Anticuerpos anti-miostatina.

Un anticuerpo monoclonal anti-miostatina que comprende una HCVR y una LCVR,

en el que dicha HCVRcomprende:

a) un péptido en CDRH1 con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 24,

b) un péptido en CDRH2 con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 26,

c) un péptido en CDRH3 con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 28,y en el que dicha LCVR comprende:

a) un péptido en CDRL1 con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 13,

b) un péptido en CDRL2 con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 14, y

c) un péptido en CDRL3 con una secuencia seleccionada entre las SEC ID Nº 21 y 22.

Anticuerpos anti-miostatina Campo de la invención La presente invención pertenece al campo de la medicina, particularmente al campo de anticuerpos monoclonales contra miostatina. Más específicamente, la presente invención se refiere a anticuerpos monoclonales anti-miostatina que se unen preferentemente a miostatina sobre GDF-11 y son resistentes a la escisión proteica, y al uso de los anticuerpos para el tratamiento, profilaxis o diagnóstico de diversos trastornos o afecciones en mamíferos y especies aviares.

Antecedentes de la invención La miostatina, también mencionada como factor 8 de diferenciación del crecimiento (GDF-8) , es un miembro de la superfamilia de proteínas TGF-!, que comparte similitudes estructurales con otros miembros de la familia TGF-!. La miostatina se expresa en gran medida en el músculo esquelético en desarrollo y adulto y funciona como regulador negativo del músculo esquelético. La miostatina también puede estar implicada en otros procesos fisiológicos incluyendo la diferenciación de preadipocitos en adipocitos y, indirectamente, con la homeostasis de la glucosa y la inhibición de la formación de huesos.

El factor 11 de diferenciación del crecimiento, también conocido como GDF-11 o BMP-11, es el miembro de la superfamilia de proteínas TGF-! que es el más homólogo a miostatina. La secuencia de aminoácidos de las formas maduras de miostatina humana y GDF-11 son aproximadamente un 90% idénticas; sin embargo, GDF-11 se expresa en una gama más amplia de tejidos que la miostatina, incluyendo la pulpa dental, cerebro, corazón, riñón y pulmón así como tejido muscular y adiposo. Recientemente se ha descubierto que GDF-11 humano gobierna las ventanas temporales durante las cuales los progenitores multipotentes retienen la competencia para producir distinta descendencia neural.

Existe la necesidad terapéutica de inhibir específicamente una actividad miostatina inhibiendo mínimamente al mismo tiempo una actividad de otras proteínas de la superfamilia TGF-!, particularmente GDF-11. Además, existe la necesidad de diagnóstico de un anticuerpo anti-miostatina que reaccione de forma cruzada mínimamente con otra proteína de la superfamilia TGF-!, particularmente GDF-11, para controlar de forma más precisa o determinar los niveles de miostatina en una muestra. Los anticuerpos anti-miostatina que se unen preferentemente a miostatina sobre GDF-11 se desvelan en la publicación internacional número WO 2005/094446. Los anticuerpos monoclonales humanizados que se unen preferentemente a miostatina sobre GDF-11 se desvelan en la publicación internacional número WO 2007/044411.

Los anticuerpos terapéuticos pueden someterse a una diversidad de reacciones de degradación, por ejemplo, desamidación o escisión, que pueden suceder in vivo o durante la fabricación, formulación, almacenamiento y uso terapéutico. Por ejemplo, los restos de asparagina (Asn) en anticuerpos u otros polipéptidos son particularmente susceptibles a escisión en solución acuosa. Por tanto, existe la necesidad de un anticuerpo anti-miostatina que se una preferentemente a miostatina sobre GDF-11, tenga una fuerte afinidad de unión por miostatina (es decir, no mayor de aproximadamente 3 x 10-8 M) y sea resistente a degradación química.

Sumario de la invención Los anticuerpos de la invención se unen preferentemente a miostatina sobre GDF-11, es decir, son significativamente menos reactivos con GDF-11 que con miostatina. Un anticuerpo de la invención se une a miostatina al menos aproximadamente 2, 3, 5, 10, 20, 22, ó 25 veces más de lo que se une a GDF-11 medido por una técnica en la materia, por ejemplo, por ELISA de competición, o por ensayo BIACORE o KINEXA para demostrar la mayor afinidad (es decir, inferior KD) del anticuerpo por GDF-8 que GDF-11. Más preferentemente, los anticuerpos de la invención no se unen a GDF-11 por encima de los niveles umbral en el ensayo de unión usado.

La presente invención abarca un anticuerpo monoclonal anti-miostatina que se une preferentemente a miostatina sobre el factor 11 de diferenciación del crecimiento (GDF-11) , en el que dicho anticuerpo se une a miostatina con una afinidad no superior a aproximadamente 3 x 10-8 M y en el que al menos el 98% del anticuerpo monoclonal no se escinde cuando está presente durante un año a 4ºC, seis meses a 25ºC, dos meses a 37ºC o cuatro semanas a 40ºC en una solución de anticuerpo. Una solución ejemplar de anticuerpo comprende 1 mg/ml de un anticuerpo de la invención, fosfato 10 mM, pH 7, 4, y NaCl 150 mM. Preferentemente, los anticuerpos de la invención se caracterizan adicionalmente porque tienen una CI50 de menos de 25 nM, en el ensayo in vitro de miostatina/indicador SBE descrito en el Ejemplo 4 en el presente documento.

