Marcadores proteínicos de la artritis disueltos.

Un método de prueba in vitro que comprende:

en una muestra de suero o líquido sinovial obtenida de un sujeto mamífero que tiene,

o corre riesgo de tener unaartritis, determinar la presencia, la ausencia o la cantidad de una proteína 14-3-3 eta en la muestra, en la que 14-3-3 eta está presente en mayores niveles en el suero o el líquido sinovial de los pacientes con artritis encomparación con los pacientes normales.

Marcadores proteínicos de la artritis disueltos Campo de la invención La invención se refiere a ensayos para la proteína 14-3-3 eta que es un biomarcador diagnóstico de la artritis cuando se encuentra en el suero o el líquido sinovial. El alcance de la protección es definido por las reivindicaciones.

Antecedentes de la invención Artritis o artralgia se refieren en general a trastornos inflamatorios de las articulaciones del cuerpo y generalmente se acompaña de dolor, inflamación y rigidez. La artritis puede ser el resultado de cualquiera de varias causas, por ejemplo infección, traumatismo, trastornos degenerativos, trastornos metabólicos o alteraciones u otras etiologías desconocidas. La artritis se puede describir más específicamente como, por ejemplo, artritis reumatoide, artrosis, artritis bacteriana o infecciosa. La artritis puede además acompañar otros trastornos identificados, como gota, espondilitis anquilosante, enfermedad inflamatoria intestinal o psoriasis.

En las articulaciones normales, una pequeña cantidad de líquido sinovial (SF) lubrica el cartílago y la membrana sinovial y actúa como un reservorio de solutos y unas pocas células mononucleares y sinoviales en reposo (3) . Durante la inflamación crónica, aumenta el volumen de SF y la concentración de células inmunitarias y proteínas solubles (4) .

Para algunas formas de artritis, como la artritis reumatoide (RA) , la causa específica puede ser desconocida. La RA

es considerada como un "modelo del umbral multifactorial", en el cual deben actuar muchas influencias genéticas y ambientales sobre la misma persona para que la enfermedad se manifieste (1) . Como carecen de un objetivo específico, las terapias actuales apuntan principalmente a la supresión de la respuesta inflamatoria (2) . Una característica distintiva de la artritis reumatoide es la hiperplasia sinovial, caracterizada por la proliferación de sinoviocitos tipo fibroblastos (FLS) y la infiltración de células inflamatorias en la subíntima, o capa externa de la membrana sinovial (5) . Los FLS, que constituyen alrededor de dos tercios de la población de la membrana sinovial, tienen un sistema secretor bien definido (5) y segregan grandes cantidades de metaloproteinasas de matriz (MMP) destructivas en RA (6) , específicamente MMP-1, 3, 8, 9, 10, 11 y 13 (7-11) . Numerosos investigadores han demostrado que MMP-1 y MMP-3 juegan papeles importantes en la RA (12) y que la colagenasa (MMP-1) es la más abundante (6) . MMP-1 y MMP-3 son biomarcadores que han demostrado ser valiosos para predecir daños estructurales en la RA. La expresión local de las MMP en la artritis, particularmente de MMP-1, es especialmente prominente en el pannus articular adyacente al sitio de destrucción del cartílago y el hueso (13) . Las colagenasas, particularmente MMP-1, escinden las moléculas de colágeno nativo a pH neutro, tornando al colágeno susceptible de degradación enzimática adicional (14) .

Los factores conocidos que activan los FLS para producir MMP-1 incluyen citocinas proinflamatorias como la interleucina 1 (IL-1) y el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-alfa) , y ambos están implicados en la RA (15) . IL-1 alfa y TNF-alfa son capaces de estimular la producción de otras MMP y estromelisinas en los fibroblastos sinoviales y los condrocitos in vitro (16) . Las interacciones de los FLS con TNF-alfa o IL-1 alfa de los linfocitos T activados inducen la expresión de MMP-1 (17) . Los linfocitos T también pueden activar los FLS para producir una gran variedad de 45 mediadores inflamatorios (18) . Este bucle de retroalimentación cíclico entre los FLS y los linfocitos T y sus respectivas citocinas conducen a la activación y proliferación de los linfocitos T y favorece la inflamación persistente observada en la RA (19-21) . Se ha sugerido que los anticuerpos terapéuticos anti-TNF-alfa neutralizan el TNF-alfa y bloquean la activación de los linfocitos T que conduce a este estado persistente (22) .

