Anticuerpos o fragmentos de éstos dirigidos contra un epítopo del Staphylococcus aureus de IsaA o IsaB.

Los anticuerpos o fragmentos de éstos que son dirigidos contra un epítopo de Staphylococcus aureus que es reconocido por otros anticuerpos monoclonales que son segregados por la línea celular de hibridoma depositada en el DSMZ con el número de registro DSM ACC2987,

donde el epítopo contiene al menos una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 13 aminoácidos a una de las secuencias SEQ ID NO: 15, 17 a 19, 21 a 26, 32 a 34 y 57 o

donde cada uno de los anticuerpos tiene una cadena pesada con una primera región variable y una cadena ligera con una segunda región variable,

donde la primera región variable contiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% idéntica a la secuencia SEQ ID NO: 2 y donde la segunda región variable contiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% idéntica a la secuencia SEQ ID NO: 4.

Anticuerpos o fragmentos de éstos dirigidos contra un epítopo del Staphylococcus aureus de IsaA o IsaB

Esta invención se refiere a anticuerpos o fragmentos de éstos que son dirigidos contra un epítopo de Staphylococcus aureus (= S. aureus), a un kit que contiene estos anticuerpos o fragmentos, a un uso de estos anticuerpos o fragmentos, a una línea celular de hibridoma que produce estos anticuerpos y a un método de tratamiento.

De FEMS Imunol. Med. Microbial. 2 Oct.; 29(2), páginas 145 a 153 se conocen las estructuras inmunodominantes que fueron expresadas in vivo durante una septicemia causada por Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM). Estas estructuras son la proteína de 29 kDa IsaA y la proteína de 17 kDa IsaB. Se afirma que estas proteínas pueden servir como posibles blancos para el desarrollo de una terapia contra SARM basada en anticuerpos.

Del resumen " Development of antibody-based therapy targeting immunodominant antigens of Staphylococcus aureus", Ohlsen, K. et al., página 128 del libro de resúmenes publicado para la 59a conferencia anual de la Deutsche Gesellschaft für Hygiene und Mikrobiologie e.V. en septiembre de 27 y de Lorenz, U. et al., "Therapeutische Effektivitát von monoklonalen Antikórpern gegen Staphylococcus aureus in einem Septicemia- und Abszess- Mausmodell", Chirurgisches Forum 28, Springer Berlín Heidelberg, 29 de mayo de 28, edición 17, pp. 225-226 se conoce la aplicación de un primer anticuerpo monoclonal murino dirigido al antígeno inmunodominante IsaA en dos modelos de infección animal. El estudio reveló que la aplicación de MAB anti-lsaA reduce la carga de la infección en ambos modelos de infección.

El objetivo de la presente invención es proporcionar nuevos anticuerpos o fragmentos de éstos que sean adecuados para un tratamiento de infecciones causadas por Staphylococcus aureus y para la detección de S. aureus. Además, se deberá proporcionar un kit que contenga estos anticuerpos o fragmentos de éstos, un uso de estos anticuerpos o fragmentos, una línea celular de hibridoma que segregue estos anticuerpos o fragmentos y un método de tratamiento.

Este objetivo es resuelto por el contenido de las reivindicaciones 1, 8, 15, 16, 17 y 19. Las realizaciones de la invención se dan a conocer en las reivindicaciones 2 a 7, 9 a 14, 18 y 2 a 24.

De acuerdo con la invención se proporcionan anticuerpos o fragmentos de éstos, donde dichos anticuerpos o fragmentos son dirigidos contra un epítopo del Staphylococcus aureus que es reconocido por otros anticuerpos monoclonales que son segregados por la línea celular de hibridoma depositada en el "Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, Alemania" (DSMZ) con el número de registro DSM ACC2987, donde el epítopo contiene al menos una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 13 aminoácidos a una de las secuencias SEQ ID NO: 15, 17 a 19, 21 a 26, 32 a 34 y 57 o

donde cada uno de los anticuerpos tiene una cadena pesada con una primera región variable y una cadena ligera con una segunda región variable,

donde la primera región variable contiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 9% idéntica a la secuencia SEQ ID NO: 2 y donde la segunda región variable contiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 9% idéntica a la secuencia SEQ ID NO: 4. La línea celular de hibridoma depositada en el DSMZ con el número de registro DSM ACC2987 se denomina además "línea celular DSM ACC2987". Los otros anticuerpos monoclonales que son segregados por la línea celular DSM ACC2987 son anticuerpos monoclonales de ratón.

