Agentes de unión al anti-cd70 humanizado y usos de los mismos.

Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a la CD70 humana,

que comprende una región variable de cadena pesada humanizada que comprende una secuencia de aminoácidos al menos un 95 % idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº.:6, SEC ID Nº.: 14 o los aminoácidos 20-137 de la SEC ID Nº.:4 y una región variable de la cadena ligera humanizada que comprende una secuencia de aminoácidos al menos un 95 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº.: 24, en donde la región variable de la cadena pesada comprende las CDR de Kabat de la SEC ID Nº.:2 y la región variable de la cadena ligera comprende las CDR de Kabat de la SEC ID Nº:22, en donde el anticuerpo del fragmento de unión al antígeno del mismo se une a la CD70 con una constante de disociación (Kd) inferior a 10-9M.

Agentes de unión al anti-cd70 humanizado y usos de los mismos Solicitudes relacionadas [0001] Esta solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud de Patente Provisional Estadounidense nº . 60/673.070, presentada el 19 de abril de 2005.

Antecedentes [0002] La CD70 es un miembro de la familia del factor de necrosis tumoral (TNF) de moléculas asociadas a membranas celulares y secretadas que son expresadas por una variedad de tipos de células normales y malignas. La secuencia primaria de aminoácidos (AA) de la CD70 predice una proteína transmembrana de tipo II con su extremo carboxilo expuesto en el exterior de las células, y su extremo amino localizado en el lado citosólico de la membrana plasmática (Bowman et al., 1994, J. Immunol. 152:1756-61; Goodwin et al, 1993, Cell 73:447-56) . La CD70 humana está compuesta de un dominio citoplasmático 20 AA, un dominio transmembrana 18 AA, y un dominio extracitoplasmático 155 AA con dos sitios potenciales de N-glicosilación (Bowman et al., anteriormente mencionado; Goodwin et al., anteriormente mencionado) . La inmunoprecipitación específica de células que expresan la CD70 marcadas con radioisótopos mediante anticuerpos anti-CD70 produce polipéptidos de 29 y 50 kDa (Goodwin et al., anteriormente mencionado; Hintzen et al., 1994, J. Immunol 152:1762-73) . En base a su homología respecto de TNF-alfa y TNF-beta, en especial en las cadenas estructurales C, D, H e I, se predice una estructura trimérica para la CD70 (Petsch et al., 1995, MoI Immunol. 32:761-72) .

Los estudios inmunohistológicos originales revelaron que la CD70 se expresa en las células B de los centros germinales y en pocas células T en amígdalas, piel e intestino (Hintzen et al., 1994, Int. Immunol. 6:477-80) . Posteriormente, se informó de que la CD70 se expresa en la superficie celular de linfocitos T y B recién activados por antígenos, y su expresión decae tras la retirada de la estimulación antigénica (Lens et al., 1996, Eur. J. Immunol. 26:2964-71; Lens et al., 1997, Immunology 90:38-45) . En el sistema linfoide, las células asesinas naturales activadas (Orengo et al., 1997, Clin. Exp. Immunol. 107:608-13) y las células dendríticas periféricas maduras de ratón (Akiba et al., 2000, J. Exp. Med. 191:375-80) también expresan la CD70. En los linajes no linfoides, se ha detectado la CD70 en las células epiteliales medulares del timo (Hintzen et al., 1994, anteriormente mencionado; Hishima et al., 2000, Am. J. Surg. Pathol. 24:742-46) .

La CD70 no se expresa en células normales no hematopoyéticas. La expresión de la CD70 se limita en gran parte a las células T y B recién activadas por el antígeno bajo condiciones fisiológicas y su expresión se regula de forma descendente cuando cesa la estimulación antigénica. Existen pruebas provenientes de modelos animales que sugieren que la CD70 puede contribuir a trastornos inmunológicos tales como, por ej., artritis reumatoide (Brugnoni et al., 1997, Immunol. Lett. 55:99-104) , artritis psoriásica (Brugnoni et al., 1997, Immunol. Lett. 55:99-104) y lupus (Oelke et al., 2004, Arthritis Rheum. 50:1850-60) . Además de su posible papel en las respuestas inflamatorias, la CD70 también se expresa en una diversidad de células transformadas incluyendo las células de linfoma B, células de Hodgkin y de Reed-Sternberg, células malignas de origen neural y una serie de carcinomas.