Las proteínas 14-3-3 son una familia de proteínas diméricas implicadas en una serie de funciones (23-24) . Existen siete isoformas mamíferas de 14-3-3: beta (β) , gamma (γ) , épsilon (ε) , eta (η) , sigma (σ) , tau (τ) y dseda (ζ) . Desde el descubrimiento de la primera proteína 14-3-3 en 1967 (26) , los integrantes de la familia de proteínas 14-3-3 han sido repetidamente redescubiertos basándose en sus nuevas actividades biológicas, principalmente en vías de transducción de señales. Se han identificado como activadores de las triptofano y tirosina hidroxilasas (27-28) y

como inhibidores de la PKC (29) . Estudios posteriores identificaron las proteínas 14-3-3 como moléculas que interactúan con las PKC, integrantes de la familia Raf y ahora más de otras 200 proteínas intracelulares con importantes funciones biológicas (30-31) que incluyen la respuesta al daño del ADN y la regulación del ciclo celular (32-34) . Jamal et al (1998) da a conocer 14-3-3 dseda como biomarcadores de la artritis.

Resumen de la invención La invención se basa en parte en el sorprendente descubrimiento de que isoformas particulares de la proteína 14-33, 14-3-3 eta, están presentes en mayores niveles en el suero y el líquido sinovial de los pacientes con artritis en comparación con los pacientes normales.

De acuerdo con un aspecto de la invención, se proporciona un método para predecir la respuesta de un sujeto a un régimen terapéutico, donde el sujeto tiene, o se sospecha que tiene artritis, en el que el método comprende determinar la presencia, la ausencia, la cantidad o los niveles relativos de una proteína 14-3-3 eta en una muestra, donde la presencia, la ausencia, la cantidad o el nivel relativo de la isoforma es indicativo de sensibilidad de la artritis del sujeto al régimen terapéutico.

Según otro aspecto de la invención, se proporciona un juego para detectar una proteína 14-3-3 eta en una muestra de un paciente, como una muestra de suero o líquido sinovial de un paciente que tiene, o corre riesgo de tener, una artritis. El juego contiene al menos un anticuerpo específico para detectar la isoforma de la proteína 14-3-3. El juego puede contener además al menos un anticuerpo específico para detectar por lo menos una metaloproteinasa de matriz.

Según otro aspecto, se proporciona un método para seleccionar un grupo de sujetos para determinar la eficacia de un régimen terapéutico que se sabe o se sospecha que es útil para el tratamiento de la artritis, el método comprende detectar la presencia, la ausencia, la cantidad o los niveles relativos de una proteína 14-3-3 eta o gamma en una muestra de suero o de líquido sinovial de un paciente, donde dicha presencia, ausencia, cantidad o dicho nivel relativo de una o más de estas isoformas de la proteína 14-3-3 en ese líquido, indica sensibilidad de la artritis del sujeto al régimen terapéutico.

Según otro aspecto, se proporciona un método para tratar la artritis en un sujeto mamífero que lo necesita, donde el método comprende administrar al sujeto un régimen terapéutico, en el que la presencia, la ausencia, la cantidad o el nivel relativo de una isoforma eta o gamma de una proteína 14-3-3 en el suero o el líquido sinovial de ese sujeto indica sensibilidad al régimen terapéutico.

Según otro aspecto, se proporciona un método para tratar la artritis en un sujeto mamífero que lo necesita, donde el método comprende: seleccionar un sujeto que tenga presencia, ausencia, una cantidad o un nivel relativo de proteína 14-3-3 eta en el suero o el líquido sinovial sea indicativo de sensibilidad a un régimen terapéutico; y administrar al sujeto el régimen terapéutico.

