Método para diagnosticar un trastorno asociado con la producción de autoanticuerpos en un sujeto,

que comprende:

proporcionar una muestra biológica que comprende o se sospecha que comprende autoanticuerpos a partir de un sujeto; poner en contacto un antígeno con la muestra, en el que el antígeno comprende un péptido inmunorreactivo con autoanticuerpos aislado de un exosoma; detectar autoanticuerpos en la muestra inmunorreactivos con el antígeno; y comparar un nivel de inmunorreactividad de autoanticuerpos frente al antígeno con un nivel de referencia para diagnosticar el trastorno en el sujeto.

Métodos de detección de autoanticuerpos para diagnosticar y caracterizar trastornos CAMPO TÉCNICO

La materia dada a conocer en este documento se refiere al diagnóstico y a la caracterización de trastornos en un sujeto mediante la detección de autoanticuerpos. En particular, la materia dada a conocer en este documento se refiere a la utilización de antígenos, incluyendo en algunas realizaciones antígenos aislados de exosomas producidos por células, para detectar autoanticuerpos en sujetos para diagnosticar o caracterizar cáncer y/o esterilidad y otros trastornos en el sujeto.

ANTECEDENTES

Muchos trastornos pueden tratarse y/o prevenirse más eficazmente si se diagnostican en un estadio temprano. Esto es particularmente cierto para el cáncer. Por ejemplo, el cáncer de ovarios en estadio I puede curarse en el 90% de los casos, mientras que la supervivencia a cinco años para pacientes con enfermedad avanzada (estadios III y IV) es inferior al 21%. Por tanto, las perspectivas de mejora en la supervivencia del cáncer residen en el diagnóstico temprano. De manera similar, otros trastornos podrían diagnosticarse posiblemente más temprano y/o determinarse mejor el pronóstico para tratamientos si estuviesen disponibles pruebas de diagnóstico temprano más sensibles. Como otro ejemplo particular, es de notoria dificultad diagnosticar y definir trastornos de esterilidad antes de que aparezcan dificultades notificadas con el inicio o mantenimiento hasta el final de un embarazo viable. Ensayos de diagnóstico más sensibles y específicos podrían proporcionar un mejor diagnóstico de los trastornos de esterilidad y el pronóstico de los tratamientos de la esterilidad.

Los ensayos de diagnóstico actuales para muchos trastornos, incluyendo cáncer por ejemplo, se basan en antígenos y dependen de la detección de proteínas circulantes asociadas con el trastorno. Estos ensayos dependen de la expresión, síntesis y liberación de proteínas específicas por células (por ejemplo, células tumorales) o bien mediante diseminación o secreción activa o bien como consecuencia de muerte celular (o bien necrosis o bien apoptosis) . Estas proteínas antigénicas deben "escapar" del sitio primario de la enfermedad, saturar la capacidad de procesamiento de antígenos de los componentes inmunitarios del individuo, obtener acceso a la circulación y alcanzar una concentración en estado estacionario suficiente para detectarse por inmunoensayos basados en enzimas o radiomarcadores. Estos acontecimientos se producen habitualmente bastante después del establecimiento inicial de la enfermedad (por ejemplo, un acontecimiento de transformación neoplásica y desarrollo de focos tumorales) .

Por tanto, los ensayos basados en antígenos actuales no pueden detectar realmente estadios tempranos de un trastorno de interés. Para mejorar significativamente los ensayos de diagnóstico para trastornos de interés, hay una necesidad no satisfecha de un nuevo enfoque para la detección de trastornos que sea más sensible a la presencia de marcadores de enfermedad temprana en el establecimiento del trastorno.

En Taylor D. D. et al., "Identification of Antigenic Components recognised by membrane bound antibodies from ovarian cancer patients", American Journal of Reproductive Immunology, vol. 6, nº 4, 1 de diciembre de 1984, págs. 179-184, los autores describen el uso de inmunoglobulinas, elegidas de fragmentos de membrana derivados de fluido de ascitis para identificar antígenos con los que reaccionan a partir de pacientes con cáncer de ovarios. Se encontró que las inmunoglobulinas se unen a antígenos de tumores de ovarios pero no de ovarios normales.

En Draghia Soren, et al., "Epitomics: serum screening for the early detection of cancer on microarrays using complex panels of tumour antigens", Expert Review of Molecular Diagnostics, vol 5, nº 5, septiembre de 2005, págs. 735-743, los autores describen la producción y el uso de un panel de epítopos/antígenos que reaccionan con autoanticuerpos frente a proteínas tumorales en la búsqueda de pacientes con cáncer de ovarios.

