Anticuerpos anti-mesotelina.

Un anticuerpo que se fija específicamente a mesotelina, comprendiendo dicho anticuerpo una cadena pesadaexpresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO:

1 y una cadenaligera expresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO: 3, unacadena pesada expresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO: 5 yuna cadena ligera expresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO:7, o una cadena pesada expresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprende SEQID NO: 9 y una cadena ligera expresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprendeSEQ ID NO: 11.

Anticuerpos anti-mesotelina

Remisión a una solicitud afín Esta solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud Provisional U.S. 60/660.177, presentada el 10 de marzo 2005.

Campo de la invención Esta invención se refiere a anticuerpos que se fijan específicamente a mesotelina. En algunas realizaciones de la invención, los anticuerpos son internalizados por células que expresan o son portadoras de mesotelina ("células mesotelina-positivas") o induce una actividad inmunoefectora sobre las células mesotelina-positivas. Los anticuerpos de la invención son útiles en el suministro específico de agentes farmacológicos a las células mesotelina-positivas así como en la suscitación de una actividad inmunoefectora sobre las células mesotelina-positivas, por ejemplo, células tumorales y sus precursoras. La exposición se refiere también a polinucleótidos que codifican los anticuerpos de la invención, células que expresan los anticuerpos de la invención, métodos de producción de los anticuerpos de la invención, composiciones de los anticuerpos, métodos de inhibición del crecimiento de células displásticas que utilizan los anticuerpos, y métodos de tratamiento del cáncer que utilizan los anticuerpos.

Antecedentes de la invención El cáncer de páncreas es la quinta causa de mortalidad en los Estados Unidos, con una tasa de supervivencia de 5 años inferior al 5%. Aunque la radioterapia y la quimioterapia son los tratamientos recomendados y han alcanzado cierto éxito, ningún tratamiento actual consigue una supervivencia de 2 años para pacientes con enfermedad localmente avanzada y metastásica (Lawrence, Semin. Oncol., 22: 68-71, 1995) .

Una dificultad que se encuentra comúnmente cuando se tratan pacientes que padecen cáncer de páncreas y otros cánceres con fármacos citotóxicos de molécula pequeña es que la citotoxina causa toxicidad tanto a los tejidos normales como a los tejidos cancerosos. Un enfoque para obtener mayor especificidad para el tejido canceroso es el uso de anticuerpos que puedan direccionarse a antígenos específicos expresados en las células del cáncer que no son expresados o se expresan a un nivel inferior en las células normales. Estos antígenos diana pueden aprovecharse utilizando anticuerpos para destruir específicamente las células tumorales portadoras del antígeno por una diversidad de mecanismos que incluyen inhibición de la actividad biológica del antígeno, suscitación de una actividad inmunoefectora por citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y/o citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) , o por suministrar inmuno- o radio-conjugados que, cuando se suministran a la célula portadora del antígeno, destruyen específicamente la célula diana. El descubrimiento de anticuerpos que puedan fijarse específicamente a las células tumorales portadoras del antígeno y destruir eficazmente las mismas ha sido difícil para muchos cánceres. Esto ha sido debido en parte a la imposibilidad de conseguir una lisis potente del tumor por causa de una falta de función inmunoefectora o de internalización eficiente de los anticuerpos portadores de inmunotoxinas. Debido al perfil de expresión para la mesotelina en el tejido patológico, existe una oportunidad de obtener un direccionamiento específico al tumor para diversos tipos de cáncer que incluyen, pero sin carácter limitante, los cánceres de páncreas, ovario y pulmón y el mesotelioma.

La mesotelina es una glicoproteína ligada a glicosilfosfatidilinositol (GPI) , sintetizada como un precursor de 69 kDa y procesada proteolíticamente en una forma de 30 kDa secretada en el terminal NH2 y una forma de 40 kDa unida a la membrana (Yamaguchi, et al. (1994) J. Biol. Chem. 269: 805-808) . La mesotelina se expresa fuertemente en la superficie de los cánceres de páncreas, cánceres de ovario, mesoteliomas, cánceres de pulmón, y algunos otros cánceres. Su expresión es limitada en los tejidos normales, lo que hace de ella una diana potencial para la terapia del cáncer. (Cao, et al., Mod. Pathol. 14: 2005; Hassan, et al., Clin. Cancer Res. 2004 jun 15; 10 (12 Pt. 1) : 3937-42) .