Los anticuerpos según la invención consisten en moléculas de inmunoglobulina completas, preferentemente IgM, IgD, IgE, IgA o IgG, más preferentemente lgG1, lgG2a, lgG2b, lgG3 o lgG4, mientras que los fragmentos consisten en partes de dichas moléculas de inmunoglobulina, como fragmentos Fab o regiones V, VH o CDR. Además, los anticuerpos consisten en anticuerpos modificados o alterados, como anticuerpos quiméricos y humanizados. Los anticuerpos también consisten en anticuerpos monoclonales o policlonales modificados o alterados, así como anticuerpos generados por vía recombinante o sintética, o sintetizados. Los fragmentos consisten en fragmentos de los anticuerpos así como en partes de éstos, por ejemplo, cadenas ligera y pesada separadas, Fab, Fab/c, Fv, Fab', F(ab')2. Los anticuerpos según la invención también incluyen derivados de anticuerpos como anticuerpos bifuncionales y constructos de anticuerpos, como Fv monocatenarios (scFv), scFv biespecíficos o anticuerpo- proteínas de fusión. Todos los derivados de anticuerpos tienen la especificidad de unión de los anticuerpos de los cuales derivan, es decir, son dirigidos contra un epítopo del Staphylococcus aureus que es reconocido por los otros anticuerpos monoclonales segregados por la línea celular de hibridoma DSM ACC2987.

El epítopo que es reconocido por los otros anticuerpos monoclonales que son segregados por la línea celular DSM ACC2987 está ubicado en el antígeno inmunodominante IsaA del S. aureus. Los inventores de la presente invención encontraron que el epítopo reconocido por los anticuerpos de acuerdo con la invención está particularmente

expuesto en el S. aureus. Los anticuerpos o fragmentos que son dirigidos contra este epítopo son adecuados para la detección de S. aureus y para el tratamiento de una infección con S. aureus. Debido a la alta variabilidad del S. aureus que causa diferentes magnitudes de expresión y mutaciones de los antigenos en diferentes cepas, cada anticuerpo que reconoce un epítopo adicional no reconocido por otros anticuerpos es útil para la detección de S. aureus, así como para el tratamiento de una infección por S. aureus.

Los anticuerpos pueden ser anticuerpos monoclonales o policlonales. En particular los anticuerpos pueden ser los otros anticuerpos monoclonales, es decir, los anticuerpos que son segregados por la línea celular de hibridoma, DSM ACC2987. Estos anticuerpos son muy útiles para la detección de S. aureus, así como para el tratamiento de una Infección. Tienen muy altas afinidades y especificidades. La alta afinidad de los anticuerpos que son segregados por la línea celular de hibridoma DSM ACC2987 por el epítopo reconocido por estos anticuerpos, se Indica por un bajo valor de Kd para la unión de dicho anticuerpo a dicho epítopo. Dependiendo del método de determinación se han determinado valores de KD de < 18 pM y 1.7 nM para esta unión (véanse Flgs. 6 y 7 y el texto correspondiente).

Los anticuerpos monoclonales o los anticuerpos que son segregados por la línea celular de hibridoma DSM ACC2987 pueden ser anticuerpos del tipo IgG, en particular, el tipo lgG1 o lgG2b. Los fragmentos pueden ser fragmentos Fab, fragmentos Fab/c, Fragmentos Fv, fragmentos Fab' fragmentos o fragmentos F(ab')2. Estos fragmentos son particularmente útiles para la detección de S. aureus porque la pared celular del S. aureus contiene proteína A que se une inespecíficamente a inmunoglobulinas a través de sus partes Fe.

Los anticuerpos pueden ser anticuerpos animales, es decir, anticuerpos producidos en un animal, especialmente anticuerpos murlnos, bovinos o de camélidos, anticuerpos humanos, anticuerpos producidos en una planta, un huevo o un hongo, en particular un Saccharomyces, anticuerpos recomblnados producidos en las células de una línea celular, anticuerpos quiméricos o anticuerpos humanizados. Un anticuerpo humanizado puede ser un anticuerpo monoclonal que contenga la porción de unión de un anticuerpo monoclonal de ratón, por ejemplo el anticuerpo monoclonal segregado por la línea celular de hibridoma DSM ACC2987 y la porción que no se une de un anticuerpo humano.

Cada uno de los anticuerpos puede tener una cadena pesada con una primera región variable y una cadena ligera con una segunda región variable,

donde la primera región variable contiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 92.5% Idéntica, en particular al menos 95% idéntica, en particular al menos 97.5% idéntica, en particular 1% idéntica, a la secuencia SEQ ID NO: 2 y donde la segunda región variable contiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 92.5% idéntica, en particular al menos 95% idéntica, en particular al menos 97.5% idéntica, en particular 1% idéntica, a la

secuencia SEQ ID NO: 4.