En Taylor D.D. et al., "Shed membrane fragment-associated markers for endometrial and ovarian cancers", Gynecologic Oncology, vol 84, nº 3, marzo de 2002, págs. 443-448, los autores evalúan fragmentos de membrana derivados de tumores circulantes y proteínas asociadas con los mismos como marcadores para diagnosticar o monitorizar la evolución de cánceres de ovarios y endometrial.

En Taylor D.D. et al., "Tumour-derived exosomas and their role in cancer associated T-cell signalling defects". British Journal of Cancer, vol 92, nº 2, 31 de enero de 2005, págs. 305-311, los autores describen la actividad de exosomas derivados de tumores y su efecto sobre linfocitos T.

SUMARIO

La materia dada a conocer en este documento proporciona en algunas realizaciones un método para diagnosticar un trastorno asociado con la producción de autoanticuerpos en un sujeto. El método comprende proporcionar una muestra biológica que comprende o se sospecha que comprende autoanticuerpos a partir de un sujeto y poner en contacto un antígeno con la muestra. El antígeno comprende un péptido inmunorreactivo con autoanticuerpos aislado de un exosoma. El método comprende además detectar autoanticuerpos en la muestra inmunorreactivos con el antígeno y comparar un nivel de inmunorreactividad de autoanticuerpos frente al antígeno con un nivel de referencia para diagnosticar el trastorno en el sujeto.

La materia dada a conocer en este documento proporciona adicionalmente todavía en algunas realizaciones un método para caracterizar un trastorno asociado con la producción de autoanticuerpos en un sujeto. El método comprende proporcionar una muestra biológica que comprende autoanticuerpos a partir de un sujeto y poner en contacto un antígeno con la muestra. El antígeno comprende un péptido inmunorreactivo con autoanticuerpos aislado de un exosoma. El método comprende además detectar los autoanticuerpos en la muestra inmunorreactivos con el antígeno y cuantificar un nivel de inmunorreactividad de autoanticuerpos frente al antígeno para caracterizar de ese modo el trastorno en el sujeto.

En algunas realizaciones de los métodos para diagnosticar o caracterizar trastornos, el trastorno es un cáncer o un trastorno de esterilidad. En algunas realizaciones de los métodos dados a conocer en el presente documento, el trastorno es un cáncer epitelial o un adenocarcinoma. Además, en algunas realizaciones, el antígeno comprende un péptido de antígeno de cáncer seleccionado del grupo que consiste en p53, p63, p73, mdm-2, procatepsina-D, B23, C23, PLAP, cerB/HER2, NY-ESO-1, SCP1, SSX-1, SSX-2, SSX-4, HSP10, HSP27, HSP60, HSP90, GRP78, HoxA7, HoxB7, EpCAM, c-ras, mesotelina, survivina, una mucina, EGF cinasa, c-myc, nucleofosmina y TAG 72. En algunas realizaciones del método, el trastorno es un trastorno de esterilidad seleccionado del grupo que consiste en insuficiencia ovárica prematura (IOP) , síndrome de ovario poliquístico (SOP) , endometriosis, preeclampsia, nacimiento prematuro, restricción del crecimiento intrauterino y pérdida del embarazo recurrente.

En algunas realizaciones de los métodos, la muestra biológica comprende leche, sangre, suero, plasma, ascitis, fluido quístico, fluido pleural, lágrimas, orina, saliva, tejido o combinaciones de los mismos. Además, en algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero.

En algunas realizaciones de los métodos dados a conocer en este documento, el exosoma se aísla de una célula, que puede ser en algunas realizaciones una célula cultivada. En alguna realización, la célula es una célula cancerosa, tal como por ejemplo, una célula de cáncer de ovarios, una célula de cáncer cervical, una célula de cáncer de mama, una célula de cáncer endometrial, una célula de cáncer de colon, una célula de cáncer de próstata, una célula de cáncer de pulmón, una célula de melanoma, una célula de cáncer pancreático, o una célula de coriocarcinoma. En algunas realizaciones particulares, la célula es una célula UL-1, una UL-2, una célula UL-3 o una célula UL-6. En algunas realizaciones particulares, la célula es una célula de placenta.

En algunas realizaciones de los métodos dados a conocer en este documento, la detección comprende una técnica seleccionada del grupo que consiste en ELISA, RIA, inmunoensayo múltiplex, inmunoprecipitación e inmunotransferencia de tipo Western.

