Medios para la inhibición de anticuerpos anti-receptor 1-adrenérgico.

Péptido seleccionado del grupo que consiste en

a) un péptido cíclico de fórmula Ib:

Ciclo(Ala-x2-x4-x1-x4-x1-x1-x4-x2-x2-Cys-x3-x5-x1-Pro-x2-Cys-Cys-x1-x3-x3-x4-x5-x2-Gln) (Ib)en la que x1 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidosácidos;

x2 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidos básicos;

x3 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Leu, Ile, Val, Met, Trp, Tyr yPhe;

x4 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Ser, Thr, Ala y Gly; y

x5 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Gln y Asn; y

b) un péptido cíclico de fórmula IIIa:

Ciclo(Ala-x4-x2-x3-x1-x3-x3-x4-x3-x3-Cys-xj-Cys-x-x-x-Pro-x-Cys-Cys-xi-Gln) (IIIa)

en la que i es cualquier número entero desde 0 hasta 6, preferiblemente cualquier número entero desde1 hasta 6, más preferiblemente i ≥ 6;

en la que j es cualquier número entero desde 0 hasta 4, preferiblemente cualquier número entero desde1 hasta 4, más preferiblemente j ≥ 4;

en la que x1 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidosácidos;

x2 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidos básicos;

x3 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Leu, Ile, Val, Met, Trp, Tyr yPhe; y

x4 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Ser, Thr, Ala y Gly,en la que x es cualquier aminoácido, preferiblemente cualquier aminoácido que se produce de maneranatural, más preferiblemente cualquier L-aminoácido que se produce de manera natural, ydonde dicho péptido es capaz de actuar como inhibidor de anticuerpos anti-receptor β1-adrenérgico.

Medios para la inhibición de anticuerpos anti-receptor p1-adrenérgico La presente invención se refiere a péptidos, a su uso en la detección y la inhibición de anticuerpos anti-receptor p1adrenérgico y a agentes de diagnóstico y a composiciones farmacéuticas que contienen los mismos.

Cardiomiopatía dilatada (DCM) es una enfermedad cardiaca grave de jóvenes adultos que dará como resultado una disminución continua de la función cardiaca si no se trata. Dicha disminución se basa en una función cardiaca reducida junto con una dilatación del músculo cardiaco. En aproximadamente el 30% de los casos la cardiomiopatía dilatada es de origen genético, aproximadamente el 10% de los casos están provocados por sustancias tóxicas tales como alcohol y agentes quimioterápicos y el 60% restante de los casos están provocados por infección aguda o crónica del músculo cardiaco y reacciones secundarias inmunológicas que se producen de manera concomitante. En última instancia, el trasplante de corazón es el medio de elección para el tratamiento de cardiomiopatía dilatada. Sin tratamiento el paciente se enfrenta a una muerte prematura (Richardson et al. (1996) Circulation, 93, 841 -842) .

En la cardiomiopatía dilatada idiopática que se caracteriza por una pérdida de la función cardiaca sin etiología definida, se encontró una correlación de cardiopatía y reacciones autoinmunitarias contra diversos antígenos de miocardio, tales como autoanticuerpos contra la cadena pesada de miosina, laminina y el transportador de ADP/ATP (Schulze et al. (1990) Circulation, 81, 859 -869) . Sin embargo, no hubo ninguna evidencia de que ninguno de estos antígenos sea relevante en cuanto a la patogénesis. En contraste con esto, se ha mostrado que anticuerpos funcionalmente activos contra receptores p1 cardiacos desempeñan un papel importante en la patogénesis de la cardiomiopatía dilatada. Análisis inmunológicos han mostrado que el segundo de un a total de tres dominios extracelulares del receptor p1-adrenérgico muestra tanto un epítopo de células T como un epítopo de células B (Hoebecke et al. (1994) , Methods Neuroscie. 25, 345 -365) y cumple por tanto con los criterios para un autoantígeno según el primer postulado deWitebsky.