La primera región variable y la segunda reglón variable según se caracterizaron antes forman juntas un sitio de unión que tiene alta afinidad y especificidad por el epítopo.

Una posible secuencia de ADN que codifica la primera región variable según SEQ ID NO: 2 es la secuencia SEQ ID NO: 1. La SEQ ID NO: 1 es la secuencia que codifica la... [Seguir leyendo]

1. Los anticuerpos o fragmentos de éstos que son dirigidos contra un epítopo de Staphylococcus aureus que es reconocido por otros anticuerpos monoclonales que son segregados por la línea celular de hibridoma depositada en el DSMZ con el número de registro DSM ACC2987,

donde el epítopo contiene al menos una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 13 aminoácidos a una de las secuencias SEQ ID NO: 15, 17 a 19, 21 a 26, 32 a 34 y 57 o

donde cada uno de los anticuerpos tiene una cadena pesada con una primera región variable y una cadena ligera con una segunda región variable,

donde la primera región variable contiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 9% idéntica a la secuencia SEQ ID NO: 2 y donde la segunda reglón variable contiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 9% idéntica a la secuencia SEQ ID NO: 4.

2. Los anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en la reivindicación 1, donde los anticuerpos son anticuerpos monoclonales, especialmente los otros anticuerpos monoclonales.

3. Los anticuerpos como los reivindicados en la reivindicación 2, donde los anticuerpos monoclonales o los otros anticuerpos monoclonales son anticuerpos del tipo IgG, en particular del tipo lgG1 o del tipo lgG2b.

4. Los fragmentos reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde los fragmentos son fragmentos Fab, fragmentos Fab/c, fragmentos Fv, fragmentos Fab' o fragmentos F(ab')2.

5. Los anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde los anticuerpos son anticuerpos animales, especialmente especialmente anticuerpos murinos, bovino, o camélidos, anticuerpos humanos, anticuerpos producidos en una planta, un huevo o un hongo, en particular un Saccharomyces, anticuerpos recombinados producidos en las células de una línea celular, anticuerpos quiméricos o anticuerpos humanizados.

6. Los anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde cada uno de los anticuerpos tiene una cadena pesada con una primera reglón variable y una cadena ligera con una segunda reglón variable,

donde la primera región variable contiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 92.5% idéntica, en particular al menos 95% idéntica, en particular al menos 97.5% idéntica, en particular 1% Idéntica, a la secuencia SEQ ID NO: 2 y donde la segunda reglón variable contiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 92.5% idéntica, en particular al menos 95% idéntica, en particular al menos 97.5% idéntica, en particular 1% idéntica, a la secuencia SEQ ID NO: 4.

7. Los anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el epítopo contiene al menos una secuencia de aminoácidos que es Idéntica en al menos 14 aminoácidos, en particular 15 aminoácidos, a una de las secuencias SEQ ID NO: 15, 17 a 19, 21 a 26, 32 a 34 y 57

8. Los anticuerpos a fragmentos como los reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones precedentes para utilizar como un medicamento.

9. Los anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en la reivindicación 8, donde el medicamento es un medicamento destinado al tratamiento de un ser humano o de un animal donde el ser humano o el animal tiene una infección por Staphylococcus aureus, especialmente Staphylococcus aureus resistente a la meticilina o sensible a la meticilina, o corre riesgo de contraer dicha infección.

1. Los anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en la reivindicación 9, donde el ser humano o el animal tiene una mastitis o una septicemia causada por la infección.

11. Los anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones 8 a 1, donde los anticuerpos o fragmentos están presentes en una mezcla con otros anticuerpos o fragmentos de esos otros anticuerpos, donde esos otros anticuerpos están dirigidos contra el menos otro epítopo del Staphylococcus aureus.

12. Los anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, donde los anticuerpos o fragmentos están presentes en una mezcla con al menos un antibiótico.

13. Los anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, donde los anticuerpos o fragmentos están presentes en una mezcla con plasma sanguíneo de un mamífero, especialmente de un ser humano.

14. Los anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13, donde el medicamento es un medicamento para administración sistémica y/o aplicación local.

15. Un kit que contiene anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, 5 para la detección de Staphylococcus aureus.

16. El uso de anticuerpos o fragmentos como los reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para la detección de Staphylococcus aureus.

17. Una línea celular de hibridoma que produce anticuerpos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.

18. La línea celular de hibridoma como la reivindicada en la reivindicación 17, donde dicha línea celular de hibridoma es la línea celular depositada en el DSMZ con el número de registro DSM ACC2987.