Según otro aspecto, se proporciona un método para identificar un sujeto mamífero con mayor sensibilidad a un régimen terapéutico para el tratamiento de la artritis, que comprende el paso de detectar selectivamente una población de sujetos para determinar la presencia, la ausencia, la cantidad o el nivel relativo de proteína eta 14-3-3 en el suero o el líquido sinovial e identificar sujetos sensibles al régimen terapéutico, basándose al menos en parte en la presencia, la ausencia, la cantidad o el nivel relativo de la proteína en el líquido.

En ejemplos escogidos, la divulgación puede incluir ensayos para otros marcadores de la artritis en los sueros o líquidos sinoviales de sujetos, junto con ensayos para determinar la presencia, la ausencia, la cantidad o el nivel relativo de proteínas 14-3-3 eta o gamma. Por ejemplo, los ensayos pueden implicar además determinar la presencia, la ausencia, la cantidad o los niveles relativos de una o más metaloproteinasas de matriz, como MMP-1 o MMP-3, en las muestras de suero o líquido sinovial.

Breve... [Seguir leyendo]

1. Un método de prueba in vitro que comprende:

en una muestra de suero o líquido sinovial obtenida de un sujeto mamífero que tiene, o corre riesgo de tener una artritis, determinar la presencia, la ausencia o la cantidad de una proteína 14-3-3 eta en la muestra, en la qu.

14. 3 eta está presente en mayores niveles en el suero o el líquido sinovial de los pacientes con artritis en comparación con los pacientes normales.

2. Un método de diagnóstico in vitro que comprende determinar la presencia, la ausencia o la cantidad de una proteína 14-3-3 eta en el líquido sinovial o el suero de un sujeto mamífero y evaluar el estado de una enfermedad artrítica basándose al menos en parte en la presencia, la ausencia o la cantidad de la proteína, donde 14-3-3 eta está presente en mayores niveles en el suero o el líquido sinovial de los pacientes con artritis en comparación con los pacientes normales.

3. Un método para evaluar in vitro la eficacia de un medicamento para la artritis, que comprende:

determinar la presencia, la ausencia o la cantidad de una proteína 14-3-3 eta en el líquido sinovial o el suero de un sujeto mamífero sometido a una tanda de tratamiento con el medicamento; y evaluar la eficacia del

medicamento basándose al menos en parte en la presencia, la ausencia o la cantidad de la proteína, donde eta 14-3-3 está presente en mayores niveles en el suero o el líquido sinovial de los pacientes con artritis en comparación con los pacientes normales.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde el sujeto es un ser humano. 25

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde la artritis es artritis reumatoide.

6. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde el sujeto está recibiendo un tratamiento para la

artritis. 30

7. El método de la reivindicación 6, donde el tratamiento es un tratamiento anti-TNF.

8. El método de la reivindicación 6, donde el tratamiento es una terapia modificadora de la enfermedad para artritis.

9. El uso de un compuesto que se une a la proteína 14-3-3 eta para diagnosticar el estado de una enfermedad artrítica en un sujeto mamífero, donde el uso es in vitro.

10. El uso de un compuesto que se une a la proteína 14-3-3 eta para seguir la evolución del estado de una enfermedad artrítica en un sujeto mamífero, donde el uso es in vitro. 40

11. El uso de acuerdo con la reivindicación 9 o 10, donde el compuesto es un anticuerpo.

12. El uso de un juego compuesto por un anticuerpo específico para la isoforma eta de las proteínas 14-3-3 para

usar en la detección de una proteína 14-3-3 eta en una muestra de un paciente según el método de cualquiera de 45 las reivindicaciones 1 a 3.

13. El uso de acuerdo con la reivindicación 12 donde el juego comprende además el uso de un anticuerpo que se une a las metaloproteinasas de matriz (MMP) .