Péptidos inmunomoduladores catiónicos pequeños.

Un péptido inmunomodulador aislado que comprende una secuencia de aminoácidos de VQLRIRVAVIRA (SEC ID Nº:

2) o un péptido relacionado que tiene una secuencia de aminoácidos de LVRAIQVRAVIR (SEC ID Nº: 1213), VQRWLIVWRIRK (SEC ID Nº: 1214), IRWRIRVWVRRI (SEC ID Nº: 1222), IFWRRIVIVKKF (SEC ID Nº: 1224), VRLIVAVRIWRR (SEC ID Nº: 1230), VRLRIRWWVLRK (SEC ID Nº: 1232), VQWRIRVRVIKK (SEC ID Nº: 1238) o KQFRIRVRVIRK (SEC ID Nº: 12).

CAMPO

La presente invención se refiere generalmente a péptidos y más específicamente a péptidos de defensa del huésped inmunomoduladores.

ANTECEDENTES

El tratamiento de infecciones bacterianas con antibióticos es uno de los pilares de la medicina humana. Desafortunadamente, la eficacia de los antibióticos se ha limitado debido a un aumento en la resistencia bacteriana a los antibióticos a pesar de una disminución de los esfuerzos y el éxito en el descubrimiento de nuevas clases de antibióticos. Hoy en día, las enfermedades infecciosas son la segunda causa frecuente de muerte en el mundo y la causa principal de muertes prematuras y pérdida de productividad en el trabajo en países industrializados. Las infecciones bacterianas nosocomiales que son resistentes a terapia producen costes anuales superiores a los 2 billones de dólares y representan más de 8. muertes directas e indirectas en América del Norte solo, mientras que una complicación importante de enfermedades microbianas, concretamente septicemia, representa 7. casos y 14. muertes en América del Norte.

Una limitación importante en el desarrollo de antibióticos han sido las dificultades en encontrar nuevas estructuras con propiedades equivalentes a los antibióticos convencionales, concretamente baja toxicidad para el huésped y un amplio espectro de acción contra patógenos bacterianos. Las recientes y novedosas clases de antibióticos, que incluyen las oxazolidinonas (linezolida), las estreptograminas (Synercid) y los glicolípidos (daptomicina), son todos activos solo contra patógenos Gram-positivos. Los péptidos antlmlcroblanos catiónicos, encontrados en la mayoría de las especies de vida, representan una buena plantilla para una nueva generación de antimicrobianos. Destruyen tanto microorganismos Gram-negativos como Gram-positivos rápidamente y directamente, no seleccionan fácilmente mutantes, trabajan contra bacterias clínicamente resistentes comunes tales como Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) y Enterococcus resistente a vancomlclna (VRE), muestran un efecto sinérgico con antibióticos convencionales y pueden activar frecuentemente la inmunidad innata del huésped sin mostrar inmunogenicidad (Hancock REW. 21. Cationic peptides: effectors ¡n innate immunity and novel antimicrobials. Lancet Infectious Diseases 1, 156-164). Además, parece que contrarrestan algunos de los aspectos más perjudiciales de la inflamación (por ejemplo, septicemia, endotoxemia), que es extremadamente importante ya que la rápida destrucción de las bacterias y posterior liberación de componentes bacterianos tales como LPS o peptldogllcano puede Inducir desregulación inmunitaria letal (reacción de Jarisch-Herxheimer) (Gough M, Hancock REW, Kelly NM. 1996. Antl- endotoxic potential of cationic peptide antimicrobials. Infecí. Immun. 64, 4922-4927). Existe la necesidad en la materia de desarrollar nuevos tratamientos para infecciones que van a usarse como antibióticos de amplio espectro y/o como agentes que potencian selectivamente aspectos de inmunidad innata a la vez que suprimen la Inflamación posiblemente perjudicial.