Con el fin de proporcionar evidencias experimentales de que este auto-antígeno es relevante para la etiología de la cardiomiopatía dilatada, se intentó inducir cardiomiopatía inmunitaria según el segundo postulado de Witebsky. En un modelo de rata se proporcionaron evidencias experimentales de que los anticuerpos anti-p1-AR estimulantes contra el segundo dominio extracelular del receptor p1-adrenérgico están implicados en la etiología de la cardiomiopatía dilatada (p1-ECII) (Jahns et al. (2004) J. Clin. Invest. 113, 1419 -1429) . La proteína de fusión p1ECII-/GST usada mostró una homología del 100% entre seres humanos y ratas. Cada uno de los animales inmunizados contra p1-ECII desarrolló anticuerpos anti-p1 estimulantes y un fallo de la función de bombeo y dilatación progresiva grave del ventrículo izquierdo correspondiente a la cardiomiopatía inmunitaria que podía detectarse mediante ecocardiografía y se confirmó mediante mediciones invasivas y análisis histológicos de los animales. Con el fin de estimular los autoanticuerpos p1, se transfirió el suero de animales positivos para anticuerpos p1 por vía intravenosa a ratas genéticamente idénticas cada cuatro semanas. De nuevo, se observó una cardiomiopatía inmunitaria dilatada lentamente progresiva nueve meses tras la transferencia de suero tal como se demostró mediante ecocardiografía y también se confirmó mediante mediciones invasivas y estudios morfológicos e histológicos de los corazones de los animales sometidos a transferencia. Usando este enfoque, por primera vez se mostró que la cardiomiopatía inmunitaria inducida por anticuerpos p1 podía transferirse y cumple por tanto el tercer postulado clásico de Witebsky para una patogénesis autoinmunitaria de cardiomiopatía dilatada (Freedman & Lefkowitz (2004) J. Clin. Invest. 113, 1378 -1382) .

Además de los estudios con animales, se analizaron muestras de sangre de pacientes para determinar anticuerpos contra receptor p1. Jahns et al. detectaron auto-anticuerpos contra receptores p1 humanos recombinantes en aproximadamente el 30% de todos los pacientes que padecían insuficiencia cardiaca y cardiomiopatía dilatada idiopática. Estos pacientes muestran una función cardiaca significativamente disminuida en comparación con pacientes sin tales anticuerpos contra receptor p1 (Jahns et al. (1999) Circulation 99, 649 -654) . El efecto estimulante de los anticuerpos pudo erradicarse mediante el bloqueante de receptor p1 cardioselectivo bisoprolol. En vista de esto, Jahns et al. (Jahns et al. (1999) , Circulation 99, 649 -654; Jahns et al. (2000) JACC 36, 1280 -1287; Jahns et al. (2004) JCI 113, 1419 -1429) sugirieron el uso de antagonistas de receptor p1 tales como bisoprolol como inhibidores de la interacción entre anticuerpos anti-receptor p1-adrenérgico y los receptores p1-adrenérgicos nativos recombinantes y no recombinantes.

Un enfoque terapéutico alternativo para el tratamiento de cardiomiopatía dilatada es la eliminación de los anticuerpos de la circulación de pacientes con anticuerpos contra receptor p1 funcionalmente activos y potencialmente dañinos usando inmunoadsorción o inmunoafaresis. En un procedimiento de este tipo, se hace pasar la sangre del paciente a través de columnas que eliminan el auto-anticuerpo contra receptores p1-adrenérgicos usando un péptido homólogo distinto de receptor acoplado a la matriz o eliminando de manera inespecífica anticuerpos de la subclase IgG uniendo los anticuerpos a columnas de proteína Aoaanticuerpo de cabra anti-IgG humana acoplado a matriz. Sin embargo, tal procedimiento requiere tanto mucho tiempo como mucho trabajo. Adicionalmente, debido a la eliminación no específica de todas las inmunoglobulinas de la sangre de los pacientes así tratados, surgen numerosos inconvenientes tales como un sistema inmunitario y respuesta inmunitaria desequilibrados. No obstante, parece que los pacientes con DCM positivos para anticuerpos tienen al menos un beneficio a corto plazo de tal tratamiento. El problema subyacente a la presente invención es por tanto proporcionar medios adicionales para la inhibición de

anticuerpos anti-receptor p1-adrenérgico. Más particularmente, el problema subyacente a la presente invención es proporcionar medios para la inhibición de anticuerpos anti-receptor p1-adrenérgico. El problema subyacente a la presente invención se soluciona en un primer aspecto mediante un péptido

seleccionado del grupo que consiste en a) un péptido cíclico de fórmula Ib: Ciclo (Ala-x2-x4-x1-x4-x1-x1-x4-x2-x2-Cys-x3-x5-x1-Pro-x2-Cys-Cys-x1-x3-x3-x4-x5-x2-Gln) (Ib) en la que x1 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidos ácidos; x2 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidos básicos; x3 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Leu, Ile, Val, Met, Trp, Tyr y Phe; x4 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Ser, Thr, Ala y Gly; y x5 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Gln, Asn; y b) un péptido cíclico de fórmula IIIa: Ciclo (Ala-x4-x2-x3-x1-x3-x3-x4-x3-x3-Cys-xj-Cys-x-x-x-Pro-x-Cys-Cys-xi-Gln) (IIIa) en la que i es cualquier número entero desde 0 hasta 6, preferiblemente cualquier número entero desde 1 hasta 6,

