Tratamiento del cáncer con una combinación de un agente que perturba la ruta de señalización de EGF y un oligonucleótido que reduce los niveles de clusterina.

Una combinación para tratar el cáncer en un sujeto mamífero, que comprende

(i) un agente que es eficaz para el tratamiento del cáncer en el sujeto mamífero,

y perturba la ruta de señalización celular de HER-2 pero incrementa el nivel de expresión de clusterina, siendo el agente un anticuerpo monoclonal específico para HER-2, un inhibidor de molécula pequeña de HER-2, un péptido o peptidomimético capaz de interferir con HER-2, o un oligonucleótido antisentido anti-HER-2, y

(ii) un oligonucleótido antisentido o una molécula inductora de la interferencia del ARN, induciendo dicho oligonucleótido o molécula inductora de la interferencia del ARN el redireccionamiento del ARNm de clusterina y comprendiendo nucleótidos en una secuencia que es complementaria al ARNm de clusterina, y siendo adicionalmente eficaz para reducir la cantidad eficaz de clusterina en una célula cancerosa.

Tratamiento del cáncer con una combinación de un agente que perturba la ruta de señalización de EGF y un oligonucleótido que reduce los niveles de clusterina.

Esta solicitud reivindica prioridad sobre las Solicitudes Provisionales de los Estados Unidos 60/522.948 presentada el 23 de Noviembre de 2004 y 60/522.960 presentada el 24 de Noviembre de 2004.

Campo de la invención La presente solicitud se refiere al tratamiento del cáncer en un sujeto mamífero usando una combinación de agentes terapéuticos, uno de los cuales es un oligonucleótido eficaz para reducir la cantidad de clusterina, también conocida como mensaje 2 de próstata reprimido por testosterona (TRPM-2) en las células cancerosas, y el otro de los cuales es un agente que perturba la vía de señalización celular de EGF, y también estimula la expresión de clusterina como consecuencia de su acción sobre la diana. Los ejemplos de los agentes que perturban la ruta de señalización de EGF incluyen agentes que se dirigen a HER-2.

Antecedentes de la invención Después del cáncer de pulmón, el cáncer de mama es la segunda causa principal de muerte por cáncer en mujeres. Según la Organización Mundial de la Salud, más de 1, 2 millones de personas serán diagnosticadas de cáncer de mama este año en todo el mundo, y la Sociedad Americana del Cáncer estima que en el año 2004, más de 200.000 mujeres en los Estados Unidos serán diagnosticadas de cáncer de mama invasivo (Fases I- IV) , y cerca de 40.000 mujeres y casi 500 hombres morirán de cáncer de mama en los Estados Unidos en 2004.

La tasa de incidencia de cáncer de mama (número de casos nuevos de cáncer de mama por cada 100.000 mujeres) se incrementó aproximadamente 4% durante la década de 1980, pero se estabilizó en 100, 6 casos por cada 100.000 mujeres en la década de 1990.

Los tratamientos convencionales incluyen cirugía, radiación, quimioterapia y terapias hormonales. Cada uno de estos tratamientos tiene inconvenientes que incluyen la pérdida de tejido de la mama, enfermedades asociadas con la radiación o la quimioterapia, efectos secundarios reproductivos y hormonales, y tasas de supervivencia poco fiables.

Por lo tanto el cáncer de mama es una enfermedad grave y mortal en muchos casos, y requiere tratamientos mejorados para reducir las muertes y la prevalencia.

La clusterina o "TRPM-2" es una proteína ubicua, con una amplia gama de actividades propuestas. En las células epiteliales de la próstata, la expresión de la clusterina aumenta inmediatamente después de la castración, alcanzando niveles máximos en células de próstata de rata de 3 a 4 días después de la castración, coincidiendo con el inicio de la muerte celular masiva. Estos resultados han llevado a algunos investigadores a la conclusión de que la clusterina es un marcador de muerte celular, y un promotor de la apoptosis. Por otro lado, las células de Sertoli y algunas células epiteliales expresan altos niveles de clusterina sin aumento de los niveles de muerte celular. Sensibar et al., (1995) [1] informaron sobre experimentos in vitro realizados para dilucidar con mayor claridad el papel de la clusterina en la muerte de células prostáticas. Los autores utilizaron células LNCaP transfectadas con un gen que codifica clusterina, y observaron si la expresión de esta proteína alteraba los efectos del factor de necrosis tumoral α (TNFα) , al que las células LNCaP son muy sensibles. El tratamiento de las células LNCaP transfectadas con TNFα dio como resultado un incremento transitorio en los niveles de clusterina durante unas pocas horas, pero estos niveles cayeron en el momento en el que se observó la fragmentación del ADN que precede a la muerte celular.

