Conjugados de dímeros de pirrolo[1,4]benzodiazepina como agentes anticancerígenos.

Un compuesto de fórmula (I):

en la que:

• ---- representa un enlace sencillo o un enlace doble con la condición de que si ---- representa un enlace sencillo entonces:

• ---- representa un enlace sencillo;

• U y/o U', idéntico o diferente, representa(n) independientemente el uno del otro, H;

• W y/o W', idéntico o diferente, representa(n) independientemente el uno del otro: OH, -OR, -OCOR, -COOR, -OCOOR, -OCONRR',

un carbamato cíclico tal que N10 y C11 estén incluidos en un ciclo, -NRCONRR', -OCSNHR, un tiocarbamato cíclico tal que N10 y C11 estén incluidos en un ciclo, -SH, -SR, -SOR, -SOOR, -SO3-, -NRSOOR', -NRR',

una amina cíclica tal que N10 y C11 estén incluidos en un ciclo, -NROR', -NRCOR', -N3, -CN, Hal, un grupo trialquilfosfonio o triarilfosfonio;

- R1, R2, R1', R2', idénticos o diferentes, representan independientemente el uno del otro: H, Hal o un grupo alquilo(C1-C6) sustituido opcionalmente con uno o varios sustituyentes elegidos entre: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo, S(O)qR con q ≥ 0,1 ó 2;

o bien

• R1 y R2 y/o R1' y R2' forman juntos respectivamente un enlace doble ≥CH2 o ≥CH-CH3;

• Y e Y', idénticos o diferentes, representan independientemente el uno del otro H u -OR;

• M representa CH o N;

• ALK y ALK', idénticos o diferentes, representan independientemente uno del otro un grupo alquileno (C1-C6);

- R y R' representan, independientemente el uno del otro, H o un grupo alquilo(C1-C6) o arilo sustituido opcionalmente con uno o varios sustituyentes elegidos entre: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo;

• L representa:

• el grupo -L1-L2- en el que L1 está unido al ciclo aromático que comprende M por el grupo ALK u OALK y representa uno de los grupos siguientes:

Conjugados de dímeros de p¡rrolo[1,4]benzodiazepina como agentes anticancerígenos

La presente invención se refiere a conjugados de dímeros de la p¡rrolo[1,4]benzod¡azep¡na (PBD), a las composiciones que los contienen y a su aplicación terapéutica, principalmente como compuestos anticancerosos. La 5 invención se refiere también al procedimiento de preparación de los conjugados a su aplicación como compuestos anticancerosos, así como a los propios dímeros.

[Área técnica]

Los dímeros de las pirrolo[1,4]benzod¡azep¡nas son compuestos anticancerosos que actúan uniéndose de forma covalente al ADN de las células. Estos derivados han sido descritos en las solicitudes WO /1258 y 1 WO 25/8526 así como en las publicaciones siguientes: Eur.J.Med.Chem. 25, 4, 641-654; Tetrahedron Letters 1988, 29 (4), 515-5118.

La química de los conjugados es conocida desde hace muchos años y ha sido aplicada a varias familias de citotóxicos como por ejemplo los maitansinoides (WO 413272), los taxanos (WO 661258), las leptomicinas (WO 714479), el CC-165 y sus análogos (WO 271269); véase también a propósito de los conjugados, los 15 documentos Monneret C., et al., Bulletln du Cáncer 2, 87 (11), 829-38; Ricart A. D. et al., Nature Clinical Practice Oncology 27, 4, 245-255; Slngh R. y Rickson H. K., Therapeutic Antibodies: Methods and Protocols, 29, 525, 445-467.

[Técnica anterior]

Conjugados de dímeros de la pirrolo[1,4]benzodiazepina ya han sido descritos en las solicitudes WO 78593 o 2 WO 29/16516. Los dímeros usados tienen más particularmente como fórmulas:

en las que T puede representar un grupo arilo o heteroarilo sustituido con -G-D-(Z)p-SZa o -G-D-(Z)p-C(=)ZbRb. G representa un enlace sencillo o doble o bien -O-, -S- o -NR-. D representa un enlace sencillo o bien uno de los grupos siguientes: -E-, -E-NR-, -E-NR-F-, -E-O-, -E-O-F-, -E-NR-CO-, -E-NR-CO-F-, -E-CO-, -CO-E-, -E-CO-F, 25 -E-S-, -E-S-F-, -E-NR-CS-, -E-NR-CS-F- para los que E y F se eligen entre -(OCH2CH2)¡alquil(OCH2CH2)j-,

