETKDGFM227 (SEC ID Nº 84) inclusive.

Preferiblemente, el anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la presente invención comprende una región variable de la cadena ligera (LCVR) y una región variable de la cadena pesada (HCVR) , en el que la LCVR comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 5 y la HCVR comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 17.

Se prefiere que el anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la presente invención comprenda una cadena ligera que tiene una... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal de c-Met, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que comprende tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena ligera (LCDR) y tres regiones determinantes de la complementariedad de la cadena pesada (HCDR) , en el que LCDR1 comprende la secuencia de aminoácidos SVSSSVSSIYLH (SEC ID Nº 53) , LCDR2 comprende la secuencia de aminoácidos STSNLAS (SEC ID Nº 54) , LCDR3 comprende la secuencia de aminoácidos QVYSGYPLT (SEC ID Nº 56) , HCDR1 comprende la secuencia de aminoácidos GYTFTDYYMH (SEC ID Nº 65) , HCDR2 comprende la secuencia de aminoácidos RVNPNRRGTTYNQKFEG (SEC ID Nº 68) , y HCDR3 comprende la secuencia de aminoácidos ANWLDY (SEC ID Nº 69) .

2. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la reivindicación 1 que se une a un epítopo dentro de la cadena α de c-Met humano e induce la internalización de c-Met humano de la superficie celular.

3. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 que induce internalización independiente del factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) del c-Met de la superficie celular.

4. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, se une dentro de una secuencia de aminoácidos seleccionada de:

a) 121VVDTYYDDQL130 (SEC ID Nº 77) ,

b) 131ISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQS156 (SEC ID Nº 78) ,

c) 179ALGAKVLSSVKDRFINF195 (SEC ID Nº 79) , y

d) 216VRRLKETKDGFM227 (SEC ID Nº 80) .

5. El anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, se une dentro de una secuencia de aminoácidos seleccionada de:

a. 123DTYYDD128 (SEC ID Nº 81) ,

b. 144HVFPHNHTADIQS156 (SEC ID Nº 82) ,

c. 192FINF195 (SEC ID Nº 83) , and

d. 220KETKDGFM227 (SEC ID Nº 84) .

6. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, se une una secuencia de aminoácidos dentro del epítopo conformacional caracterizado por 123DTYYDD128 (SEC ID Nº 81) , 144HVFPHNHTADIQS156 (SEC ID Nº 82) , 192FINF195 (SEC ID Nº 83) , and 220KETKDGFM227 (SEC ID Nº 84) inclusive.

7. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende una región variable de la cadena ligera (LCVR) y una región variable de la cadena pesada (HCVR) , en el que la LCVR comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 5 y la HCVR comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 17.

8. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 que comprenda una cadena ligera que tiene una región constante kappa y una cadena pesada que tiene una región constante de cadena pesada de IgG4.

9. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende una cadena ligera codificada por la secuencia de polinucleótidos de SEC ID Nº 35, y una cadena pesada codificada por la secuencia de polinucleótidos de SEC ID Nº 47.

10. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que comprende dos cadenas ligeras codificadas por la secuencia de polinucleótidos de SEC ID Nº 35 y dos cadenas pesadas codificadas por la secuencia de polinucleótidos de SEC ID Nº 47.

11. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que la secuencia de aminoácidos de dicha cadena ligera es idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de polinucleótidos de SEC ID Nº 35; y la secuencia de aminoácidos de dicha cadena pesada es idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de polinucleótidos de

SEC ID Nº 47.

12. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y 10, que comprende dos cadenas ligeras, en el que la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera es idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de polinucleótidos de SEC ID

Nº 35; y dos cadenas pesadas, en el que la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada es idéntica a la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de polinucleótidos de SEC ID Nº 47.

13. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 29 y una cadena pesada que tiene una región constante de LA cadena pesada de IgG4.

14. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y 13 que comprende dos cadenas ligeras que tienen la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 29 y dos cadenas pesadas que tienen una región constante de cadena pesada de IgG4.

15. Una composición farmacéutica, que comprende el anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del

mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, y un vehículo, diluyente o excipiente 15 farmacéuticamente aceptable.

16. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para su uso en terapia.

17. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para su uso en el tratamiento de cáncer en un ser humano.

18. Un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la reivindicación 17, en el que dicho cáncer es cáncer gástrico, de riñón, de colon, colorrectal, de cabeza y cuello, de próstata, melanoma o de pulmón.