1,5-Difenilpirazoles II como inhibidores de HSP90.

Compuestos de la fórmula 1

donde

R1 significa OH, OCH3, OCF3, OCHF2, OBzl, OAc, p-metoxibenciloxi, SH, S(O)mCH3, SO2NH2, Hal, CF3 o CH3,R2 significa CONA[(CH2)oAr] o CONA[(CH2)oHet'],

R3 significa H, Hal, CN, NO2, A, Alk, (CH2)nAr, (CH2)nHet', COOH, COOA, COOAr, COOHet', CONH2, CONHA,CONAA', CONHAr, CONAAr, CON(Ar)2, CONHHet', CON(Het')2, NH2, NHA, NHAr, NHHet', NAA', NHCOA, NACOA',NHCOAr, NHCOHet', NHCOOA, NHCOOAr, NHCOOHet', NHCONHA, NHCONHAr, NHCONHHet', OH, OA, OAr,OHet', SH, S(O)mA.

S(O)mAr, S(O)mHet', SO2NH2, SO2NHA, SO2NAA', SO2NHAr, SO2NAAr, SO2NHHet', SO2NAHet',SO2NAbencilo, SO2N(Ar)2 o SO2N(Het')2,

R4, R5, R6 significan respectivamente, independientemente entre sí, H, Hal, CN, NO2, A, Alk, (CH2)nAr, (CH2)nHet',COOH, COOA, COOAr, COOHet', CONH2, CONHA, CONAA', CONHAr, CONAAr, CON(Ar)2, CONHHet',CON(Het')2, NH2, NHA, NHAr, NHHet', NAA', NHCOA, NHCONH2, NACOA', NHCO(CH2),Ar, NHCOHet', NHCOOA,NHCOOAr, NHCOOHet', NHCONHA, NHCONHAr, NHCONHHet', OH, OA, O(CH2)oHet, O(CH2)oNH2, O(CH2)oCN,OAr, OHet', SH, S(O)mA, S(O)mAr, S(O)mHet', SO2NH2, SO2NHA, SO2NAA', SO2NHAr, SO2NAAr, SO2NHHet',SO2N(Ar)2 o SO2N(Het')2.

1, 5-Difenilpirazoles II como inhibidores de HSP90

Antecedentes de la invención

Es objeto fundamental de la presente invención encontrar nuevos compuestos con propiedades valiosas, principalmente aquellos que pueden utilizarse para producir medicamentos.

La presente invención hace referencia a compuestos en los cuales la inhibición, la regulación y/o la modulación de HSP90 desempeñan un papel; además, a composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos, así como al uso de los compuestos para el tratamiento de enfermedades en las que HSP90 desempeña un papel.

El correcto plegamiento y conformación de las proteínas en las células son garantizados por las chaperonas moleculares y son críticos para la regulación del equilibro entre la síntesis y la degradación de las proteínas. Las chaperonas son importantes para la regulación de muchas funciones centrales celulares tales como, por ejemplo, la proliferación celular y la apoptosis (Jolly and Morimoto, 2000; Smith et al., 1998; Smith, 2001) .

Proteínas de choque térmico (heat shock proteins, HSPs)

Las células de un tejido reaccionan a un estrés externo como, por ejemplo, calor, hipoxia, estrés oxidativo o sustancias tóxicas como metales pesados o alcoholes, con la activación de una serie de chaperonas conocidas bajo el nombre de "heat shock proteins" (HSPs) .

La activación de las HSPs protege a la célula contra lesiones desencadenadas por tales factores de estrés, acelera la recomposición del estado fisiológico y lleva a un estado celular tolerante al estrés.

Además de este mecanismo de protección descubierto originalmente, mediado por las HSPs en caso de estrés externo, con el paso del tiempo se describieron otras funciones importantes de las chaperonas para las distintas HSP, incluso en condiciones normales libres de estrés. De esta manera, distintas HSPs regulan, por ejemplo, el correcto plegamiento, la localización y la función intracelulares o la degradación regulada de una serie de proteínas de células biológicamente importantes.

Las HSP forman una familia de genes con productos génicos individuales, cuya expresión celular, función y localización se distingue en diferentes células. La denominación y clasificación dentro de la familia se realiza conforme a su peso molecular, por ejemplo HSP27, HSP70 y HSP90.

