Un método para el tratamiento de enfermedades malignas mediante la inhibición de la nucleolina.

Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal prácticamente no inmunogénico contra la nucleolina de superficie celular y un portador farmacéuticamente aceptable de este,

para usar en un método para el tratamiento de cáncer en humanos mediante la muerte de las células de cáncer.

Un mïtodo para el tratamiento de enfermedades malignas mediante la inhibiciïn de la nucleolina.

Estar bien preparado para la batalla engendra ïxito; cuando el enemigo es el cïncer, la detecciïn temprana resulta en una probabilidad mayor de que la intervenciïn mïdica serï exitosa. En las etapas iniciales, frecuentemente los tratamientos pueden estar dirigidos sïlo a los tejidos afectados, disminuyendo los efectos secundarios. Si no se detecta tempranamente, las cïlulas cancerosas pueden hacer metïstasis y extenderse por todo el cuerpo. El pronïstico en este caso es mïs grave, y los tratamientos mïdicos que se aplican frecuentemente de manera sistïmica, matan no sïlo las cïlulas cancerosas, sino un gran nïmero de cïlulas sanas.

El Instituto Nacional del Cïncer estima que en el aïo 2002, 1.285 millones de estadounidenses se les diagnosticarï cïncer, y mïs de 560, 000 estadounidenses morirïn de una enfermedad relacionada con el cïncer.

Una caracterïstica distintiva de una cïlula de cïncer es la proliferaciïn incontrolada. La proliferaciïn descontrolada de estas cïlulas puede manifestar las masas celulares (tumores) que interfieren con la funciïn normal del ïrgano. Si la proliferaciïn no se controla o contiene, las cïlulas de los tumores migran y colonizan otros tejidos del cuerpo, lo que eventualmente resulta en la muerte.

Factores externos, tales como el humo del tabaco, radiaciïn y virus, pueden conducir a alteraciones en genes especïficos que resultan en la proliferaciïn celular no regulada. Los factores intrïnsecos, incluyendo mutaciones heredables, niveles hormonales y metabolismo, contribuyen al riesgo de contraer cïncer.

Las cïlulas cancerosas presentan tambiïn aberraciones morfolïgicas y funcionales. La morfologïa celular puede ser menos organizada; por ejemplo, las cïlulas pierden el organelo asimïtrico y organizaciïn estructural (polaridad celular) que permite la funciïn apropiada de la cïlula. Los contactos cïlula-cïlula y cïlula-sustrato, cuyas especificidades son necesarias tambiïn para el funcionamiento normal, frecuentemente se modulan o pierden. Funcionalmente, las cïlulas pueden portar pocas, casi ninguna, funciones de tipo-silvestre, o pueden tener funciones normales exageradas, no reguladas, tales como la secreciïn de hormonas. Tales cïlulas regresan a etapas tempranas del desarrollo, apareciendo menos diferenciadas que las de tipo-silvestre (es decir., padres normales) .

Tambiïn las cïlulas cancerosas frecuentemente expresan o focalizan errïneamente las proteïnas a los compartimentos celulares inapropiados. Las proteïnas pueden ser reguladas positiva o negativamente; incluso las proteïnas que generalmente no se expresan por un tipo celular especïfico se pueden expresar por la contraparte transformada. La expresiïn errïnea de la proteïna puede tener una gran cantidad de efectos celulares corriente abajo, incluyendo cambios drïsticos en la composiciïn de la membrana, formaciïn de organelos , o fisiologïa. La focalizaciïn errïnea de proteïnas (y otras molïculas, tales como lïpidos, etc.) contribuyen ademïs a la pïrdida de la polaridad celular.

Tratamientos para el cïncer

Los mïtodos para tratar los cïnceres incluyen cirugïa (extracciïn fïsica de los tejidos cancerosos) , terapia de radiaciïn (muerte de las cïlulas por la exposiciïn a dosis letales para las cïlulas de radiactividad) , quimioterapia (administraciïn de toxinas quïmicas en las cïlulas) , inmunoterapia (usando anticuerpos que se dirigen a las cïlulas cancerosas y las marcan para su destrucciïn por el sistema inmune innato) y terapias basadas en ïcidos nucleicos (por ejemplo, expresiïn de material genïtico para inhibir el crecimiento del cïncer) . Cada enfoque, sin embargo, tiene sus limitaciones.

