Inhibición del crecimiento celular.

Uso de un anticuerpo anti-ErbB-3 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un cáncer con sobreexpresión de ErbB-2,

donde el anticuerpo anti-ErbB-3 previene o reduce la formación del heterodímero ErbB-2/ErbB-3.

de la invención

Los autores de la presente invención han encontrado sorprendentemente que la expresión de ErbB-2 conduce a la inhibición de la transformación celular oncogénica mediada por Ras. Es más, los autores de la presente invención han encontrado que la formación del heterodímero ErbB-2/ErbB-3 conduce a la estimulación del crecimiento celular, particularmente en las células cancerosas.

En un primer aspecto, la presente Invención proporciona un método de detener o inhibir el crecimiento celular, cuyo método comprende la prevención o la reducción de la formación del heterodímero ErbB-2/ErbB-3 en una célula de modo que detenga o inhiba el crecimiento de la célula.

Preferiblemente la célula es una célula cancerosa, más preferiblemente un célula de cáncer de mama humano.

Un forma de llevar a cabo el método de acuerdo con la presente invención, es tratar la célula con un agente adecuado. De acuerdo con la invención, el agente es un anticuerpo anti-ErbB-3, donde el anticuerpo anti-ErbB-3 previene o reduce la formación del heterodímero ErbB-2/ErbB-3.

La dlmerlzaclón de ErbB-2 puede estar causada por múltiples mediadores, por ejemplo, un alto nivel de expresión de ErbB-2, anticuerpos que se unen al dominio extracelular de ErbB-2. La detención del crecimiento activado por ErbB- 2 puede superar la transformación celular activada por el gen oncogénico Ras sugiriendo un uso terapéutico de la dlmerlzaclón de ErbB-2. Los autores de la presente invención han encontrado que ErbB-2 interacciona realmente con otros miembros ErbB como ErbB-3. Es más, se encontró que la formación del complejo ErbB-2/ErbB-3 es Independiente de la estimulación por el ligando (neuregulina 1). La presencia ErbB-3 en células que expresan ErbB- 2 era capaz de bloquear de forma suficiente la detención del crecimiento celular activada por el homodlmero ErbB-2. De hecho, ErbB-3 se expresa habitualmente en células cancerosas que expresan ErbB-2 lo que permite el crecimiento de las células cancerosas. Este hallazgo indica que moléculas que son capaces de bloquear la interacción entre ErbB-2 y otras proteínas de membrana ayudará o mejorará la homodimerización de ErbB-2. Ya que ErbB-2 nativo es la principal forma sobre-expresada en las células cancerosas, este descubrimiento permite que se desarrollen nuevos métodos para tratar a los pacientes con cáncer que poseen células cancerosas que expresan ErbB-2.

En un segundo aspecto, la presente invención proporciona un método de terapia del cáncer, cuyo método comprende la prevención o la reducción de la formación del heterodímero ErbB-2/ErbB-3 en una célula cancerosa del paciente deteniendo o inhibiendo de ese modo el crecimiento de la célula cancerosa.

Preferiblemente la célula es una célula cancerosa, más preferiblemente un célula de cáncer de mama humano. De acuerdo con la invención, el agente es un anticuerpo anti-ErbB-3 capaz de prevenir o reducir la formación del heterodímero ErbB-2/ErbB-3 en la célula cancerosa sin afectar substancialmente de manera adversa a las células del paciente. Uno o más agentes pueden actuar mediante la prevención o la reducción de la interacción de ErbB-2 con ErbB-3 en las células cancerosas.

Para su uso clínico en seres humanos serían más adecuados los anticuerpos humanizados de manera que se minimicen las complicaciones de la terapia. Se conocen muy bien las técnicas para el desarrollo de dichos anticuerpos y se pueden usar para desarrollar agentes adecuados que bloqueen, interrumpan o interfieran en la formación o las conformaciones del heterodímero ErbB-2/ErbB-3 en las células para detener o inhibir el crecimiento celular.