Según esto, existe la necesidad de anticuerpos anti-CD70 y de otros agentes de unión a la CD70 capaces de ejercer un efecto citotóxico, citostático o inmunomodulador clínicamente útil sobre las células que expresan la CD70 y, sobre todo, que no ejerzan efectos no deseados sobre las células que no expresan la CD70. Tales compuestos serían agentes terapéuticos útiles contra los cánceres que expresan la CD70 o contra trastornos inmunológicos mediados por células que expresan la CD70. (La recitación de cualquier referencia en la presente solicitud no es una admisión de que la referencia sea una técnica anterior a la presente solicitud) .

Breve resumen [0006] La presente invención, según las reivindicaciones, proporciona anticuerpos contra la CD70 y agentes de unión a la CD70 relacionados y tales agentes de unión para su uso en la profilaxis o tratamiento de cánceres que expresan la CD70 y de trastornos inmunológicos en los que hay una presencia de células que expresan la CD70. El agente de unión a la CD70, por sí solo o en combinación con un agente terapéutico, ejerce un efecto citotóxico, citostático y/o inmunomodulador sobre células que expresan la CD70.

En un aspecto, se proporcionan agentes que se unen a la CD70 según las reivindicaciones. El agente de unión a la CD70 puede ser, por ejemplo, un anticuerpo. En algunas realizaciones, el agente de unión incluye al menos un dominio efector que media al menos una respuesta ADCC, ADCP o CDC en el sujeto. En algunas realizaciones, el agente de unión ejerce un efecto citostático, citotóxico o inmunomodulador en ausencia de conjugación con un agente terapéutico. En algunas realizaciones, el agente de unión se conjuga con un agente 2 10

terapéutico que ejerce un efecto citotóxico, citostático o inmunomodulador. El anticuerpo puede competir por unirse a la CD70 con un anticuerpo monoclonal 1F6 ó 2F2.

En otro aspecto, se proporcionan anticuerpos contra la CD70 y agentes que se unen a la CD70 relacionados conforme a las reivindicaciones, para su uso en un método de tratamiento de un cáncer que expresa la CD70 en un sujeto. El uso generalmente incluye administrar al sujeto una cantidad efectiva de un agente de unión a la CD70. En algunas realizaciones, el agente de unión incluye al menos un dominio efector que media al menos una respuesta ADCC, ADCP o CDC en el sujeto. En algunas realizaciones, el agente de unión ejerce un efecto citostático, citotóxico o inmunomodulador en ausencia de conjugación con un agente terapéutico. En algunas realizaciones, el agente de unión se conjuga con un agente terapéutico que ejerce un efecto citotóxico, citostático o inmunomodulador.

El agente de unión a la CD70 puede ser, por ejemplo, un anticuerpo. El anticuerpo puede incluir, por ejemplo, un dominio efector de un anticuerpo IgM o IgG humano. El anticuerpo IgG puede ser, por ejemplo, un subtipo IgG1 o IgG3 humano. En algunas realizaciones, el anticuerpo incluye una región constante humana. En algunas realizaciones, el agente de unión a la CD70 compite por unirse a la CD70 con un anticuerpo monoclonal 1F6 ó 2F2. En otras realizaciones, el anticuerpo es un 1F6 humanizado. En otras realizaciones, el anticuerpo es un 2F2 humanizado. El anticuerpo puede ser, por ejemplo, monovalente, divalente o multivalente.