La cirugïa, quimioterapia y terapia de radiaciïn sufren de limitaciones significativas similares, tales como la extirpaciïn incompleta de las cïlulas cancerosas o la muerte accidental de cïlulas sanas. Las tïcticas quirïrgicas son mïs eficaces cuando los cïnceres estïn en etapas tempranas y en ïrea localizada limitada en el cuerpo. Incluso en los pocos casos que se diagnostican tempranamente, frecuentemente la extirpaciïn quirïrgica de las cïlulas cancerosas es incompleta, y la reapariciïn de lesiones metastïsicas frecuentemente continïan Cuando los agentes quimioterapïuticos se administran en dosis precisas, ellos son preferentemente tïxicos para las cïlulas cancerosas que proliferan rïpidamente y no afectan a la mayorïa de las cïlulas sanas. Las dosis de radiaciïn de haz de luz externo localmente suministradas son mïs eficaces en las cïlulas que crecen rïpidamente, matïndolas mediante la introducciïn de daïo de ADN no-especïfico. La terapia de radiaciïn, como la cirugïa, funciona mejor cuando la masa cancerosa focalizada estï bien delimitada; el equilibrio de las cïlulas sanas muertascontra cïlulas cancerosas se debe sopesar cuidadosamente. Tanto la quimioterapia como la terapia de radiaciïn no son totalmente selectivas para las cïlulas cancerosas; inevitablemente, algunas cïlulas sanas caen vïctima de los efectos tïxicos, causando profundos efectos secundarios en la vïctima que sufre ya de cïncer.

Otros enfoques comunes, la inmunoterapia y terapia gïnica, pueden ser muy poderosos y superar la cirugïa, quimioterapia y terapia de radiaciïn. Estas tïcnicas dirigidas a factores especïficos se asocian con la supervivencia del tumor, crecimiento celular o metïstasis. Por ejemplo, los anticuerpos pueden dirigirse a proteïnas asociadas a tumores especïficos, tales como el anticuerpo monoclonal que se une a una proteïna de superficie que especïfica a las cïlulas B, CD20 (RITUXANï; Genentech, Inc. y IDEC Inc.) que se usa para tratar tumores malignos de cïlulas B. Un ejemplo de una terapia gïnica eficaz es la inhibiciïn antisentido de la expresiïn debcl-2 (GENASENSEï; Genta, Inc.) . Aunque eficaz, el reto es identificar aquellos genes y proteïnas clïnicamente relevantes y desarrollar la terapïutica adecuada que los dirija a la destrucciïn de la cïlula cancerosa. Ademïs, el proceso no sïlo es laborioso en la identificaciïn de estas molïculas, sino que en muchos casos, las molïculas identificadas serïn especïficas a sïlo un tipo de cïncer o cïlula tumoral.

Mi Y y otros, Cancer Research, 43, 959-960 (Resumen 4752) , 2002, WO 2000/61597, WO 2001/32832 y DE 10037861 todos describen polinucleïtidos que pueden ser utilizados para reducir la nucleolina nuclear o citoplïsmica y asï puede ser ïtil en el tratamiento del cïncer. El resumen de Mi Y y otros indica ademïs que un anticuerpo contra la nucleolina puede frenar el crecimiento de la cïlula cancerosa in vitro a una alta concentraciïn, pero no proporcionï ninguna informaciïn sobre su efectoin vivo o sobre las cïlulas no cancerosas.

En la presente descripciïn se describen mïtodos para tratar tumores o cïncer en un sujeto mediante:

(1) administraciïn de una cantidad terapïuticamente eficaz de un agente anti-nucleolina y un portador farmacïuticamente aceptable. Esta composiciïn farmacïutica puede comprender mïs aun otros agentes quimioterapïuticos o quimiotïxicos, tales como ciclofosfamida, etopïsido, doxorrubicina, metotrexato, vincristina, procabazina, prednizona, dexametasona, citrato de tamoxifeno, carboplatino, cisplatino, oxaliplatino, 5fluorouracilo, camptotecina, ïcido zoledrïnico, ibandronato y mitomicina. En conjunto, puede ademïs aplicarse la terapia de radiaciïn .