El sistema inmunitario innato es un sistema de defensa general altamente eficaz y evolucionado que implica una variedad de funciones efectoras que incluyen células fagocíticas, complemento y similares, pero generalmente no se comprende completamente. Los elementos de inmunidad innata están siempre presentes a bajos niveles y se activan muy rápidamente cuando se estimulan por patógenos, actuando para prevenir que estos patógenos causen enfermedad. En términos generales, muchas respuestas inmunitarias innatas conocidas son desencadenadas por la unión de moléculas de señalización microbiana, como lipopolisacárido (LPS), con receptores de reconocimiento de patrones tales como receptores similares a Toll (TLR) sobre la superficie de células huésped. Muchas de las funciones efectoras de la Inmunidad innata se agrupan juntas en la respuesta Inflamatoria. Sin embargo, una respuesta inflamatoria demasiado grave puede producir respuestas que son perjudiciales para el cuerpo y, en un caso extremo, puede producirse septicemia y posiblemente muerte; de hecho, la septicemia se produce en aproximadamente 78. pacientes en América del Norte anualmente con 14. muertes. Así, una Intervención terapéutica para reforzar la Inmunidad innata, que se basa en la estimulación de la señalización de TLR (por ejemplo, usando un agonista de TLR), tiene la posible desventaja de que podría estimular una respuesta Inflamatoria posiblemente perjudicial y/o agravar la respuesta Inflamatoria natural a Infección. Existe otra necesidad en la materia de intervenciones terapéuticas para reforzar la Inmunidad innata que son eficaces y tienen menos efectos secundarios no deseables o reacciones adversas. El documento WO-A-265611 desvela una clase novedosa de péptidos que tienen actividad antimicrobiana, mientras que el documento WO-A-348383 desvela péptidos que potencian la inmunidad innata en un sujeto.

RESUMEN

La invención presenta polipéptidos inmunomoduladores que comprenden las secuencias de aminoácidos de SEC ID N°: 2, 1213, 1214, 1222, 1224, 123, 1232, 1238 ó 12. La invención también presenta variantes de adición de estos polipéptidos, que pueden comprender hasta cincuenta aminoácidos adicionales sobre los extremos terminales amino o carboxi de estas SEC ID N°. Si están presentes aminoácidos adicionales en los extremos amlno y carboxi, los

aminoácidos en el extremo amino pueden ser los mismos o diferentes de los aminoácidos en el extremo carboxi. También se proporcionan polinucleótidos que codifican los polipéptidos inventivos.

También se caracterizan según la presente divulgación procedimientos para potenciar la inmunidad innata. Los procedimientos generalmente comprenden poner en contacto una célula que expresa al menos un polipéptido implicado en la inmunidad innata con una cantidad eficaz de una composición que comprende al menos un polipéptido según la invención.

Poner en contacto la célula con la composición modula, por ejemplo, inhibe o potencia, la expresión del al menos un polipéptido que participa en la inmunidad innata. El polipéptido que participa en la inmunidad innata puede ser una quimiocina o citocina. El polipéptido que participa en la inmunidad innata puede codificarse por el gen MCP-1, MCP- 3, IL-8 o Gro-a.

La divulgación también presenta procedimientos de supresión de una respuesta pro-inflamatoria. Los procedimientos generalmente comprenden poner en contacto una célula que expresa al menos una citocina pro-inflamatoria, mediador o proteína en respuesta a un estímulo pro-inflamatorio con una cantidad eficaz de una composición que comprende al menos un polipéptido según la invención. El poner en contacto la célula con la composición inhibe la expresión de la al menos una citocina pro-inflamatoria, mediador o proteína. En algunos aspectos, la composición inhibe la respuesta inflamatoria o séptica. En algunos aspectos, la composición inhibe la expresión de un gen proinflamatorio o molécula en la célula. En aspectos altamente preferidos, la composición inhibe la expresión de TNF-a en la célula. Los procedimientos son aplicables a suprimir la respuesta pro-inflamatoria inducida por cualquier estímulo. En aspectos preferidos, los procedimientos se utilizan para suprimir la respuesta inflamatoria inducida por un microbio o un ligando microbiano que actúa sobre un receptor similar a Tolí. Por ejemplo, el ligando microbiano puede ser una endotoxina o lipopolisacárido bacteriano.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

Figura 1. Flujo de trabajo general del modelado de QSAR de péptidos antimicrobianos.