También están aquí descritos los compuestos que causan un alto nivel de expresión de Erbb-2 en la célula cancerosa, compuestos que se unen al dominio extracelular de ErbB-2 como anticuerpos y otros ligandos, y compuestos que previenen o reducen la expresión de ErbB-3 en una célula o que previenen la interacción de ErbB-3 con ErbB-2 en una célula. Otros agentes descritos incluyen constructos de expresión de DNA que contienen cDNAs que codifican protelnas/péptidos que pueden mediar o aumentar la homodimerización de ErbB-2 o prevenir o reducir la interacción entre ErbB-2 y otros miembros de ErbB, como ErbB-3. De acuerdo con la invención, estos compuestos son anticuerpos anti-ErbB-3. Los constructos de DNA se pueden suministrar mediante métodos de terapia génica, incluyendo transfección de DNA, infección con virus que portan los cDNAs, u otros métodos o sistemas de producción.

En un tercer aspecto, la presente invención consiste en el uso de un agente que previene o reduce la formación del heterodímero ErbB-2/ErbB-3 en una célula mediante detención o inhibición del crecimiento de la célula en la fabricación de un medicamento para la terapia del cáncer, donde el agente es un anticuerpo anti-ErbB-3.

Para su uso clínico en seres humanos serían más adecuados los anticuerpos humanizados de manera que se minimicen las complicaciones por la terapia. Se conocen muy bien las técnicas para el desarrollo de dichos anticuerpos y se pueden usar para desarrollar agentes adecuados que bloqueen, interrumpan o interfieran en la formación o las conformaciones del heterodímero ErbB-2/ErbB-3 en las células para detener o inhibir el crecimiento celular.

También está aquí descrito un método de prueba o de cribado de agentes de su idoneidad como agentes anticancerosos, el método comprende la exposición de una célula que expresa ErbB-2 y ErbB-3 al agente y la determinación del grado de heterodímero ErbB-2/ErbB-3 en la célula, donde una disminución del heterodímero ErbB-2/ErbB-3 y/o una inhibición de la transformación es indicativa del potencial anticanceroso del agente.

A lo largo de esta especificación, a menos que el contexto indique lo contrario, la palabra comprender o variaciones como comprende o que comprende se entenderá que implican la inclusión de un elemento declarado, entero o etapa, o grupo de elementos, enteros o etapas, pero no la exclusión de cualquier otro elemento, entero o etapa, o grupos de elementos, enteros o etapas.

Con el fin de que la presente invención pueda entenderse más claramente, las formas preferidas se describirán con referencia a los dibujos adjuntos.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1. ErbB-2 interacciona con ErbB-3 en células NIH3T3 co-transfectadas con ErbB-2/ErbB-3 en ausencia de NRG-1. Las células NIH3T3 se transfectaron transitoriamente con ErbB-2, ErbB-3 o ErbB-2 con ErbB-3. Después de 48 horas, se trató una muestra co-transfectada con neuregulina 1 (NRG-1) (50 mM) durante 10 minutos. Se lisaron las células y los receptores se inmunoprecipitaron con anticuerpos anti-ErbB-2 o anti-ErbB-3. Los precipitantes se separaron mediante PAGE al 8% y se analizaron mediante inmunotransferencia.

a) (panel superior) Análisis mediante inmunotransferencia con anticuerpo anti-fosfotirosina. Adviértase que los receptores ErbB-2 se fosforirlaron en las células transfectadas con ErbB-2 y que el NRG-1 aumentó el nivel de fosforilación de los receptores en células co-transfectadas con ErbB-2/3.

a) (panel central) Análisis mediante inmunotransferencia con anticuerpo anti-ErbB-2. Los receptores ErbB-2 se detectaron en células transfectadas solamente con ErbB-2 y en células ErbB-2 co-transfectadas con ErbB-3. El NRG-1 también incrementó la interacción de ErbB-2 con ErbB-3.

