Inhibidores de JAK para tratamiento de trastornos mieloproliferativos.

Un compuesto que es un inhibidor de JAK2 para su uso en el tratamiento de trastornos mieloproliferativos asociados con la activación de JAK2,

donde el compuesto tiene la estructura.

Inhibidores de JAK para tratamiento de trastornos mieloproliferativos

Campo de la invención

La invención se refiere al tratamiento de trastornos mieloproliferativos (TMP) y síndromes mielodisplásicos. Específicamente, la invención se refiere a un compuesto de pirrolocarbazol fusionado para su uso en el tratamiento de TMPs y trastornos mielodisplásicos con un compuesto que es un inhibidor de JAK2.

Antecedentes de la invención Los trastornos mieloproliferativos (TMPs) son malignidades clónicas caracterizadas por la superproducción de uno o más linajes hematopoyéticos con una diferenciación relativamente normal dando como resultado una médula ósea (MO) hipercelular. Se cree que los TMPs aparecen en un único progenitor multipotente o célula madre, que domina la MO y sangre. Los progenitores hematopoyéticos cultivados de pacientes con TMPs muestran propiedades alteradas del crecimiento e independencia del factor del crecimiento. La base molecular para ciertos TMPs no ha estado clara hasta que una serie de informes recientes identificaron un única sustitución de aminoácido V617F en el dominio pseudocinasa de JAK2 como una lesión molecular prevalente en policitemia vera (PV) , trombocitemia esencial (TE) y mielofribrosis diopática crónica (MFIC) . Esta mutación se encontró en el 75%-97% de pacientes con PV, y aproximadamente en el 40%-50% de pacientes con TE y MFIC (James et al, Trends in Molecular Medicine 11, 546-554) . De manera importante, no se han encontrado otras mutaciones en los dominios autoinhibidores o de cinasa de otras 85 cinasas (Levine et al., 2005, Cancer Cell 7, 387-397) . Además, la mutación V617F también se ha identificado en pacientes con síndromes mielodisplásicos (SMD) . En base a la estructura pronosticada de JAK2, la sustitución V617F interrumpe una interacción autoinhibidora entre los dominios JH3 y cinasa (JH1) de la proteína. Como consecuencia, los mutantes V617F fueron constitutivamente activos y confirieron independencia del factor de crecimiento y activación de STAT5 constitutivo cuando se expresaron en células BaF3/EPOR (Levine et al., Cancer Cell 2005, 7, 387-397; Kralovics et al., 2005, N. Engl. J. Med. 352, 1779-1790) ) . Los progenitores eritroides que llevan la mutación V617F crecieron en ausencia de eritropoyetina exógena (EPO) y formaron colonias eritroides endógenas (CEE) , un marcador de inactivación mediada por TMPs y siARN de JAK2 redujo la formación de CEE. Finalmente, los ratones trasplantados con células de médula ósea murina que expresaban el mutante V617F, pero no un JAK2 de tipo salvaje, desarrollaron características patológicas que se parecían mucho a PV en humanos incluyendo una fuerte elevación de hemoglobina/hematocrito, leucocitosis, hiperplasia de megacariocitos, hematopoyesis extracelular dando como resultado esplenomegalia y mielofibrosis de médula ósea (James et al., 2005, Nature 434, 1144-1148; Werning et al., 2006, Blood 2006 Feb 14, [Epub antes que impreso]) . Clínicamente, la presencia de la mutación en pacientes con MFIC se asoció con una enfermedad más agresiva y una supervivencia significativamente más baja (Campbell et al., 2006, Blood 2098-2100) .

Existe una necesidad en la técnica de contrarrestar el fenotipo asociado a JAK2 mutante o activado y de tratar enfermedades mieloproliferativas y síndromes mielodisplásicos asociados a la activación de JAK2.

Resumen de la invención

Las tirosinas cinasas (trc) unidas al receptor son proteínas de transmembrana que contienen un dominio de enlace de ligando extracelular, una secuencia de transmembrana y un dominio tirosina cinasa citoplásmico. Las tirosinas cinasas funcionan en la transducción de señal celular. La proliferación celular, diferenciación, migración, metabolismo y muerte programada son ejemplos de respuestas celulares mediadas por tirosina cinasa. JAK2 es una tirosina cinasas no receptora.

Se ha descubierto que los inhibidores de JAK2 pueden usarse para tratar trastornos mieloproliferativos y otras enfermedades en las que la expresión constitutiva de JAK2 contribuya a un estado patológico.

De este modo, la invención proporciona una composición que contiene un derivado de pirrolocarbazol fusionado para su uso en un método para tratar trastornos mieloproliferativos y trastornos relacionados con dicha composición.

Los trastornos mieloproliferativos y trastornos asociados con la activación de JAK2 que pueden tratarse con la invención incluyen, aunque no se limitan a enfermedades mieloproliferativas tales como, por ejemplo, policitemia vera (PV) , trombocitemia esencial (TE) , mielofibrosis con metaplasia mieloide (MMM) también llamada mielofibrosis idiopática crónica (MFIC) , trastornos mieloproliferativos sin clasificar (TMPsc) , síndrome hipereosinofílico (SHE) , y mastocitosis sistémica (MS) .

En la invención, una cantidad terapéuticamente efectiva del inhibidor de JAK2 se administra al sujeto. Para un adulto medio de 70 kg, un régimen de dosis puede ser, por ejemplo, de aproximadamente 20 a aproximadamente 120 mg, dos veces al día. En algunas realizaciones la dosis para el adulto medio es de aproximadamente 40 a aproximadamente 100 mg, dos veces al día. En otras realizaciones la dosis para el adulto medio es de aproximadamente 60 a aproximadamente 80 mg, dos veces al día.