La Solicitud de Patente Publicada de los Estados Unidos US 20030166591 describe el uso de la terapia antisentido que reduce la expresión de clusterina para el tratamiento del cáncer de próstata y el cáncer de células renales.

La Patente de los Estados Unidos Núm. 6.383.808 describe composiciones, en particular oligonucleótidos, y métodos para la modulación de la expresión de clusterina.

La Solicitud de Patente Publicada de los Estados Unidos 2004096882 describe sondas de ARNi terapéuticas que se dirigen a proteínas asociadas con el cáncer incluyendo la clusterina.

La Solicitud de Patente Publicada de los Estados Unidos US2004053874 describe la modulación antisentido de la expresión de clusterina.

La Solicitud de Patente Publicada de los Estados Unidos US 2003166591 describe la terapia antisentido de clusterina usando un oligonucleótido que tiene modificaciones 2'-O- (2-metoxi) etilo.

La Solicitud de Patente Publicada de los Estados Unidos US 2003158130 describe el uso de la sensibilización con quimioterapia y la sensibilización con radiación del cáncer por oligodesoxinucleótidos de clusterina antisentido.

Resumen de la invención Los autores de la presente solicitud han encontrado que los agentes que perturban la ruta de señalización de HER-2 y que son conocidos por ser útiles en el tratamiento del cáncer pueden dar como resultado un aumento de la expresión de la proteína clusterina. Puesto que la clusterina puede proporcionar protección contra la apoptosis, este efecto secundario merma la eficacia del agente terapéutico. Para superar esto, la presente invención proporciona una combinación de agentes terapéuticos que es útil en el tratamiento del cáncer. La combinación de acuerdo con la invención se define en la reivindicación 1.

La combinación de la invención es útil en un método para tratar el cáncer en un sujeto mamífero, que comprende administrar al sujeto el agente terapéutico conocido y un oligonucleótido eficaz para reducir la cantidad de clusterina en las células cancerosas.

El cáncer puede ser, por ejemplo cáncer de mama, osteosarcoma, cáncer de pulmón, cáncer de páncreas, cáncer de la glándula salival, cáncer de colon, cáncer de próstata, cáncer de endometrio, y vejiga.

Otros aspectos y características de la presente invención se harán evidentes para los expertos en la técnica tras la revisión de la siguiente descripción de las realizaciones específicas de la invención junto con las figuras que se adjuntan.

Breve descripción de los dibujos En los dibujos que ilustran las realizaciones de la invención,

La Figura 1 A muestra un análisis citofluorimétrico de la expresión de la proteína HER-2 en las células BT474 no tratadas (zona de color gris) , y tratadas con 10 (línea delgada) , 25 µg/ml (línea gruesa) de trastuzumab durante 48 horas, y un control negativo (área punteada) ;

La Figura 1 B muestra el número de células adherentes (columnas de color negro) y el porcentaje de células apoptóticas (columnas de color blanco) en las células BT474, no tratadas y tratadas con 10 y 25 µg/ml de trastuzumab durante 48 h;

La Figura 2 muestra los datos para las células tratadas con 500 nM de ASO de clusterina u oligodesoxinucleótido de control emparejado erróneamente (MM) durante 6 h, seguido por la exposición a 25 µg/ml de trastuzumab o medio de control, 48h después del tratamiento;

La Figura 3 es un histograma que muestra los porcentajes relativos de células en las diferentes fases del ciclo celular (medidos utilizando la tinción con yoduro de propidio y citometría de flujo) después del tratamiento con 500 nM de ASO de clusterina u oligonucleótido de control MM durante 6 h seguido de exposición a 25 µg/ml de trastuzumab o medio de control; y

La Figura 4 muestra el análisis citofluorimétrico de tinción de anexina V/PI para las células que fueron tratadas con 500 nM de ASO de clusterina u oligonucleótido de control MM durante 6 horas, seguido de exposición a 25 µg/ml de trastuzumab o medio de control. Las células Anexina-V positivas se destacan en el recuadro.