a) (panel inferior) Análisis mediante inmunotransferencia con anticuerpo anti-ErbB-3. Todas las muestras exhibieron una banda principal de ErbB-3 (165 kDa) excepto las muestras con células transfectadas con ErbB-2.

b) Las células co-transfectadas con ErbB-2/3 se inmunoprecipitaron con anticuerpo anti-ErbB-2 y fosfotirosina. ErbB- 3 y ErbB-2 se detectaron mediante inmunotransferencia (paneles de arriba a abajo, respectivamente). Adviértase que NRG-1 aumentó el nivel de fosforilación en tirosina y la interacción de ErbB-2 y ErbB-3. Por lo tanto, las interacciones ERbB-2/3 se manifiestan mediante este experimento de co-inmunoprecipitación.

Figura 2. ErbB-2 y ErbB-3 forman heterodímeros en células NIH3T3 co-transfectadas con ErbB-2 y ErbB-3, y los heterodímeros se identificaron mediante experimentos de entrecruzamiento.

a) Las células co-transfectadas con ErbB-2, ErbB-3 o ErbB-2/3 se privaron de suero durante 12 horas. Las células control se estimularon con HRG b1 durante 10 minutos. El entrecruzamiento se llevó a cabo con el reactivo BS3 durante 30 minutos a temperatura ambiente. Las células se lisaron e inmunoprecipitaron con anticuerpo anti-ErbB-2 o anti-ErbB-3 y los agentes precipitantes se sometieron a PAGE al 4% y análisis mediante inmunotransferencia... [Seguir leyendo]

1. Uso de un anticuerpo anti-ErbB-3 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un cáncer con sobreexpresión de ErbB-2, donde el anticuerpo anti-ErbB-3 previene o reduce la formación del heterodímero ErbB-2/ErbB-3.

2. El uso según la reivindicación 1, donde dicho anticuerpo anti-ErbB-3 es un anticuerpo humanizado.

3. El uso según la reivindicación 1, donde dicho anticuerpo anti-ErbB-3 es un anticuerpo H3.105.5.

4. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones de 1-3, donde dicho cáncer con sobreexpresión de ErbB-2 es un cáncer de mama humano.

5. Un método in vitro para detener o inhibir el crecimiento de las células cancerosas que sobre-expresan ErbB- 2, que comprende poner en contacto una célula cancerosa con un anticuerpo anti-ErbB-3, donde el anticuerpo anti- ErbB-3 previene o reduce la formación del heterodímero ErbB-2/ErbB-3.

6. El método de la reivindicación 5, donde dicho anticuerpo es un anticuerpo humanizado.

7. El método de la reivindicación 5, donde dicho anticuerpo anti-ErbB-3 es el anticuerpo H3.105.5.

8. El método de una cualquiera de las reivindicaciones de 5 a 7, donde dicha célula cancerosa es una célula de cáncer de mama humano.

9. El método de la reivindicación 8, donde dicha célula de cáncer de mama humano es SK-BR-3, MDA-MB- 453, o BT-474.

10. Un anticuerpo ant-ErbB-3 para el uso en un método de tratamiento de un cáncer con sobre-expresión de ErbB-2, donde el anticuerpo antl-ErbB-3 previene o reduce la formación del heterodímero ErbB-2/ErbB-3.

11. El anticuerpo anti-ErbB-3 para el uso de la reivindicación 10, donde dicho anticuerpo anti-ErbB-3 es un anticuerpo humanizado.

12. El anticuerpo antl-ErbB-3 para el uso de la reivindicación 10, donde dicho anticuerpo anti-ErbB-3 es el anticuerpo H3.105.5.

13. El anticuerpo antl-ErbB-3 para el uso de cualquiera de las reivindicaciones de 10 a 12, donde dicho cáncer con sobre-expresión de ErbB-2 es un cáncer de mama humano.