La administración de anticuerpos contra la mesotelina ha sido propuesta como estrategia para el tratamiento del mesotelioma así como del cáncer de pulmón, ovario, y páncreas. Sin embargo, no se han desarrollado hasta ahora anticuerpos de longitud total contra la mesotelina que puedan suscitar una actividad inmunoefectora potente e internalizarse para suministro de conjugados tóxicos.

En 1992, Chang et al. describieron anticuerpos monoclonales que reconocían antígenos en las células del carcinoma de ovario humano (Chang, et al., Am. J. Surg. Pathol. 1992 16:259-68) . Este anticuerpo, denominado K1, estaba conjugado químicamente a una forma truncada de la exotoxina de Pseudomonas y se encontró que se fijaba a las células mesotelina-positivas y células del cáncer. Sin embargo, no era útil como conjugado de inmunotoxina debido a su pobre capacidad de internalización. La Patente U.S. No. 6.083.502 describe mesotelina y usos para direccionamiento a y diagnóstico de células mesotelina-positivas utilizando el anticuerpo K1.

Se han producido subsiguientemente anticuerpos monocatenarios que se fijan con afinidad alta y tienen afinidad antitumoral potente sobre los tumores mesotelina-positivos como conjugado. Un anticuerpo monocatenario de este tipo es SS1 (scFv) -PE38 que tiene una afinidad de fijación alta (Kd de 0, 7 nM) para mesotelina. Este anticuerpo monocatenario es una forma estabilizada del Fv en la cual un puente disulfuro conecta los dominios de las cadenas ligera y pesada del Fv. Se ha demostrado que SS1 (scFv) -PE38 tiene actividad en la destrucción de las células tumorales por internalización del complejo anticuerpo monocatenario-inmunotoxina (Hassan, et al., Clin. Cancer Res., 8: 3520-6, 2002; Hassan, et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 21: 29a, 2002) . Otros grupos han desarrollado también anticuerpos que pueden fijarse a mesotelina y han encontrado que la sobreexpresión de este antígeno está asociada con diversos cánceres (Scholler, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1999 sep 28;96 (20) :11531-6; Ordóñez, Am. J. Surg. Pathol. 27:1418-28, 2003) .

La Patente U.S. No. 6.809.184 describe un anticuerpo monocatenario de afinidad alta que se fija a mesotelina en un epítope diferente que el anticuerpo K1. Se encontró que este fragmento de anticuerpo se internaliza en las células mesotelina-positivas como un fragmento monocatenario unido a una inmunotoxina. El anticuerpo se denominó SS1.

Los intentos para desarrollar anticuerpos inmunoconjugados que puedan direccionarse específicamente a mesotelina han alcanzado poco éxito debido a internalización y/o afinidad deficientes (Hassan, et al., J. Immunother. 2000 julio-agosto; 23 (4) : 473-9) . Esta falta de internalización podría estar causada por afinidad baja o internalización deficiente debida a la composición del anticuerpo y/o la fijación del epítope. Adicionalmente, se intentó la generación del anticuerpo monoclonal (mAb) K1 como inmunoconjugado dado que la forma no conjugada no era citotóxica en si misma (Hassan, et al., Clin. Cancer Res., 10: 3937-3942, 2004) .

Se proporcionan en esta memoria anticuerpos in-out que pueden internalizarse en las células mesotelina-positivas y 0suscitar un efecto citotóxico por actividad inmunoefectora . Se proporcionan también terapias de anticuerpos para el cáncer, en particular para cánceres mesotelina-positivos, por ejemplo, cánceres de páncreas, ovario, mesotelioma, y pulmón, utilizando anticuerpos que suscitan una actividad inmunoefectora potente pero retienen la capacidad para internalizarse y facilitar el suministro de toxinas a las células mesotelina-positivas.

Sumario de la invención El alcance de la presente invención se define por las reivindicaciones, y cualquier información que no esté comprendida en las reivindicaciones se proporciona únicamente para información.