Figura 2. Análisis de la sustitución completa del péptido VRLRIRVAVIRA. A. Actividad. Las dos primeras columnas dan la posición (indicada como el número de fila) y la secuencia del código de una letra del péptido original indolicidina. La segunda y tercera filas dan respectivamente el número de columna y los aminoácidos sustituidos en cada posición de aminoácido. Así, por ejemplo, el péptido en la esquina izquierda superior (columna 1, fila 1) es ARLRIRVAVIRA (HH253) y en la esquina derecha inferior (columna 1, fila 12) VRLRIRVAVIRY (HH468). Los resultados presentados dentro de cada recuadro representan el valor de CE5o relativo, es decir, la concentración que produce una disminución del 5 % en la luminiscencia con respecto al péptido parental que aparece una vez en cada fila (por ejemplo, fila 1 columna 17, fila 2 columna 14, etc.), como se ha determinado por tratamiento de la cepa indicadora de lux H11 con péptido durante cuatro horas. Los resultados están codificados en colores como negro = actividad superior a la del péptido parental... [Seguir leyendo]

1. Un péptido inmunomodulador aislado que comprende una secuencia de aminoácidos de VQLRIRVAVIRA (SEC ID N°: 2) o un péptido relacionado que tiene una secuencia de aminoácidos de LVRAIQVRAVIR (SEC ID N°: 1213), VQRWLIVWRIRK (SEC ID N°: 1214), IRWRIRVWVRRI (SEC ID N°: 1222), IFWRRIVIVKKF (SEC ID N°: 1224), VRLIVAVRIWRR (SEC ID N°: 123), VRLRIRWWVLRK (SEC ID N°: 1232), VQWRIRVRVIKK (SEC ID N°: 1238) o KQFRIRVRVIRK (SEC ID N°: 12).

2. El péptido inmunomodulador aislado de la reivindicación 1, en el que el péptido consiste en una secuencia de aminoácidos de VQLRIRVAVIRA (SEC ID N°: 2) o un péptido relacionado que consiste en una secuencia de aminoácidos de LVRAIQVRAVIR (SEC ID N°: 1213), VQRWLIVWRIRK (SEC ID N°: 1214), IRWRIRVWVRRI (SEC ID N°: 1222), IFWRRIVIVKKF (SEC ID N°: 1224), VRLIVAVRIWRR (SEC ID N°: 123), VRLRIRWWVLRK (SEC ID N°: 1232), VQWRIRVRVIKK (SEC ID N°: 1238) o KQFRIRVRVIRK (SEC ID N°: 12).

3. Un polinucleótido aislado que codifica un péptido según la reivindicación 1 o la reivindicación 2.

4. Una composición farmacéutica que comprende un péptido inmunomodulador aislado según la reivindicación 1 o la reivindicación 2.

5. Un péptido inmunomodulador aislado según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, para su uso en terapia.

6. Un péptido inmunomodulador aislado según la reivindicación 5, para su uso en un procedimiento para tratar o prevenir inflamación o una respuesta séptica.

7. Un péptido inmunomodulador aislado según la reivindicación 6, para el uso de la reivindicación 6, en el que el péptido inhibe la expresión de un gen o molécula proinflamatoria.

8. Un péptido inmunomodulador aislado según la reivindicación 6 o la reivindicación 7, para el uso de esa reivindicación, en el que el péptido inhibe la expresión de TNF-a.

9. Un péptido inmunomodulador aislado según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, para el uso de esa reivindicación, en el que la respuesta inflamatoria se induce por un microbio o un ligando microbiano que actúa sobre un receptor similar a Tolí.

1. Un péptido inmunomodulador aislado según la reivindicación 9, para el uso de esa reivindicación, en el que el ligando microbiano es una endotoxina o lipopolisacárido bacteriano.