más preferiblemente i = 6;

en la que j es cualquier número entero desde 0 hasta 4, preferiblemente cualquier número entero desde 1 hasta 4,

más preferiblemente j = 4;

en la que x1 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidos ácidos;

x2 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidos básicos;

x3 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Leu, Ile, Val, Met, Trp, Tyr y Phe; y

x4 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Ser, Thr, Ala y Gly,

en la que x es cualquier aminoácido, preferiblemente cualquier aminoácido que se produce de manera natural, más

preferiblemente cualquier L-aminoácido que se produce de manera natural, y

pudiendo dicho péptido actuar como inhibidor de anticuerpos anti-receptor p1-adrenérgico.

En el presente documento también se da a conocer un péptido seleccionado del grupo que consiste en

a) un péptido cíclico de fórmula I:

ciclo (Ala-x-x-x-x-x-x-x-x-x-Cys-x-x-x-Pro-x-Cys-Cys-xk-Gln) (I)

en la que k es cualquier número entero desde 0 hasta... [Seguir leyendo]

1. Péptido seleccionado del grupo que consiste en a) un péptido cíclico de fórmula Ib: Ciclo (Ala-x2-x4-x1-x4-x1-x1-x4-x2-x2-Cys-x3-x5-x1-Pro-x2-Cys-Cys-x1-x3-x3-x4-x5-x2-Gln) (Ib)

en la que x1 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidos ácidos; x2 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidos básicos; x3 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Leu, Ile, Val, Met, Trp, Tyr y

Phe; 10 x4 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Ser, Thr, Ala y Gly; y x5 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Gln y Asn; y

b) un péptido cíclico de fórmula IIIa: Ciclo (Ala-x4-x2-x3-x1-x3-x3-x4-x3-x3-Cys-xj-Cys-x-x-x-Pro-x-Cys-Cys-xi-Gln) (IIIa) en la que i es cualquier número entero desde 0 hasta 6, preferiblemente cualquier número entero desde 1 hasta 6, más preferiblemente i = 6;

en la que j es cualquier número entero desde 0 hasta 4, preferiblemente cualquier número entero desde 1 hasta 4, más preferiblemente j = 4; en la que x1 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidos ácidos; 20 x2 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende aminoácidos básicos;

x3 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Leu, Ile, Val, Met, Trp, Tyr y Phe; y x4 se selecciona individual e independientemente del grupo que comprende Ser, Thr, Ala y Gly,

en la que x es cualquier aminoácido, preferiblemente cualquier aminoácido que se produce de manera 25 natural, más preferiblemente cualquier L-aminoácido que se produce de manera natural, y donde dicho péptido es capaz de actuar como inhibidor de anticuerpos anti-receptor p1-adrenérgico.

2. Péptido según la reivindicación 1, siendo el péptido un péptido de fórmula Ic:

ciclo (Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln) (Ic)

3. Péptido según la reivindicación 2, en el que al menos uno de los residuos de aminoácido ácido se sustituye por un aminoácido diferente seleccionado del grupo que comprende aminoácidos ácidos.

4. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que al menos uno de los residuos de aminoácido básico se sustituye por un aminoácido diferente seleccionado del grupo que comprende aminoácidos básicos.

5. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que al menos uno de los residuos de aminoácido alifático se sustituye por un aminoácido diferente seleccionado del grupo que comprende aminoácidos alifáticos.

6. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que al menos un residuo de aminoácido Ala se sustituye por Glu.

7. Péptido según la reivindicación 1, siendo el péptido un péptido de fórmula IIIb:

Ciclo (Ala-Gly-Arg-Trp-Glu-Tyr-Gly-Ser-Phe-Phe-Cys-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln) (IIIb)

8. Péptido según la reivindicación 7, en el que al menos uno de los residuos de aminoácido ácido se sustituye por un aminoácido diferente seleccionado del grupo que comprende aminoácidos ácidos.

9. Péptido según la reivindicación 7 u 8, en el que al menos uno de los residuos de aminoácido básico se sustituye por un aminoácido diferente seleccionado del grupo que comprende aminoácidos básicos.

10. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en el que al menos uno de los residuos de aminoácido alifático se sustituye por un aminoácido diferente seleccionado del grupo que comprende aminoácidos alifáticos.

11. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, en el que al menos un residuo de aminoácido Ala se sustituye por Glu.

12. Péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que la ciclización se produce mediante una unión que es un enlace covalente seleccionado del grupo que comprende uniones S-S, enlaces peptídicos, enlaces carbono-carbono tales como C-C o C=C, enlaces éster, enlaces éter, enlaces azo, uniones C-S-C, uniones C-N-C y uniones C=N-C.

