Moduladores de receptor tipo Toll 3, procedimientos y usos.

Un anticuerpo aislado reactivo con hTLR3: que comprende las secuencias de aminoácidos de las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de la cadena pesada como se muestran en SEC ID Nº:

9, 11 y 13 y las secuencias de aminoácidos de las CDR de la cadena ligera como se muestran en SEC ID Nº: 19, 21 y 23; o que comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: 6 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: 16.

Moduladores de receptor tipo Toll 3, procedimientos y usos Antecedentes de la invención El reconocimiento de antígenos extraños por células de mamífero puede estar mediado por un conjunto de receptores inmunes innatos llamados receptores tipo Toll (TLR) , véanse los documentos EP 1 887 014, US 2005/112659 y US 2005/158799. Los TLR reconocen patrones conservados derivados de patógenos microbianos identificados como patrones moleculares asociados a patógeno (PAMP) (Barton y col., Science 300:1524-1525, 2003) . La interacción de un TLR con una PAMP produce una cascada de señalización que implica la activación de NF-κB y la transcripción de la expresión génica de citocinas. Se han identificado diez receptores tipo Toll humanos y cinco proteínas adaptadoras de TLR.

Los TLR pueden expandir su repertorio de ligandos formando homo-o heterodímeros, además de unirse a diferentes proteínas adaptadoras. Por ejemplo, TLR3 se une a ARNbc, un producto intermedio en la replicación viral. TLR3 también interactúa con PolyI:C, un análogo de ARNbc sintético, y ARNm de células necróticas. La activación de TLR3 conduce a la secreción de interferones tipo I, que son importantes en el control de la infección viral. Una secuencia de aminoácidos de TLR3 humano de longitud completa y la secuencia de polinucleótidos codificante se muestran en SEC ID Nº: 1 y 2, respectivamente. Los TLR TLR7, TLR8 y TLR9 también tienen ligandos de ácido nucleico; la activación de estos TLR también puede conducir a la secreción de interferón.

Los interferones tipo I desencadenan cascadas de señalización para activar un conjunto de genes de respuesta temprana inmediata (genes estimulados por IFN o ISG) y han demostrado ser útiles en la clínica, véase el documento US 2004 091491. Las actividades antivirales resultantes incluyen inhibición de la traducción de ARNm, edición de ARN y degradación de ARN (Samuel y col., Clin Microbiol Rev 14:778-809, 2001, y Bhattacharjee y col. Curr. Immunol. Rev 1: 81-90, 2005) . Actualmente está siendo usada una terapia de combinación de interferón PEGilado y el compuesto antiviral de amplio espectro ribavirina para tratar infección por hepatitis C (Manns y col., Lancet 358:958-965, 2001) .

La función antiviral crítica de IFN de tipo I se demuestra adicionalmente por la evolución de mecanismos de resistencia viral para inhibir la producción de IFN tipo I por células huésped infectadas. Por ejemplo, la proteína NS1 de la gripe antagoniza la activación de IRF-3 y producción de IFNβ (Donelan y col., J Virol 78: 11574-11582, 2004) y la proteína del virus de la viruela A52R se asocia con IRAK2 y TRAF6 para bloquear la señalización aguas abajo de TLR3 (Harte y col., J Exp Med, 197:343-351, 2003) . Así, terapias basadas en provocar la activación de TLR o el potenciamiento de rutas de señalización mediadas por TLR aumentan la producción de IFN!/β endógeno y ayudan al huésped en el control de infecciones virales agudas.

El uso de agonistas de TLR para modular el resultado de una respuesta inmunitaria está siendo actualmente investigado para uso terapéutico (O'Neill, Curr Opin Pharm 3:396-403, 2003; Schetter y col., Curr Opin Drug Discov Devel 7:204-210, 2004) . Por ejemplo, oligodinucleótidos (ODN) de CpG, un ligando de TLR9, pueden estimular la producción de IFN tipo I y una respuesta de TH1 (Krieg, Annu Rev Immunol 20:709-60, 2002) , un hallazgo que sugiere el posible uso de ODN de CpG no solo como un adyuvante de vacuna, sino también para el tratamiento y o prevención de enfermedades que necesitan una potente respuesta de TH1. Otro ejemplo es el agonista de TLR7 sintético imiquimod, un agente aprobado para el tratamiento de condilomas acuminados; se cree que su efecto protector está mediado por la estimulación de citocinas inflamatorias tales como IFN!, TNF! y IL-1β (Saunder, J Amer Acad Derm 43: S6-S11, 2000) . En general, estos hallazgos muestran que los agonistas de TLR son una clase novedosa de agentes inmunomoduladores con el potencial de tener un beneficio terapéutico significativo.

Así, existe la necesidad de identificación de novedosos agentes inmunomoduladores que potencien el efecto de agonistas de TLR. Se espera que tales terapias novedosas basadas en TLR tengan una ventaja en proporcionar una respuesta inmunitaria sostenida con pautas de dosificación menos frecuentes.