-alquil(OCH2CH2)¡-alquil-, -(OCH2CH2)í-, -(OCH2CH2)¡cicloalquil(OCH2CH2)j-, -(OCH2CH2)¡heterociclil(OCH2CH2)j-, -(OCH2CH2)¡aril(OCH2CH2)r, -(OCH2CH2)iheteroaril(OCH2CH2)j-, -alquil-(OCH2CH2)¡alquil(OCH2CH2)j-, -alquil- (OCH2CH2)¡-, -alquil-(OCH2CH2)¡c¡cloaquil(OCH2CH2)r, -alquil(OCH2CH2)¡heterociclil(OCH2CH2)j-, -alquil- (OCH2CH2)¡aril(OCH2CH2)j-, -alqu¡l(OCH2CH2)¡heteroaril(OCH2CH2)r, -cicloalquil-alquil-, -alquil-cicloalquil-, 3 -heterociclil-alquil-, -alquil-heterociclicMI-, -alquil-aril-, -aril-alquil-, -alquil-heteroaril-, -heteroaril-alquil-. i yj representan números enteros que van de a 2.. Z representa un grupo alquilo y p es un número entero que vale ó 1.

El grupo L2= -CH2C(=)NR3-(CH2CH2)¡-ALK- que caracteriza algunos de los compuestos de la presente invención comprende el resto amida (-CONR3-) y no puede corresponder en WO 78593 o en WO 29/16516 más que al resto -E-CONR-F- siendo E = alquil y F = -(CH2CH2)¡-alquii-. Sin embargo, el grupo L1 que está unido al ciclo fenilo 35 o piridinilo y que está unido a L2 no ha sido descrito ni sugerido en estas dos solicitudes. En efecto, no podría corresponder más que al resto G. Ahora bien, G no puede ser más que un enlace (sencillo, doble o triple) o bien -O-, -S- o -NR-. Si se trata de los otros compuestos de la presente invención que se caracterizan por el grupo de enlace --ALK-NR3-ALK-S-(CH2CH2)¡-ALK-, ninguno de los restos D de WO 78593 o de WO 29/16516 prevén la combinación de un grupo amina NR3 y de un enlace -S-. Los dímeros siguientes se describen en el 4 documento WO 29/16516:

pero ninguno de estos dímeros comprende un grupo de enlace similar a los descritos en la presente invención (en particular, no incluye el resto -ALK-S-).

Por lo tanto, las dos solicitudes WO 78593 y WO 29/16516 no describen ni sugieren los compuestos de la presente invención.

[Problema técnico]

El problema técnico que pretende resolver la presente invención es el de proponer nuevos conjugados de dimeros de la pirrolo[1,4]benzod¡azepina.

[Definiciones]

Se entiende por:

conjugado: un agente de selección de la diana celular al que está unido de forma covalente al menos una molécula de un compuesto citotóxico;

agente de selección de la diana celular (o "cell binding agent" en inglés): una molécula que tiene afinidad por una diana biológica: se puede tratar por ejemplo de un ligando, una proteína, un anticuerpo, más particularmente monoclonal, un fragmento de proteína o de anticuerpo, un péptido, un oligonucleótido o un oligosacárido. El agente de selección de la diana tiene como función dirigir el compuesto biológicamente activo como un citotóxico hacia la diana biológica;

diana biológica: un antígeno (o grupo de antígenos) localizado preferiblemente en la superficie de las células cancerosas o células estromales asociadas a este tumor; estos antígenos pueden ser por ejemplo, un receptor del factor de crecimiento, un producto de un oncogén o de un gen "supresor del tumor" mutado, una molécula relacionada con la angiogénesis, o una molécula de adhesión;

grupo alquilo : un grupo hidrocarbonado alifático saturado obtenido quitando un átomo de hidrógeno de un alcano. El grupo alquilo puede ser lineal o ramificado. A título de ejemplos, se pueden citar los grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, /'so-butilo, fer-butilo, pentilo, 2,2-dimetilpropilo o hexilo;

grupo cicloalquilo : un grupo alquilo cíclico que comprende entre 3 y 8 átomos de carbono implicados en la estructura cíclica. A título de ejemplos, se pueden citar los grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo;

grupo arilo: un grupo aromático que no contiene ningún heteroátomo, mono- o bicíclico. Se trata más particularmente de grupos fenilo y naftilo;

grupo heteroarilo: un grupo aromático que comprende al menos un heteroátomo (O, S, N) implicado en el ciclo y unido a los átomos de carbono que forman el ciclo, mono- o bicíclico. Se trata más particularmente de los grupos piridinilo, pirrolilo, tienilo, furanilo, pirimidinilo otriazolilo;