El cáncer que expresa la CD70 puede ser un tumor renal, un linfoma de células B, un carcinoma de colon, enfermedad de Hodgkin, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, linfoma de no Hodgkin, linfoma de células de manto, leucemia linfocítica crónica, leucemia linfocítica aguda, un carcinoma nasofaríngeo, tumor cerebral

o un carcinoma tímico. El tumor renal puede ser, por ejemplo, un carcinoma de células renales. El tumor cerebral puede ser, por ejemplo, un glioma, un glioblastoma, un astrocitoma o un meningioma. El sujeto puede ser, por ejemplo, un mamífero, tal como un ser humano.

En otro aspecto, se proporcionan anticuerpos contra la CD70 y agentes que se unen a la CD70 relacionados conforme a las reivindicaciones, para su uso en un método de tratamiento de un trastorno inmunológico. El uso incluye administrar a un sujeto una cantidad efectiva de un agente de unión a la CD70. En algunas realizaciones, el agente de unión incluye al menos un dominio efector que media al menos una respuesta ADCC, ADCP o CDC en el sujeto. En algunas realizaciones, el agente de unión ejerce un efecto citostático, citotóxico o inmunomodulador en ausencia de conjugación con un agente terapéutico. En algunas realizaciones, el agente de unión se conjuga con un agente terapéutico que ejerce un efecto citotóxico, citostático o inmunomodulador. El agente de unión a la CD70 puede ser, por ejemplo, un anticuerpo. El anticuerpo puede incluir, por ejemplo, un dominio efector de un anticuerpo IgM o IgG humano. El anticuerpo IgG puede ser, por ejemplo, un subtipo IgG1 o IgG3 humano. En algunas realizaciones, el anticuerpo incluye una región constante humana.

El trastorno inmunológico puede ser, por ejemplo, un trastorno inmunológico mediado por células T. En algunas realizaciones, el trastorno inmunológico mediado por células T comprende células T activadas que expresan la CD70. En algunas realizaciones, las células T en reposo no se agotan sustancialmente con la administración del conjugado anticuerpo-fármaco. El trastorno inmunológico mediado por... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a la CD70 humana, que comprende una región variable de cadena pesada humanizada que comprende una secuencia de aminoácidos al menos un 95 % idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº .:6, SEC ID Nº .: 14 o los aminoácido.

2. 137 de la SEC ID Nº .:4 y una región variable de la cadena ligera humanizada que comprende una secuencia de aminoácidos al menos un 95 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº .: 24,

en donde la región variable de la cadena pesada comprende las CDR de Kabat de la SEC ID Nº .:2 y la región variable de la cadena ligera comprende las CDR de Kabat de la SEC ID Nº :22,

en donde el anticuerpo del fragmento de unión al antígeno del mismo se une a la CD70 con una constante de disociación (Kd) inferior a 10-9M.

2. El anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 1, que comprende la región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº :6, SEC ID Nº .: 14, o los aminoácido.

2. 137 de la SEC ID Nº .:4, y la región variable de la cadena ligera comprende la SEC ID Nº .:24.

3. El anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 2, que comprende la región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº .: 14.

4. El anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 2, en donde la cadena ligera humanizada comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº .:26.

5. El fragmento de unión al antígeno de la reivindicación 1, que es un scFv, diacuerpo, Fab, minicuerpo o scFv-Fc.

6. El anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 2, que comprende un dominio efector de anticuerpo, preferentemente humano, opcionalmente, un dominio efector de anticuerpo que media una ADCC, ADCP o CDC.

7. El anticuerpo o fragmento de unión al anticuerpo del mismo de la reivindicación 6, en donde el dominio efector de anticuerpo es un dominio efector de anticuerpo humano.

8. El anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 2, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo se conjuga con un agente terapéutico.

9. El anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 8, en donde el agente terapéutico es un agente quimioterapéutico, opcionalmente MMAE o MMAF.

10. El anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 8, en donde el agente terapéutico es un agente inmunomodulador.

11. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de cualquiera de las reivindicaciones 1-10 y al menos un ingrediente farmacéuticamente compatible.

12. Un par de vectores aislados que codifican la cadena pesada y la cadena ligera, respectivamente, del anticuerpo

o fragmento de unión al antígeno del mismo de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde los vectores están para su co-expresión en una célula hospedadora.