Breve descripción de los dibujos La Fig. 1 muestra secuencias de la región variable de la cadena pesada del mAb anti-hTLR3 C1130. La Fig. 2 muestra secuencias de la región variable de la cadena ligera del mAb anti-hTLR3 C1130. La Fig. 3 muestra la secreción de IL-8, MCP-1, MIP-1!, RANTES y TNF! inducida por C1130 por células mononucleares de sangre periférica (CMSP) humanas a 24 h. La Fig. 4 muestra que C1130 potenció la producción de IFN! inducida por CpG a 24 h. La Fig. 5 muestra que C1130 disminuyó la producción de IL-10 inducida por R848 a 24 h. La Fig. 6 muestra el reconocimiento por C1130 de TLR3 de la superficie celular sobre células HEK293 establemente transfectadas. La Fig. 7 muestra el reconocimiento por C1130 de TLR3 de la superficie celular sobre células A549-TLR3.2 establemente transfectadas. La Fig. 8 muestra el reconocimiento por C1130 de CMSP de macaco cinomolgo.

Resumen de la invención Un aspecto de la divulgación es un anticuerpo aislado reactivo con receptor tipo Toll 3 humano (hTLR3) o sus homólogos que induce la producción celular de una citocina seleccionada del grupo que consiste en IL-8, MCP-1, MIP1-!, RANTES y TNF-!.

Otro aspecto de la divulgación es un anticuerpo aislado reactivo con hTLR3 o sus homólogos que modifica una respuesta inmunitaria a otros ligando de receptores tipo Toll.

Otro aspecto de la divulgación es un anticuerpo aislado reactivo con hTLR3 que tiene la capacidad de unión a antígeno de un anticuerpo monoclonal que comprende las secuencias de aminoácidos de las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de la cadena pesada como se muestra en SEC ID Nº: 9, 11 y 13 y las secuencias de aminoácidos de las CDR de la cadena ligera como se muestra en SEC ID Nº: 19, 21 y 23.

Un aspecto de la invención es un anticuerpo aislado reactivo con hTLR3 que comprende las secuencias de aminoácidos de las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de la cadena pesada como se muestra en SEC ID Nº: 9, 11 y 13 y las secuencias de aminoácidos de las CDR de la cadena ligera como se muestra en SEC ID Nº: 19, 21 y 23.

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo aislado reactivo con hTLR3 que comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: 6 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: 16.

Otro aspecto de la invención es un polinucleótido aislado que codifica una cadena pesada del anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos de CDR mostradas en SEC ID Nº: 9, 11 y 13.

Otro aspecto de la invención es un polinucleótido aislado que codifica una cadena ligera del anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos de CDR mostradas en SEC ID Nº: 19, 21 y 23.

Otro aspecto de la invención es un polinucleótido aislado que codifica una cadena pesada del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: 6.

Otro aspecto de la invención es un polinucleótido aislado que codifica una cadena ligera del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: 16.

Otros aspectos de la divulgación incluyen procedimientos para tratar o prevenir infección viral que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo de la invención en combinación con un inmunoestimulante.

Otro aspecto de la divulgación es un procedimiento para tratar cáncer que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo de la invención en combinación con un inmunoestimulante.

Otro aspecto de la divulgación es un procedimiento para tratar enfermedad inflamatoria del intestino que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo de la invención en combinación con un inmunoestimulante.

Otros aspectos de la divulgación incluyen procedimientos para tratar o prevenir un síntoma asociado a infección viral que comprenden administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo de la invención en combinación con un agonista de receptor tipo Toll 7 (TLR7) .

Otros aspectos de la divulgación incluyen procedimientos para tratar o prevenir una enfermedad pulmonar y exacerbación mediada por patógenos que comprenden administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente... [Seguir leyendo]

5 10 15 20 25 30 1. Un anticuerpo aislado reactivo con hTLR3: que comprende las secuencias de aminoácidos de las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de la cadena pesada como se muestran en SEC ID Nº: 9, 11 y 13 y las secuencias de aminoácidos de las CDR de la cadena ligera como se muestran en SEC ID Nº: 19, 21 y 23; o que comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: 6 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: 16. 2. Una línea celular de hibridoma que produce el anticuerpo de la reivindicación 1. 3. Un polinucleótido aislado que codifica: una cadena pesada del anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos de CDR mostradas en SEC ID Nº: 9, 11 y 13; una cadena ligera del anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos de CDR mostradas en SEC ID Nº: 19, 21 y 23; una cadena pesada del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: 6. o una cadena ligera del anticuerpo que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID Nº: 16. 4. El polinucleótido de la reivindicación 3 que comprende la secuencia mostrada en SEC ID Nº: 5. 5. El polinucleótido de la reivindicación 3 que comprende la secuencia mostrada en SEC ID Nº: 15. 6. Un vector que comprende al menos un polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 3, 4 ó 5. 7. Una célula huésped que comprende el polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 3, 4 ó 5. 8. Un procedimiento de preparación de un anticuerpo reactivo con hTLR3 que comprende cultivar la célula huésped de la reivindicación 7 y recuperar el anticuerpo producido por la célula huésped.

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