En la invención la actividad de ciertas proteínas se reduce en presencia del derivado de pirrolocarbazol

fusionado en comparación con la ausencia de pirrolocarbazol fusionado. Estas proteínas incluyen, aunque no se limitan a, JAK2, STAT5, STAT3, SHP2, GAB2, AKT y ERK.

Breve descripción de los dibujos Figura 1 muestra la inhibición de Actividad Cinasa JAK2 por CEP-701.

Figura 2 muestra resultados de PCR específico de alelo (panel A) y análisis de enzima de restricción (panel B) que se realizaron para confirmar la presencia de la mutación de V617F en células HEL 92. Las células K562, que no guardan esta mutación sirvieron como un control de tipo salvaje. Panel A: para PCR específico de alelo, cebadores específicos de mutante generaron un diagnóstico de producto (flechas) de 203 bp de la mutación; un producto de 364 bp sirvió como un control interno para PCR. M, marcadores de peso molecular; Carriles 1 y 2, células HEL92 que muestran un mutante de 364 bp y alelos de tipo salvaje y el alelo específico de mutante de 203 bp. Carril 3, células de control K562 que muestran solamente el alelo de tipo salvaje de 364 bp. Panel B: para análisis de restricción, un producto PCR que abarca la mutación V617 se generó a partir de ADNs de HEL92 y K562 y se digirió con enzima de restricción BsaX1. Se muestran los productos de PCR no digeridos (indicados con “-“) y BsaX1 digeridos (indicado con “+”) . M, marcadores de peso molecular. Se generó el patrón pronosticado de restricción para ADN de K562. Se analizaron dos preparaciones independientes de ADN para cada línea celular.

Figura 3 muestra los efectos de CEP-701 en la señalización de JAK2/STAT en células HEL 92. Las células HEL 92 se incubaron durante 24 horas con CEP-701 en 0, 1 µM, 0, 3 µM, 1, 0 µM y 3, 0 µM, como se indica. Los efectos en la señalización de JAK2/STAT se evaluaron mediante inmunoblot usando anticuerpos STAT3 y STAT5 fosfoespecíficos, como lo indica el protocolo de inmunoprecipitación/inmunoblot (IP/WB) para JAK2: el total de anticuerpo JAK2 se usó para IP y la fosforilación se evaluó con WB usando anticuerpo de fosfotirosina. La expresión de Bclxl se determinó mediante inmunoblot.

Figura 4 muestra los efectos de CEP-701 en el crecimiento de células HEL 92. Las células HEL 92 se incubaron con concentraciones crecientes de CEP-701, como se indica, durante 24 horas y 48 horas. Los efectos en el crecimiento celular se evaluaron mediante ensayo MTS. Los experimentos se realizaron en 10% FCS (Panel A y B) o sin suero (Panel C y D) . El Panel A muestra resultados de una incubación de 24 horas en presencia de 10% de suero fetal bovino (SFB) . El Panel B muestra los resultados de una incubación de 48 horas en presencia de 10% SFB. El Panel C muestra los resultados de una incubación de 24 horas sin SFB. El Panel D muestra los resultados de una incubación de 48 horas sin SFB. Para los paneles A-D, se añadieron cantidades crecientes de CEP-701 a cultivos separados (mostrados en barras con ventana) ; las células no tratadas se muestran en la primera barra.

Figura 5 muestra los efectos de CEP-701 en el crecimiento de células HEL 92 sin el compuesto repuesto cada 24 horas. Las células HEL 92 se incubaron en 2% SFB con concentraciones crecientes de CEP-701, como se indica, durante 72 horas. CEP-701 se repuso cada 24 horas. Los efectos en el crecimiento celular se evaluaron con ensayo MTS. Las... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto que es un inhibidor de JAK2 para su uso en el tratamiento de trastornos mieloproliferativos asociados con la activación de JAK2, donde el compuesto tiene la estructura:

2. El compuesto como el reivindicado en la reivindicación 1, donde dicho trastorno mieloproliferativo se selecciona del grupo consistente en policitemia vera (PV) , trombocitemia esencial (TE) , mielofibrosis con metaplasia mieloide (MMM) , mielofibrosis idiopática (MFI) , trastornos mieloproliferativos sin clasificar (TMPsc) , síndrome hipereosinofílico (SHE) , y mastocitosis sistémica (MS) .

3. El compuesto como el reivindicado en la reivindicación 2, donde el compuesto se administra en una cantidad de aproximadamente 0, 8 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 1, 3 mg/kg de peso corporal.

4. El compuesto como el reivindicado en la reivindicación 2, donde el compuesto se administra en una cantidad de aproximadamente 60 mg a aproximadamente 80 mg dos veces al día.

5. El uso de un compuesto que es un inhibidor de JAK2 para la fabricación de un medicamento para tratar trastornos mieloproliferativos asociados con la activación de JAK2, donde el compuesto tiene la estructura:

6. El uso de la reivindicación 5, donde dicho trastorno mieloproliferativo se selecciona del grupo consistente en policitemia vera (PV) , trombocitemia esencial (TE) , mielofibrosis con metaplasia mieloide (MMM) , mielofibrosis idiopática (MFI) , trastornos mieloproliferativos sin clasificar (TMPsc) , síndrome hipereosinofílico (SHE) , y mastocitosis sistémica (MS) .

7. El uso de la reivindicación 6, donde el compuesto se adapta para su administración en una cantidad de aproximadamente 0, 8 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 1, 3 mg/kg de peso corporal.

8. El uso de la reivindicación 6, donde el compuesto se adapta para su administración en una cantidad de aproximadamente 60 mg a aproximadamente 80 mg dos veces al día.