grupo heterocicloalquilo: un grupo cicloalquilo que comprende al menos un heteroátomo (O, S, N) implicado en el ciclo y unido a los átomos de carbono que forman el ciclo;

grupo alcoxi: un grupo -O-alquilo, en el que el grupo alquilo es tal como se ha definido anteriormente;

grupo alcanoiloxi: un grupo -O-CO-alquilo, en el que el grupo alquilo es tal como se ha definido

anteriormente;

grupo alquileno: un grupo divalente saturado de fórmula general -CnH2n-, obtenido quitando dos átomos de

hidrógeno de un alcano. El alcano puede ser lineal o ramificado. A título de ejemplos, se pueden citar los grupos metileno (-CH2-), etileno (-CH2CH2-), propileno (-CH2CH2CH2-), butileno (-CH2CH2CH2CH2-), isobutileno

,(), hexileno (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-). Un grupo alquileno lineal puede ser más particularmente de fórmula -(CH2)m-, representando m un número entero;

en los intervalos de valores se incluyen los extremos, (por ejemplo, un intervalo de tipo « i que va de 1 a 6 »

incluye los extremos 1 y 6.

Abreviaturas utilizadas:

AcOEt: acetato de etilo; ALK: grupo alquileno (C1-C12), más particularmente alquileno (Ci-C6); CCM: cromatografía en capa fina (TLC por sus iniciales en inglés); DAR: relación fármaco-anticuerpo, por sus iniciales en inglés: Drug Antibody Ratio; DBU: 1,8-diazabiciclo[5.4.]undec-7-eno; DCC: N,N-diciclohexilcarbodiimida; DCM: diclorometano; DEAD: dietilazodicarboxilato; DIC: N,N-diisopropilcarbodiimida; DIPEA: N,N-diisopropiletilamina; DMA:

dimetilacetamida; DMAP: 4-dimetilaminopiridina; DME: dimetoxietano; DMF: dimetilformamida; DMSO: sulfóxido de dimetilo; e: coeficiente de extinción molar; EEDQ: 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina; EDCI: N-

(3-dimetilaminopropil)-N-etilcarbodiimida; EDTA: ácido etilen-diamino-tetraacético; Fmoc: fluorenilmetoxicarbonilo; GP: grupo protector; Hal: átomo de halógeno; HOBt: 1-hidroxibenzotriazol; HEPES: ácido 4-(2-hidroxietil)-1- piperazinetanosulfónico; LG: grupo saliente; NHS: N-hidroxisuccinimida; NMP: N-metilpirrolidinona; PR: presión reducida; Rf: factor de retención; SEC : cromatografía de exclusión esférica; TA: temperatura ambiente; TBDMS: terc-butildimetilsililo; TEA: trietilamina; TFA: ácido trifluoroacético; TIPS: triisopropilsililo; THF: tetrahidrofurano; tR : tiempo de retención.

[Figuras]

Fig. 1: espectro de masas de alta resolución del conjugado del ejemplo 1 después de desglicosilación;

Fig. 2: espectro de masas de alta resolución... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de fórmula (I):

^COZbRb

en la que:

representa un enlace sencillo o un enlace doble con la condición de que si representa un enlace sencillo entonces:

representa un enlace sencillo;

U y/o U, idéntico o diferente, representa(n) independientemente el uno del otro, H;

W y/o W, idéntico o diferente, representa(n) independientemente el uno del otro: OH, -OR, -OCOR, -COOR, -OCOOR, -OCONRR, un carbamato cíclico tal que N1 y C11 estén incluidos en un ciclo, -NRCONRR, -OCSNHR, un tiocarbamato cíclico tal que N1 y C11 estén incluidos en un ciclo, -SH, -SR, -SOR, -SOOR, -SO3', -NRSOOR, -NRR, una amina cíclica tal que N1 y C11 estén incluidos en un ciclo, -NROR, -NRCOR, -N3, -CN, Hal, un grupo trialquilfosfonio o triarilfosfonio;

R1, R2, R1, R2, idénticos o diferentes, representan independientemente el uno del otro: H, Hal o un grupo alquilo(Ci-C6) sustituido opcionalmente con uno o varios sustituyentes elegidos entre: Hal, CN, NRR, CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo, S()qR con q = ,1 ó 2;

o bien

R1 y R2 y/o R1 y R2 forman juntos respectivamente un enlace doble =CH2 o =CH-CH3;

Y e Y, idénticos o diferentes, representan independientemente el uno del otro H u -OR;

M representa CH o N;