Algunas enfermedades humanas se basan en un mal plegamiento de las proteínas (ver reseña, por ejemplo, Tytell et al., 2001; Smith et al., 1998) . Por lo tanto, el desarrollo de terapias, que interviene en el mecanismo del plegamiento de las proteínas dependiente de las chaperonas, podría ser útil en esos casos. A manera de ejemplo, las proteínas mal plegadas en la enfermedad de Alzheimer, en enfermedades priónicas o el síndrome de Huntington conducen a una agregación de proteínas con un desarrollo neurodegenerativo. Por un incorrecto plegamiento de las proteínas también puede generarse una pérdida de la función del tipo silvestre que puede tener como consecuencia una función molecular y fisiológica mal regulada.

A las HSP también se les asigna gran importancia en el caso de enfermedades tumorales. Existen indicios, por ejemplo, de que la expresión de determinadas HSPs está relacionada con el estadio de la progresión de tumores (Martin et al., 2000; Conroy et al., 1996; Kawanishi et al., 1999;

Jameel et al., 1992; Hoang et al., 2000; Lebeau et al., 1991) .

El hecho de que HSP90 desempeña un papel importante en varias vías de señales oncogénicas centrales en la célula y que se apunte a ciertas sustancias naturales con actividad de HSP90 inhibidora del cáncer, condujo al concepto de que sería útil una inhibición de la función de HSP90 en el tratamiento de enfermedades tumorales.

Un inhibidor de HSP90, 17-alilamino-17-demetoxigeldanamicina (17AAG) , un derivado de la geldanamicina, se halla actualmente en investigación clínica.

HSP90

HSP90 representa aproximadamente 1-2% de la masa proteica celular total. Habitualmente está presente en la célula como dímero y está asociada con numerosas proteínas, las llamadas co-chaperonas (véase, por ejemplo, Pratt, 1997) . La HSP90 es esencial para la vitalidad de las células (Young et al., 2001) y desempeña un papel clave en la respuesta al estrés celular por la interacción con muchas proteínas, cuyo plegamiento nativo fue modificado por estrés externo, tal como, por ejemplo, choque térmico, a fin de recomponer el plegamiento original o impedir la agregación de las proteínas (Smith et al., 1998) .

También hay indicios de que la HSP90 tiene importancia como amortiguador (búfer) contra las consecuencias de las mutaciones, probablemente por la corrección de un mal plegamiento de las proteínas provocado por la mutación (Rutherford y Lindquist, 1998) .

Además, la HSP90 también tiene un significado de regulación. En las condiciones fisiológicas, la HSP90, junto con su homólogo en el retículo endoplasmático, GRP94, desempeña un papel en el equilibrio celular, a fin de garantizarla estabilidad de la conformación y la maduración de diversas proteínas clave "clientes" Éstas pueden subdividirse en tres grupos: receptores para hormonas esteroides, Ser/Thr o tirosina quinasas (por ejemplo, ERBB2, RAF-l, CDK4 y LCK) y una colección de diversas proteínas, tales como, por ejemplo, p53 mutada o la subunidad catalítica de la telomerasa hTERT. Cada una de estas proteínas adopta un papel clave en la regulación de procesos celulares fisiológicos y bioquímicos.

La familia de HSP90 conservada del ser humano está compuesta por cuatro genes, la HSP90α citosólica, la isoforma inducible de la HSP90β (Hickey et al., 1989) , la GRP94 en el retículo endoplasmático (Argon et al., 1999) y la HSP75/TRAP1 en la matriz mitocondrial (Felts et al., 2000) . Se supone que todos los miembros de la familia tienen una forma de acción similar, pero, según su localización en la célula, se unen a diversas proteínas "clientes". A manera de ejemplo, la ERBB2 es una proteína "cliente" específica de GRP94 (Argon et al., 1999) , mientras que el receptor tipo 1 del factor de necrosis tumoral (TNFR1) o la proteína del retinoblastoma (Rb) se detectaron como "clientes" de TRAP1 (Song et al., 1995; Chen et al., 1996) .