La materia dada a conocer en este documento proporciona adicionalmente todavía... [Seguir leyendo]

1. Método para diagnosticar un trastorno asociado con la producción de autoanticuerpos en un sujeto, que comprende:

proporcionar una muestra biológica que comprende o se sospecha que comprende autoanticuerpos a partir de un sujeto; poner en contacto un antígeno con la muestra, en el que el antígeno comprende un péptido inmunorreactivo con autoanticuerpos aislado de un exosoma; detectar autoanticuerpos en la muestra inmunorreactivos con el antígeno; y comparar un nivel de inmunorreactividad de autoanticuerpos frente al antígeno con un nivel de referencia para diagnosticar el trastorno en el sujeto.

2. Método para caracterizar un trastorno asociado con producción de autoanticuerpos en un sujeto, que comprende: proporcionar una muestra biológica que comprende autoanticuerpos a partir de un sujeto; poner en contacto un antígeno con la muestra, en el que el antígeno comprende un péptido inmunorreactivo con autoanticuerpos aislado de un exosoma; detectar los autoanticuerpos en la muestra inmunorreactivos con el antígeno; y cuantificar un nivel de inmunorreactividad de autoanticuerpos con el antígeno para caracterizar de ese modo el trastorno en el sujeto.

3. Método según la reivindicación 2, en el que el trastorno es un cáncer y la caracterización del trastorno comprende determinar un estadio del cáncer.

4. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en el que los autoanticuerpos están asociados con un cáncer o un trastorno de esterilidad.

5. Método según la reivindicación 3, en el que el cáncer es un cáncer epitelial o un adenocarcinoma.

6. Método según la reivindicación 5, en el que el antígeno comprende un péptido de antígeno de cáncer seleccionado del grupo que consiste en un péptido de la familia de supresores de tumores, un péptido de unión a ácido nucleico, un péptido anti-apoptótico, un péptido de la familia de oncogenes, un péptido de secuencia homeótica, un péptido de antígeno de cáncer de testículos, un péptido de la familia de proteínas de choque térmico, un precursor enzimático del péptido de la familia de enzimas prolisosómicas, PLAP, un péptido de la familia de moléculas de adhesión, un péptido relacionado con adhesión y un péptido de la familia de cinasas.

7. Método según la reivindicación 4, en el que el trastorno de esterilidad se selecciona del grupo que consiste en insuficiencia ovárica prematura (IOP) , síndrome de ovario poliquístico (SOP) , endometriosis, preeclampsia, nacimiento prematuro, restricción del crecimiento intrauterino y pérdida del embarazo recurrente.

8. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que la muestra biológica comprende leche, sangre, suero, plasma, ascitis, fluido quístico, lágrimas, orina, saliva, tejido o combinaciones de los mismos.

9. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que el sujeto es un mamífero.

10. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que el exosoma se aísla de una célula.

11. Método según la reivindicación 10, en el que la célula es una célula cultivada.

12. Método según la reivindicación 11, en el que la célula es una célula cancerosa.

13. Método según la reivindicación 12, en el que la célula cancerosa es una célula de cáncer de ovarios, una célula de cáncer cervical, una célula de cáncer de mama, una célula de cáncer endometrial, una célula de cáncer de colon, una célula de cáncer de próstata, una célula de cáncer de pulmón, una célula de melanoma, una célula de cáncer pancreático o una célula de coriocarcinoma.

14. Método según la reivindicación 10, en el que la célula es una célula de placenta.

15. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que la detección comprende una técnica seleccionada del grupo que consiste en ELISA, RIA, inmunoensayo múltiplex, inmunoprecipitación e inmunotransferencia de tipo Western.

16. Uso de un kit para detectar autoanticuerpos en una muestra para diagnosticar o caracterizar un trastorno, en el que el kit comprende un antígeno de péptido inmunorreactivo con autoanticuerpos y un recipiente para contener el antígeno, y en el que el antígeno se aísla de un exosoma.

17. Método según la reivindicación 16, en el que el antígeno está unido a un soporte.

18. Uso según la reivindicación 16 ó 17, que comprende una preparación de anticuerpos que se une a un autoanticuerpo.

19. Uso según la reivindicación 18, en el que la preparación de anticuerpos comprende un marcador detectable.

20. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 19, en el que los autoanticuerpos están asociados con un cáncer

o un trastorno de esterilidad.