(2) administraciïn de una cantidad terapïuticamente eficaz de un anticuerpo anti-nucleolina y un portador farmacïuticamente aceptable, en donde el anticuerpo es sustancialmente no-inmunogïnico para el humano. Esta composiciïn farmacïutica puede comprender ademïs otros agentes quimioterapïuticos o quimiotïxicos. En conjunto, puede ademïs aplicarse la terapia de radiaciïn.

(3) administraciïn de una cantidad terapïuticamente eficaz de un anticuerpo anti-nucleolina, un agente quimioterapïutico o quimiotïxico y un portador farmacïuticamente aceptable.

(4) administraciïn de una cantidad terapïuticamente eficaz de un anticuerpo contra nucleolina y un portador farmacïuticamente aceptable, y el tratamiento adicional del sujeto con terapia de radiaciïn.

(5) administraciïn de una cantidad terapïuticamente eficaz de un ARN de interferencia dïplex para la nucleolina y un portador farmacïuticamente aceptable .

(6) administraciïn de una molïcula antisentido de nucleolina que inhibe la nucleolina la producciïn de la proteïna nucleolina.

(7) administraciïn de una molïcula de ARN de interferencia-nucleolina que inhibe la expresiïn del gen de nucleolina.

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1. Una composiciïn farmacïutica que comprende un anticuerpo monoclonal prïcticamente no inmunogïnico contra la nucleolina de superficie celular y un portador farmacïuticamente aceptable de este, para usar en un mïtodo para el tratamiento de cïncer en humanos mediante la muerte de las cïlulas de cïncer.

2. Una composiciïn para el uso como se reivindica en la reivindicaciïn 1 en donde el anticuerpo es un anticuerpo humano.

3. Una composiciïn para el uso como se reivindica en la reivindicaciïn 1 en donde el anticuerpo es un anticuerpo humanizado.

4. Una composiciïn para el uso como se reivindica en la reivindicaciïn 1 en donde el anticuerpo es un anticuerpo quimïrico o es un fragmento de anticuerpo.

5. Una composiciïn para el uso como se reivindica en la reivindicaciïn 1 en donde el anticuerpo se conjuga a un agente citotïxico.

6. Una composiciïn para el uso como se reivindica en la reivindicaciïn 5 en donde el agente citotïxico es un isïtopo radiactivo, un agente terapïutico quimioterapïutico o una toxina.

7. Una composiciïn para el uso como se reivindica en la reivindicaciïn 5 en donde el agente citotïxico es una toxina la cual es una toxina de bacterias, hongos, plantas o animales.

8. Una composiciïn para el uso como se reivindica en la reivindicaciïn 1 para usar por inyecciïn la cual es estïril.

9. Una composiciïn para el uso como se reivindica en la reivindicaciïn 1 para usar en un humano que se trata ademïs con terapia de radiaciïn.

10. Una composiciïn para el uso como se reivindica en la reivindicaciïn 1 para usar en un humano que se trata ademïs con un agente quimiotïxico o quimioterapïutico.

11. Una composiciïn para el uso como se reivindica en la reivindicaciïn 10 en donde el agente quimiotïxico o quimioterapïutico se selecciona del grupo que consiste de ciclofosfamida, etoposido, doxorrubicina, metotrexato, vincristina, procarbazina, prednisona, dexametasona, citrato de tamoxifeno, carboplatino, cisplatino, oxaliplatino, 5-fluorouracilo, camptotecina, ïcido zoledrïnico, ibandronato y mitomicina, vinorelbina, irinotecan, flutamida, paclitaxel, docetaxel, vinblastina, imatinib mesilato, antraciclina, letrozol, triïxido de arsïnico, anastrozol, pamoato de triptorelin, ozogamicina, clorhidrato de irinotecan, BCG vivo, implante de acetato de leuprolide, bexaroteno, exemestano, clorhidrato de topotecan, clorhidrato de gemcitabina, clorhidrato daunorubicina y citrato toremifeno.

12. Una composiciïn para usar como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en donde el cïncer es melanoma, linfoma, plasmocitoma, sarcoma, glioma, timoma, leucemia, cïncer de mamas, cïncer de prïstata, cïncer de colon, cïncer de hïgado, cïncer esofïgico, cïncer cerebral, cïncer de pulmïn, cïncer de ovarios, cïncer cervical, hepatoma.

13. Un anticuerpo monoclonal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para usar como se define en la reivindicaciïn 1.

14. Un anticuerpo monoclonal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para usar como se define en cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12.