Descripción detallada de la invención Definiciones Según se utiliza en la presente memoria, el término "ruta de señalización celular de HER-2" se refiere a la ruta intracelular que es estimulada tras la unión de un ligando a HER-2, un miembro de la familia de receptores del factor de crecimiento epidérmico (EGFr) . La familia EGFr comprende EGFR, HER-2, HER-3 y HER-4. La familia EGFr se encuentra en el comienzo de una compleja ruta de transducción/comunicación de señales que modula la proliferación, la supervivencia, la migración y la diferenciación celulares.

Según se utiliza en la presente memoria, la expresión "un agente que perturba la ruta de señalización celular de HER-2" se refiere a cualquier agente que es capaz de interrumpir la señal de la célula con HER-2, e incluye un anticuerpo monoclonal específico para HER-2, un inhibidor... [Seguir leyendo]

1. Una combinación para tratar el cáncer en un sujeto mamífero, que comprende

(i) un agente que es eficaz para el tratamiento del cáncer en el sujeto mamífero, y perturba la ruta de señalización celular de HER-2 pero incrementa el nivel de expresión de clusterina, siendo el agente un anticuerpo monoclonal específico para HER-2, un inhibidor de molécula pequeña de HER-2, un péptido o peptidomimético capaz de interferir con HER-2, o un oligonucleótido antisentido anti-HER-2, y

(ii) un oligonucleótido antisentido o una molécula inductora de la interferencia del ARN, induciendo dicho oligonucleótido o molécula inductora de la interferencia del ARN el redireccionamiento del ARNm de clusterina y comprendiendo nucleótidos en una secuencia que es complementaria al ARNm de clusterina, y siendo adicionalmente eficaz para reducir la cantidad eficaz de clusterina en una célula cancerosa.

2. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el agente (i) que perturba la ruta de señalización celular de HER-2 es un anticuerpo monoclonal específico para HER-2.

3. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el anticuerpo es trastuzumab.

4. Una combinación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende el oligonucleótido antisentido que es un oligonucleótido de clusterina antisentido.

5. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el oligonucleótido de clusterina antisentido abarca

o bien el sitio de inicio o bien el sitio de terminación de la traducción del ARNm de clusterina.

6. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 4 o 5, en donde el oligonucleótido de clusterina antisentido se modifica para aumentar la estabilidad in vivo con respecto a un oligonucleótido no modificado de la misma secuencia.

7. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 6, en donde la modificación en el oligonucleótido de clusterina antisentido es una modificació.

2. O- (2-metoxietilo) .

8. Una combinación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la secuencia del oligonucleótido antisentido se expone en uno cualquiera de los SEQ ID NO: 2, 3, 6 a 11, o 13 a 19.

9. Una combinación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la secuencia del oligonucleótido antisentido se expone en el SEQ ID NO: 5 o el SEQ ID NO: 12.

10. Una combinación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la secuencia del oligonucleótido antisentido se expone en el SEQ ID NO: 4.

11. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 10, en donde el oligonucleótido antisentido tiene una cadena principal de fosforotioato, los radicales azúcar de los nucleótidos 1-4 y 18-21 portan modificacione.

2. O-metoxietilo y los nucleótidos restantes (nucleótidos 5-17) so.

2. desoxinucleótidos.

12. Una combinación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la molécula inductora de interferencia del ARN es un oligonucleótido de ARNi que comprende una secuencia seleccionada entre los SEQ ID NO: 21 a 44.

13. El uso de una combinación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para el tratamiento de un cáncer, tal como osteosarcoma, cáncer de pulmón, cáncer pancreático, cáncer de glándula salival, cáncer de colon, cáncer de próstata, cáncer de endometrio o cáncer de vejiga.

14. El uso de una combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, para el tratamiento del cáncer de mama.