Un anticuerpo que se une específicamente a la mesotelina y es capaz de provocar tanto citotoxicidad celulardependiente de anticuerpos como citotoxicidad dependiente del complemento e internalizarse en las célulaspositivas a la mesotelina,

comprendiendo dicho anticuerpo una cadena pesada que comprende una secuencia deaminoácidos de la SEQ ID NO: 2 y una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ IDNO: 4; una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y una cadena ligeraque comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8, o una cadena pesada que comprende unasecuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidosde la SEQ ID NO: 12.

Anticuerpos anti-mesotelina

REFERENCIA CRUZADA A UNA SOLICITUD RELACIONADA

Esta solicitud reivindica la prioridad de la Solicitud de Patente Provisional de EE.UU. 60/660.177, presentada el 10 5 de marzo de 2005, que se incorpora en su totalidad en la presente memoria como referencia.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

Esta descripción se refiere a anticuerpos que se unen específicamente a la mesotelina. Los anticuerpos están internalizados por células que expresan o llevan mesotelina ("células positivas a la mesotelina") y provocan citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (abreviadamente ADCC, por la expresión inglesa Antibody 10 Dependent Cellular Cytotoxicity) o citotoxicidad dependiente del complemento (abreviadamente CDC, por la expresión inglesa Complement Dependent Cytotoxicity) . Los anticuerpos de la invención son útiles para el suministro específico de agentes farmacológicos a células positivas a la mesotelina, así como para provocar una actividad inmuno-efectora en las células positivas a la mesotelina, por ejemplo, células y precursores tumorales. La invención se refiere también a polinucleótidos que codifican los anticuerpos de la invención, a células que expresan los

anticuerpos de la invención, a métodos para producir los anticuerpos de la invención, a composiciones de los anticuerpos y a kits para uso en métodos para inhibir el crecimiento de células tumorales, en donde los kits comprenden los anticuerpos.

FUNDAMENTO DE LA INVENCIÓN

El cáncer de páncreas es la quinta causa principal de muerte en los EE. UU. con un índice de supervivencia en 5

años inferior al 5%. Aunque la radioterapia y la quimioterapia son los tratamientos recomendados y han gozado de cierto éxito, ningún tratamiento actual consigue una supervivencia de 2 años en pacientes con la enfermedad localmente avanzada y metastásica (Lawrence, Semin. Oncol., 22:68-71, 1995) .

Una dificultad que se encuentra normalmente cuando se tratan pacientes que tienen cánceres de páncreas, así como de otro tipo con fármacos citotóxicos de moléculas pequeñas es que la citotoxina provoca toxicidad tanto en 25 los tejidos normales como en los tejidos cancerosos. Una propuesta para obtener mayor especificidad para el tejido canceroso es el uso de anticuerpos que puedan dirigirse a antígenos específicos expresados en células cancerosas que no se expresan o lo hacen a menor nivel en las células normales. Estos antígenos diana pueden ser explotados usando anticuerpos que destruyan específicamente las células tumorales que llevan el antígeno por una variedad de mecanismos que incluyen la inhibición de la actividad biológica del antígeno, provocando una actividad inmuno30 efectora por la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y/o la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) , o el suministro de inmuno- o radio-conjugados que, cuando se suministran a la célula que lleva el antígeno, destruyen específicamente la célula diana. El hallazgo de anticuerpos que puedan unirse específicamente a células tumorales que llevan antígenos y destruirlas eficazmente ha demostrado ser difícil en muchos cánceres. Esto ha sido debido en parte a la incapacidad de obtener una fuerte lisis tumoral debida bien a

una falta de función inmuno-efectora o a la internalización eficaz de anticuerpos que llevan inmunotoxinas. Debido al perfil de expresión de la mesotelina en el tejido patológico, se tiene la oportunidad de obtener dianas específicas de tumores para diversos tipos de cáncer incluyendo, aunque sin limitación, cáncer de páncreas, de ovario y de pulmón y mesotelioma.