En una realización, un anticuerpo de la invención es resistente a degradación química, es decir, el 100%, 99%, 98%, 97%, 96%, ó 95% de los anticuerpos no se escinden, cuando están presentes en una solución de anticuerpo durante un tiempo y temperatura seleccionados entre el grupo que consiste en: un año a 4ºC, seis meses a 25ºC, dos meses a 37ºC o cuatro semanas a 40ºC en una solución de anticuerpo. Un tiempo y temperatura preferidos es cuatro semanas a 40ºC.

En una realización, los anticuerpos de la invención se caracterizan adicionalmente porque se unen a miostatina dentro del dominio que abarca los aminoácidos 40-64 [ANYCSGECEFVFLQKYPHTHLVHQA (SEC ID Nº 29) para seres humanos], 43-57 [CSGECEFVFLQKYPH (SEC ID Nº 30) para seres humanos] o 45-59 [GECEFVFLQKYPHTH (SEC ID Nº 31) para seres humanos] de miostatina madura. En otra realización, los anticuerpos de la invención se caracterizan adicionalmente porque se unen a un polipéptido que consta de los aminoácidos 40-64, 43-57 ó 45-59 de miostatina madura.

De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención, se proporciona un anticuerpo de la invención que comprende una HCVR y un LCVR, en el que dicha HCVR comprende un péptido en CDRH1 con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 24, un péptido en CDRH2 con la secuencia mostrada en la SEC ID Nº 26, y un péptido en CDRH3 con la secuencia mostrada en la SEC ID Nº 28, y en el que dicha LCVR comprende un péptido en CDRL1 con la secuencia mostrada en la SEC ID Nº 13, un péptido en CDRL2 con la secuencia mostrada en la SEC ID Nº 14, y un péptido en CDRL3 con la secuencia seleccionada entre las SEC ID Nº 21, y 22.

En una realización, un anticuerpo de la invención comprende adicionalmente una región constante, en el que dicha región constante se origina a partir del genoma humano o el genoma de un animal seleccionado entre animales domésticos, animales para deportes y animales como fuente de alimento.

En otra realización, un anticuerpo monoclonal de la invención comprende una HCVR con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 12 y una LCVR con una secuencia seleccionada entre el grupo que consiste en las SEC ID Nº 9 y

10.

En una realización más preferida, un anticuerpo de la invención comprende una cadena ligera con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº 32 y una cadena pesada con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº 33.

De acuerdo con un aspecto adicional, la invención proporciona una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica) que comprende un anticuerpo de la invención. La composición de la invención puede comprender adicionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable. En dicha composición, el anticuerpo de la invención es el principio activo. Preferentemente, la composición comprende una población homogénea o sustancialmente homogénea de un anticuerpo anti-miostatina de la invención. La composición para uso terapéutico o profiláctico es estéril, puede liofilizarse, y se suministra preferentemente con un diluyente apropiado.

La invención proporciona un procedimiento para inhibir al menos una actividad biológica de miostatina en un animal, preferente un mamífero o especie aviar, preferentemente un ser humano, que lo necesite, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz o una cantidad profilácticamente eficaz de un anticuerpo monoclonal anti-miostatina de la invención a dicho mamífero o especie aviar. La invención proporciona adicionalmente un procedimiento para potenciar la masa muscular o tratar o prevenir una enfermedad o trastorno o afección mejorada por la neutralización o antagonismo de una bioactividad de miostatina que comprende administrar a un paciente (por ejemplo, un ser humano) que necesite dicho tratamiento o prevención una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un anticuerpo de la invención.

La invención abarca un anticuerpo de la invención para su uso en terapia.

Adicionalmente... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal anti-miostatina que comprende una HCVR y una LCVR, en el que dicha HCVR comprende:

a) un péptido en CDRH1 con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 24, 5 b) un péptido en CDRH2 con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 26, c) un péptido en CDRH3 con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 28,

y en el que dicha LCVR comprende:

a) un péptido en CDRL1 con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 13, b) un péptido en CDRL2 con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 14, y 10 c) un péptido en CDRL3 con una secuencia seleccionada entre las SEC ID Nº 21 y 22.

2. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 1, en el que las regiones flanqueantes de la HCVR y LCVR son regiones flanqueantes humanas.

3. Un anticuerpo monoclonal anti-miostatina de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende una HCVR con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 12 y una LCVR con una secuencia seleccionada entre las SEC ID Nº 9 y 10.

4. Un anticuerpo monoclonal anti-miostatina de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende una cadena ligera con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº 32 y una cadena pesada con una secuencia mostrada en la SEC ID Nº

33.

5. Una composición que comprende un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

6. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para su uso en terapia.

7. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para su uso en el aumento de la masa muscular en un sujeto que lo necesite.

8. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para su uso en el tratamiento o prevención de pérdida muscular, debilidad, sarcopenia relacionada con la edad, atrofia por desuso o caquexia.