ALKy ALK, idénticos o diferentes, representan independientemente uno del otro un grupo alquileno (C1-C6);

R y R representan, independientemente el uno del otro, H o un grupo alquilo(Ci-C6) o arilo sustituido opcionalmente con uno o varios sustituyentes elegidos entre: Hal, CN, NRR, CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo;

L representa:

el grupo -L1-L2- en el que L1 está unido al ciclo aromático que comprende M por el grupo ALK u OALK y representa uno de los grupos siguientes:

-ALK-S-

p

-O-ALK-NRg-ALK-S'

N-CH,

O

-O-ALK-NR3-ALK-S-

-O-ALK-N \l"^ ALK-S-

-O-ALK-

ALK-S-

/ \

-O-ALK-N N-ALK-S-

y l_2 representa el grupo -CH2C(=)-NR3-(CH2CH2)i-ALK- unido a Li por-CH2C(=)- o bien

el grupo -O-ALK-NR3-ALK-S-(CH2CH2)¡-ALK- unido al ciclo aromático que comprende M por el grupo OALK;

R3 representa H o un grupo alquilo (C1-C6);

i representa un número entero que va de 1 a 4, mejor de 1 a 2, preferentemente de 1 a 1;

Zb representa un enlace sencillo, -O- o -NH-, representando Rb H o un grupo alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C7), arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo (C3-C7) o bien Zb representa un enlace sencillo y Rb representa Hal.

2. Compuesto según la reivindicación 1, de fórmula:

3. Compuesto según la reivindicación 1 de fórmula (IA) o (IB):

4. Compuesto según las reivindicaciones 1 a 3 en el que Y e Y representan un grupo alcoxi (C1-C4), más particularmente metoxi.

5. Compuesto según las reivindicaciones 1 a 4 en el que L se elige entre:

-ALK-S-CH2C(=)-NH-(CH2CH2)¡-CH2CH2-

o

--ALK-NR3-ALK-S'

^NCHCH2C(=)NH-(CH2CH2),-CH2CH2 O

-O-ALK-N R3-ALK-S-CH2C(=)-NH-(CH2CH2)¡-CH2CH2

-O-ALK-N

ALK-S-CH2C(=)-NH-(CH2CH2>,-CH2CH2.q-alk-n

\

o

alk-sch2C(=)-nh-(ch2ch2o>,-ch2ch2

-O-ALK-N N-ALK-S-CH2C(=)-NH-(CH2CH2),-CH2CH2

--ALK-NR3-ALK-S-(CH2CH2)¡-CH2CH2-

6. Compuesto según la reivindicación 1 ó 5 en el que L se elige entre:

7. Compuesto según la reivindicación 1 ó 5 en el que L se elige entre:

8. Compuesto según la reivindicación 1 a 7 en el que -COZbRb representa -COOH, -COO-alquilo(Ci-C6), -COOCH3,

P. ,SO,M /^n

----COoN

COO-N | =Hocat¡ón V\ Gl

COO-N.

-COOCH2CH=CH2, o o

-y m=h 1

o el grupo

en el

que Gl

representa al menos un grupo inductivo, más particularmente o

9. Compuesto según la reivindicación 1 elegido entre uno de los siguientes:

-------- COO(v /)F O ^

O»- J-O

o

o

o

,.

o

1. Procedimiento de preparación de un conjugado, que consiste en:

(i) poner en contacto y dejar reaccionar una disolución acuosa de un agente de selección, eventualmente tamponada, y una disolución de un compuesto tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 1 a 9;

(¡i) después separar opcionalmente el conjugado formado en la etapa (i) del compuesto de fórmula (I) y/o del agente de selección que no haya reaccionado y/o de los agregados que se hayan formado.

11. Procedimiento según la reivindicación 1 en el que el grupo -C(=)ZbRb es reacivo frente a los grupos químicos presentes en el agente de selección, principalmente frente a los grupos amino presentes en un anticuerpo, de forma que se asegura la unión del compuesto de fórmula (I) con el agente de selección por formación de un enlace covalente.

12. Procedimiento según las reivindicaciones 1 a 11 en la que la etapa (ii) consiste en:

- separar el conjugado que se forma en la etapa (i) del agente de selección que no ha reaccionado y de los agregados opcionalmente presentes en la disolución;

o bien

- no separar el conjugado de la etapa (i) más que del compuesto de fórmula (I) que no haya reaccionado y de los agregados que se hayan formado y dejar en la disolución el agente de selección que eventualmente no haya reaccionado.

13. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 12, en el que el agente de selección es un ligando, una proteína, un anticuerpo, más particularmente monoclonal, un fragmento de proteína o de anticuerpo, un péptido, un ollgonucleótldo o un ollgosacárldo.