La mesotelina es una glicoproteína unida a glicosilfosfatidilinositol (GPI) sintetizada como un precursor de 69 kDa y

procesada proteolíticamente en forma segregada en el extremo NH2 de 30 kDa y en forma unida a la membrana de 40 kDa (Yamaguchi, et al., (1994) J. Biol. Chem. 269:805-808) . La mesotelina se expresa en gran cantidad sobre la superficie de los cánceres de páncreas, de ovario, mesoteliomas, de pulmón y algunos otros cánceres. Su expresión es limitada sobre los tejidos normales, siendo una diana potencial en la terapia contra el cáncer. (Cao, et al., Mod. Pathol. 14:2005; Hassan, et al., Clin. Cancer Res. 2004 Jun 15; 10 (12 Pt 1) :3937-42) .

45 Se ha propuesto la administración de anticuerpos contra la mesotelina como una estrategia para el tratamiento del mesotelioma, así como los cánceres de páncreas, ovario y pulmón. Sin embargo, no se habían desarrollado previamente anticuerpos de longitud completa contra la mesotelina que puedan provocar un fuerte actividad inmunoefectora e internalizarse para el suministro de conjugados tóxicos.

En 1992, Chang et al., describieron anticuerpos monoclonales que reconocían antígenos en las células del

50 carcinoma de ovarios humano (Chang, et al., Am. J. Surg. Pathol. 1992 16:259-68) . Este anticuerpo, denominado K1, se conjugó químicamente a una forma truncada de exotoxina de Pseudomonas y se encontró que se unía a las células positivas a la mesotelina y a las células cancerosas. Sin embargo, no fue útil como conjugado de inmunotoxinas debido a su mala capacidad de internalización. La Patente de EE.UU. No. 6.083.502 describe la mesotelina y los usos para servir como diana y diagnosticar las células positivas a la mesotelina usando el

55 anticuerpo K1.

Posteriormente se produjeron anticuerpos monocatenarios que se unían con alta afinidad y tenían potente actividad antitumoral como conjugado sobre los tumores positivos a la mesotelina. Uno de dichos anticuerpos monocatenarios es SS1 (scFv) -PE38 que tiene una alta afinidad de unión (Kd de 0, 7 nM) a la mesotelina. Este anticuerpo monocatenario es una forma estabilizada de Fv en la que un enlace disulfuro conecta los dominios de las cadenas ligera y pesada del Fv. Se ha demostrado que el SS1 (scFv) -PE38 tiene actividad destructora de las células tumorales por internalización del complejo anticuerpo monocatenario-inmunotoxina (Hassan, et al., Clin. Cancer Res., 8: 3520-6, 2002; Hassan, et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 21 : 29a, 2002) . Otros grupos también han desarrollado anticuerpos que pueden unirse a la mesotelina y encontraron que la sobreexpresión de este antígeno estaba asociada a diversos cánceres (Scholler, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1999 Sep 28; 96 (20) :11531-6; Ordoñez, Am. J. Surg. Pathol. 27:1418-28, 2003) .

La Patente de EE.UU. No. 6.809.184 describe un anticuerpo monocatenario de alta afinidad que se une a la mesotelina en un epítopo diferente al del anticuerpo K1. Se encontró que este fragmento de anticuerpo se internaliza en células positivas a la mesotelina como un fragmento monocatenario unido a una inmunotoxina. Al anticuerpo se le llamó SS1.

Se han realizado intentos para desarrollar anticuerpos inmunoconjugados que puedan dirigirse específicamente a la mesotelina con poco éxito debido a la mala internalización y/o afinidad (Hassan, et al., J. Immunother. 2000 Jul-Aug; 23 (4) :473-9) . Esta falta de internalización podría ser debida a la baja afinidad o mala internalización debida a la composición del anticuerpo y/o unión al epítopo. Además, se intentó la generación del anticuerpo monoclonal (mAb) K1 como un inmunoconjugado debido a que la forma no conjugada no era citotóxica (Hassan, et al., Clin. Cancer Res., 10:3937-3942, 2004) .