13. Los vectores aislados de la reivindicación 12, en donde los vectores comprenden las secuencias de polinucleótidos de la SEC ID Nº : 13 y la SEC ID Nº : 23, respectivamente.

14. El anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para su uso en un método de tratamiento del cáncer en un sujeto humano con cáncer que expresa la CD70.

15. La composición farmacéutica de la reivindicación 11 para su uso en un método de tratamiento de un cáncer que expresa la CD70 o un trastorno inmunológico en un sujeto humano en donde el trastorno inmunológico es artritis reumatoide, artritis psoriásica, enfermedades desmielinizantes autoinmunes, oftalmopatía endocrina, uveorretinitis, lupus eritematoso sistémico, miastenia gravis, enfermedad de Grave, glomerulonefritis, trastorno hepatológico autoinmune, enfermedad inflamatoria intestinal, anafilaxia, reacción alérgica, síndrome de Sjögren, diabetes mellitus tipo I, cirrosis biliar primaria, granulomatosis de Wegener, fibromialgia, polimiositis, dermatomiositis, insuficiencia endocrina múltiple, síndrome de Schmidt, uveítis autoinmune, enfermedad de Addison, adrenalitis, tiroiditis, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad tiroidea autoinmune, anemia perniciosa, atrofia gástrica, hepatitis crónica, hepatitis

lupoide, aterosclerosis, lupus eritematoso cutáneo subagudo, hipoparatiroidismo, síndrome de Dressler, trombocitopenia autoinmune, púrpura trombocitopénica idiopática, anemia hemolítica, pénfigo vulgar, pénfigo, dermatitis herpetiforme, alopecia arcata, penfigoide, esclerodermia, esclerosis sistémica progresiva, calcinosis, fenómeno de Raynaud, dismotilidad esofágica, esclerodactilia y telangiectasia (síndrome de CREST) , infertilidad 5 autoinmune femenina y masculina, espondolitis anquilosante, colitis ulcerosa, enfermedad mixta del tejido conectivo, poliarteritis nodosa, vasculitis necrotizante sistémica, dermatitis atópica, rinitis atópica, síndrome de Goodpasture, enfermedad de Chagas, sarcoidosis, fiebre reumática, asma, aborto recurrente, síndrome antifosfolípidos, pulmón de granjero, eritema multiforme, síndrome post cardiotomía, síndrome de Cushing, hepatitis autoinmune crónica activa, pulmón del pajarero, necrólisis epidérmica tóxica, síndrome de Alport, alveolitis, alveolitis alérgica, alveolitis 10 fibrosante, enfermedad pulmonar intersticial, eritema nudoso, pioderma gangrenoso, reacción a la transfusión, arteritis de Takayasu, polimialgia reumática, arteritis de la temporal, esquistosomiasis, arteritis de células gigantes, ascariasis, aspergilosis, síndrome de Sampter, eczema, granulomatosis línfomatoide, enfermedad de Behcet, síndrome de Caplan, enfermedad de Kawasaki, dengue, encefalomielitis, endocarditis, fibrosis endomiocárdica, endoftalmitis, eritema elevatum et diutinum, psoriasis, eritroblastosis fetal, fascitis eosinofílica, síndrome de Shulman, 15 síndrome de Felty, filariasis, ciclitis, ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, ciclitis de Fuch, nefropatía por IgA, púrpura de Schönlein-Henoch, enfermedad injerto contra huésped, rechazo de trasplantes, cardiomiopatía, síndrome de Eaton-Lambert, policondritis recidivante, crioglobulinemia, macroglobulemia de Waldenstrom, síndrome de Evanc y disfunción gonadal autoinmune; en donde preferentemente, la enfermedad desmielinativa autoinmune es esclerosis múltiiple o encefalomielitis alérgica, y en donde preferentemente la enfermedad inflamatoria intestinal es la enfermedad de Crohn.

16. El anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso en terapia.