14. Procedimiento según las reivindicaciones 1 a 13 en el que la reacción tiene lugar a una temperatura comprendida entre 2 y 4°C y/o la duración de la reacción varía entre 1 y 24 h.

15. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 14 en el que después de la etapa (i) o (ii), la disolución del conjugado experimenta una etapa (iii) de ultrafiltración y/o de diafiltración.

16. Un conjugado susceptible de ser obtenido por el procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 15.

17. Conjugado según la reivindicación 16, en el que el agente de selección es un anticuerpo, preferentemente monoclonal, caracterizado por una DAR media comprendida entre 1 y 1, preferentemente entre 1,5 y 7.

calculándose el DAR por la ecuación DAR = Cd/ca

con :

Cd = [(©A LOI X Al2) - (©A L2 X A|_Ol)] / [(©D L2 X ©a LOl) " (©A L2 X ep LOl)]

Ca = [Aloi - (Cd x eo loi)] I ©a loi

designando Aloi y Alo2 las absorbancias de una disolución acuosa del conjugado a las longitudes de onda L1 y L2 , medidos en el pico correspondiente del espectro de SEC;

eD L1 y eo L2 designan respectivamente los coeficientes de absorción molares del dímero de pirrolo[1,4]benzodiazepina antes de conjugación a las dos longitudes de onda L1 y L2;

eA loi y eA L2 designan respectivamente los coeficientes de absorción molares del anticuerpo desnudo a las dos longitudes de onda L1 y L2,

L1= 28 nm y L2= 32 nm.

18. Utilización de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 9 para la preparación de un agente de selección al que esté unido de forma covalente, en la posición para- de M, el dímero de fórmula:

19. Utilización según la reivindicación 18 en la que el agente de selección es un anticuerpo, preferentemente monoclonal.

2. Utilización según la reivindicación 18 ó 19 en la que el dímero tiene por fórmula:

H ----N

o

21. Utilización según las reivindicaciones 18 a 2 en el que Y e Y representan un grupo alcoxi (C1-C4), más particularmente metoxi.

22. Agente de selección de la diana al que se ha unido de forma covalente en la posición para de M el dímero de fórmula:

después reacción de un compuesto tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 1 a 9 con el agente de selección de la diana.

23. Agente de selección según la reivindicación 22 en la que el dímero es tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 2 ó 21.

24. Agente de selección según la reivindicación 23 que presenta afinidad por un antígeno o grupo de antígenos localizado en células cancerosas o células estromales asociadas a un tumor.

25. Agente de selección según las reivindicaciones 22 a 24 que es un anticuerpo, preferentemente monoclonal.

26. Disolución de conjugado susceptible de ser obtenido por el procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 15.

27. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 9 para usarlo como compuesto anticanceroso.

28. Conjugado según la reivindicación 16 ó 17 para usarlo como compuesto anticanceroso.

29. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o bien un conjugado según la reivindicación 16 ó 17 así como al menos un excipiente.

3. Utilización de un compuesto de fórmula P2:

L-C(=)ZbRb

o bien un compuesto de fórmula:

E

XALK M ALK' p

L*

\ ~|U|

en la que L* se elige entre: ALK

-ALK-SH;

-O-ALK-NR3-ALK-SH;

o

a-xJL^sh

-O-ALK-N^ ALK-SH.o.ALK-N^ /

ALK'

ALK-SH -O-ALK-N^. \l-ALK-SH

fórmulas en las que:

L, M, ALK, ALK, R3, Zb y Rb son tales como se han definido en una de las reivindicaciones 1 a 9;

E y E representan, independientemente uno del otro, un grupo -OH o un grupo saliente.

como intermedio para la preparación de un compuesto de fórmula (I) tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 1 a 9.

31. Utilización según la reivindicación 2 en la que el grupo saliente se elige entre un átomo de halógeno, un grupo mesilato, tosilato, nosilato o -OPPh3+.

32. Utilización de un compuesto elegido entre uno de los siguientes:

entendiéndose que la función terminal -COOH puede ser remplazada por una función terminal -COO-alquilo(Ci-C6), principalmente -COOMe, y que la función terminal -SH puede ser remplazada por una función disulfuro, principalmente -SSMe,

como intermedio para la preparación de un compuesto de fórmula (I) tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 1 a 9.

33. Utilización de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 9 para la fabricación de un medicamento anticanceroso.

34. Utilización de un conjugado según las reivindicaciones 16 ó 17, para la preparación de un medicamento anticanceroso.