13. Péptido según la reivindicación 12, en el que la unión S-S se forma por dos residuos de Cys del péptido.

14. Péptido según la reivindicación 12, en el que el enlace peptídico se forma por el grupo NH2 del aminoácido N-terminal y el grupo COOH del aminoácido C-terminal.

15. Péptido según la reivindicación 12, en el que se forman enlaces adicionales por los grupos NH2 y grupos COOH de la cadena lateral de los aminoácidos constituyentes.

16. Composición que comprende al menos uno de los péptidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 y un portador.

17. Agente de diagnóstico que comprende al menos uno de los péptidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15.

18. Agente de diagnóstico según la reivindicación 17, siendo el agente de diagnóstico para la detección de anticuerpos anti-receptores p-adrenérgicos.

19. Agente de diagnóstico según la reivindicación 17 ó 18, comprendiendo el agente de diagnóstico al menos un compuesto biológicamente activo adicional.

20. Kit de diagnóstico para la detección de anticuerpos anti-receptor p1-adrenérgico que comprende un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 o un agente de diagnóstico según la reivindicación 17 ó 18.

21. Composición farmacéutica que comprende al menos uno de los péptidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 y un portador farmacéuticamente aceptable.

22. Composición farmacéutica según la reivindicación 21, que comprende además un agente farmacéuticamente activo adicional.

23. Composición farmacéutica según la reivindicación 22, en la que el agente farmacéuticamente activo adicional se selecciona del grupo que comprende un bloqueante de receptores beta, preferiblemente bloqueantes de receptor p1-adrenérgico selectivos.

24. Composición farmacéutica según la reivindicación 23, en la que el agente farmacéuticamente activo adicional se selecciona del grupo de bloqueantes de receptor p1-adrenérgico selectivos que comprende atenolol, metoprolol, nebivolol y bisoprolol.

25. Uso de un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para la fabricación de un medicamento.

26. Medicamento que comprende un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15.

27. Uso según la reivindicación 25 o medicamento según la reivindicación 26, siendo el medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una enfermedad, en el que tal enfermedad se selecciona del grupo de cardiopatías, que comprenden cardiopatía infecciosa y no infecciosa, cardiopatía isquémica y no isquémica, cardiopatía inflamatoria y miocarditis, dilatación cardiaca, cardiomiopatía idiopática, cardiomiopatía dilatada idiopática, cardiomiopatía inmunitaria, insuficiencia cardiaca y cualquier arritmia cardiaca incluyendo latidos de captura prematura ventriculares y supraventriculares.

28. Uso o medicamento según la reivindicación 27, en el que la enfermedad es cardiomiopatía dilatada idiopática y preferiblemente cardiomiopatía inmunitaria dilatada inducida por anticuerpos anti-p-AR.

29. Uso o medicamento según cualquiera de las reivindicaciones 25 a 28, comprendiendo el medicamento al menos un compuesto farmacéuticamente activo adicional.

30. Uso o medicamento según cualquiera de las reivindicaciones 25 a 29, siendo el medicamento para el tratamiento y/o la prevención de pacientes que tienen anticuerpos contra receptores p-adrenérgicos, preferiblemente receptores p1-adrenérgicos.

31. Uso o medicamento según cualquiera de las reivindicaciones 25 a 30, siendo el medicamento para inducir 5 tolerancia inmunitaria.

32. Uso de un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 para la fabricación de un medicamento, en el que el medicamento es para inducir tolerancia inmunitaria, preferiblemente mediante supresión de la producción de anticuerpos anti-receptores p-adrenérgicos y más preferiblemente mediante supresión de la producción de anticuerpos anti-receptor p1-adrenérgico.

33. Medicamento que comprende un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, siendo el medicamento para inducir tolerancia inmunitaria, preferiblemente mediante supresión de la producción de anticuerpos anti-receptores p-adrenérgicos y más preferiblemente mediante supresión de la producción de anticuerpos anti-receptor p1-adrenérgico.

34. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 para su uso en la inducción de tolerancia inmunitaria mediante supresión de la producción de anticuerpos anti-receptor p1-adrenérgico mediante bloqueo de los sitios de reconocimiento de antígeno de las células pre-B productoras de anticuerpos.

35. Uso de un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 en un método de diagnóstico in vitro.

36. Uso según la reivindicación 35, en el que el método es para el diagnóstico de cardiomiopatía dilatada idiopática, preferiblemente cardiomiopatía inmunitaria dilatada inducida por anticuerpos anti-p-AR.