La invención proporciona anticuerpos específicos de mesotelina que suscitan alternativamente una función inmunoefectora potente o se internalizan en las células mesotelina-positivas, a los que se hace referencia en esta memoria como anticuerpos in-out de mesotelina. Como se utiliza en esta memoria, la expresión "anticuerpos in-out" ("in-out Abs") hace referencia a anticuerpos que pueden suscitar alternativamente una actividad inmunoefectora e internalizarse en una célula presentadora de antígeno por fijación al antígeno diana. Sin desear quedar ligados a ninguna teoría particular, se cree que los Abs in-out se fijan a la superficie celular de una célula antígeno-positiva y se internalizan después de cierto periodo de tiempo a no ser que sean atrapados por las células inmunoefectoras... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo que se fija específicamente a mesotelina, comprendiendo dicho anticuerpo una cadena pesada expresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO: 1 y una cadena ligera expresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO: 3, una cadena pesada expresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO: 5 y una cadena ligera expresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO: 7, o una cadena pesada expresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO: 9 y una cadena ligera expresada recombinantemente por una secuencia de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO: 11.

2. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho anticuerpo está conjugado a un agente quimioterapéutico.

3. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicho agente quimioterapéutico comprende un radionucleido.

4. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 y un portador farmacéuticamente aceptable.

5. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende adicionalmente un agente quimioterapéutico.

6. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende adicionalmente una enzima, una proteína, un péptido, un aminoácido, un ácido nucleico, un lípido o un carbohidrato.

7. Una célula que produce el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1.

8. Un método de producción de un anticuerpo que se fija específicamente a mesotelina y es capaz de suscitar a la vez una actividad inmunoefectora e internalizarse con las células mesotelina-positivas, comprendiendo el método los pasos de cultivar la célula de la reivindicación 7 y recuperar el anticuerpo del medio de cultivo.

9. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, para uso en la inhibición del crecimiento de células displásticas mesotelina-positivas en un individuo.

10. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 9, en donde las células displásticas son células de carcinoma de ovario, células de adenocarcinoma pancreático, células de mesotelioma, células de carcinoma de pulmón, o células de cáncer de próstata.

11. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 9 o la reivindicación 10, en donde el individuo es un humano.

12. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 10 o la reivindicación 11, en donde dicho anticuerpo es un anticuerpo no conjugado o una mixtura de un anticuerpo no conjugado y un anticuerpo conjugado a un agente quimioterapéutico.

13. El uso de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3 para la preparación de un medicamento para uso en la inhibición del crecimiento de células displásticas mesotelina-positivas en un individuo.

14. El uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el anticuerpo es un anticuerpo no conjugado o una mixtura de un anticuerpo no conjugado y un anticuerpo conjugado a un agente quimioterapéutico.

15. Un kit para uso en un método para inhibición del crecimiento de células tumorales en un individuo o para identificación de la presencia de células displásticas mesotelina-positivas in vitro o in vivo, en donde el kit comprende un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1.

16. Un kit de acuerdo con la reivindicación 15, que comprende adicionalmente al menos un reactivo quimioterapéutico o citotóxico, o al menos un reactivo de diagnóstico.

17. Un kit de acuerdo con la reivindicación 16, que comprende adicionalmente medios e instrucciones para administrar el anticuerpo al individuo.

18. Un método de detección de una célula displástica que presenta mesotelina en su superficie, comprendiendo dicho método poner en contacto dicha célula con el anticuerpo de la reivindicación 1 y determinar la fijación de dicho anticuerpo a dicha célula.

19. Un método de detección de mesotelina o un fragmento de la misma en la superficie de una célula displástica, comprendiendo dicho método poner en contacto dicha célula con un anticuerpo de la reivindicación 1, y determinar la fijación de dicho anticuerpo a dicha mesotelina o fragmento de la misma.

20. Un método de detección de mesotelina o un fragmento de la misma en una muestra biológica, comprendiendo dicho método poner en contacto dicha muestra biológica con un anticuerpo de la reivindicación 1, y determinar la fijación de dicho anticuerpo a mesotelina o un fragmento de la misma.

21. Un método de acuerdo con la reivindicación 18 ó 19, en donde dicha célula displástica es una célula de 5 cáncer de ovario, una célula de cáncer de páncreas, una célula de cáncer de pulmón, o una célula de mesotelioma.

22. Un método de acuerdo con la reivindicación 20, en donde dicha muestra biológica es una muestra biológica de un individuo que padece cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón, o mesotelioma.

23. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 22, en donde dicho anticuerpo está marcado con un marcador detectable.

24. Un método de acuerdo con la reivindicación 18, 19, 21 ó 23, que comprende detectar dicha célula displástica in vitro.

25. Un método de acuerdo con la reivindicación 22, en donde el individuo es humano.

Figura 3