En la presente invención se proporcionan anticuerpos in-out (definidos más adelante) que se pueden internalizar en células positivas a la mesotelina y provocar un efecto citotóxico por medio de la actividad inmuno-efectora. También se proporcionan composiciones para uso en terapias con anticuerpo para el cáncer, en particular para cánceres positivos a la mesotelina, por ejemplo, cánceres de páncreas, de ovario, mesotelioma y de pulmón, usando anticuerpos que provocan un fuerte actividad inmuno-efectora aunque reteniendo la capacidad de internalizarse y facilitar el suministro de toxinas a las células positivas a la mesotelina.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

El alcance de la presente invención está definido por las reivindicaciones y cualquier información que no está incluida en ellas se proporciona sólo como información. La invención proporciona anticuerpos de acuerdo con la reivindicación 1. Como se usa en la presente memoria, " anticuerpos in-out " ("Ab in-out") se refieren... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo que se une específicamente a la mesotelina y es capaz de provocar tanto citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos como citotoxicidad dependiente del complemento e internalizarse en las células positivas a la mesotelina, comprendiendo dicho anticuerpo una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 y una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4; una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8, o una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12.

2. Un anticuerpo según la reivindicación 1, en donde dicho anticuerpo está conjugado a un agente quimioterapéutico.

3. Un anticuerpo según la reivindicación 2, en donde dicho agente quimioterapéutico comprende un radionúclido.

4. Un polinucleótido que codifica una cadena pesada y una cadena ligera de un anticuerpo según la reivindicación

1.

5. Un polinucleótido según la reivindicación 4, que comprende una secuencia de ácidos nucleicos de las SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 9.

6. Un polinucleótido según la reivindicación 4, que comprende una secuencia de ácidos nucleicos de las SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7 o SEQ ID NO: 11.

7. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo según la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Una composición farmacéutica según la reivindicación 7, que comprende además un agente quimioterapéutico, una enzima, una proteína, un péptido, un aminoácido, un ácido nucleico, un lípido o un carbohidrato.

9. Un vector que comprende un polinucleótido según la reivindicación 4.

10. Una célula de expresión que comprende un polinucleótido según la reivindicación 4.

11. Una célula de expresión que comprende un vector según la reivindicación 9.

12. Una célula de expresión según la reivindicación 11, en donde la célula es una célula de mamífero.

13. Una célula que produce un anticuerpo según la reivindicación 1.

14. Una célula según la reivindicación 13, en donde la célula es un hibridoma.

15. Un método para producir un anticuerpo que se une específicamente a la mesotelina y es capaz de provocar tanto citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos como citotoxicidad dependiente del complemento e internalizarse en las células positivas a la mesotelina, comprendiendo el método las etapas de cultivar una célula según la reivindicación 14 y recuperar el anticuerpo del medio de crecimiento.

16. Un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para uso en la inhibición en un sujeto del crecimiento de células displásicas positivas a la mesotelina.

17. Un anticuerpo para uso en terapia según la reivindicación 16, en donde las células displásicas son células de carcinoma de ovario, células de adenocarcinoma de páncreas, células de mesotelioma, células de carcinoma de pulmón o células de cáncer de próstata.

18. Un anticuerpo para uso en terapia según la reivindicación 16 o 17, en donde el sujeto es un ser humano.

19. Un anticuerpo para uso en terapia según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, en donde el anticuerpo no está conjugado o es una mezcla de un anticuerpo no conjugado y un anticuerpo conjugado a un agente quimioterapéutico.

20. El uso de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para la preparación de un medicamento para uso en la inhibición en un sujeto del crecimiento de células displásicas positivas a la mesotelina.

21. El uso según la reivindicación 20, en donde el anticuerpo no está conjugado o es una mezcla de un anticuerpo no conjugado y un anticuerpo conjugado a un agente quimioterapéutico.

22. Un kit para uso en un método para inhibir el crecimiento de células tumorales en un sujeto o para identificar la presencia de células displásicas positivas a la mesotelina in vitro o in vivo; en donde el kit comprende un anticuerpo según la reivindicación 1.

23. Un kit según la reivindicación 22, que comprende además al menos un reactivo quimioterapeútico o citotóxico o al menos un reactivo de diagnóstico.

24. Un kit según la reivindicación 22 o la reivindicación 23, que comprende además medios e instrucciones para administrar el anticuerpo a un sujeto.