HSP90 participa en una serie de interacciones complejas con una gran cantidad de proteínas "clientes" y proteínas reguladoras (Smith, 2001) . A pesar de que aún no están clarificados detalles moleculares precisos, experimentos e investigaciones bioquímicos han podido descifrar en los últimos años, con ayuda de la cristalografía de rayos X, cada vez más detalles de la función chaperona de la HSP90 (Prodromou et al., 1997; Stebbins et al., 1997) . Según esto, la HSP90 es una chaperona molecular dependiente de ATP (Prodromou et al, 1997) , en donde la dimerización es importante para la hidrólisis de ATP. La unión de ATP resulta en la formación de una estructura dimérica toroidal, en la que ambos dominios N-terminales entran en un contacto estrecho y provocan un "switch" en la conformación (Prodromou y Pearl, 2000) .

Inhibidores conocidos de HSP90

La primera clase descubierta de inhibidores de la HSP90 fueron las ansamicinas de benzoquinona con los compuestos herbimicina A y geldanamicina. Originalmente se comprobó con ellas la reversión del fenotipo maligno en fibroblastos que había sido inducida por la transformación con el oncogén v-Src (Uehara et al., 1985) .

Más tarde se mostró una fuerte actividad antitumoral in vitro (Schulte et al., 1998) e in vivo en modelos animales (Supko et al., 1995) . La inmunoprecipitación y las investigaciones en las matrices de afinidad mostraron que el mecanismo de acción principal de la geldanamicina implica una unión con la HSP90 (Whitesell et al., 1994; Schulte y Neckers, 1998) . Además, se mostró por medio de ensayos con cristalografía de rayos X que la geldanamicina compite por el sitio de unión de ATP e inhibe la actividad de la ATPasa de la HSP90 (Prodromou et al., 1997; Panaretou et al., 1998) . De esta manera, se impide la formación del complejo multímero de HSP90, con su propiedad de actuar como chaperona para las proteínas "clientes". Como consecuencia, se degradan las proteínas "clientes" a través de la vía de ubiquitina-proteasoma.

El derivado de la geldanamicina 17-alilamino-17-demetoxigeldanamicina (17AAG) mostró una propiedad inalterada en la inhibición de la HSP90, la degradación de las proteínas "clientes" y la actividad antitumoral en cultivos celulares y modelos tumorales de xenoinjerto (Schulte et al, 1998; Kelland et al, 1999) , pero tenía una citotoxicidad hepática claramente menor que la geldanamicina (Page et al., 1997)... [Seguir leyendo]

1. Compuestos de la fórmula 1

donde R1 significa OH, OCH3, OCF3, OCHF2, OBzl, OAc, p-metoxibenciloxi, SH, S (O) mCH3, SO2NH2, Hal, CF3 o CH3,

R2 significa CONA[ (CH2) oAr] o CONA[ (CH2) oHet’],

R3 significa H, Hal, CN, NO2, A, Alk, (CH2) nAr, (CH2) nHet’, COOH, COOA, COOAr, COOHet’, CONH2, CONHA, CONAA’, CONHAr, CONAAr, CON (Ar) 2, CONHHet’, CON (Het’) 2, NH2, NHA, NHAr, NHHet’, NAA’, NHCOA, NACOA’, NHCOAr, NHCOHet’, NHCOOA, NHCOOAr, NHCOOHet’, NHCONHA, NHCONHAr, NHCONHHet’, OH, OA, OAr, OHet’, SH, S (O) mA. S (O) mAr, S (O) mHet’, SO2NH2, SO2NHA, SO2NAA’, SO2NHAr, SO2NAAr, SO2NHHet’, SO2NAHet’, SO2NAbencilo, SO2N (Ar) 2 o SO2N (Het’) 2,

R4, R5, R6 significan respectivamente, independientemente entre sí, H, Hal, CN, NO2, A, Alk, (CH2) nAr, (CH2) nHet’, COOH, COOA, COOAr, COOHet’, CONH2, CONHA, CONAA’, CONHAr, CONAAr, CON (Ar) 2, CONHHet’, CON (Het’) 2, NH2, NHA, NHAr, NHHet’, NAA’, NHCOA, NHCONH2, NACOA’, NHCO (CH2) , Ar, NHCOHet’, NHCOOA, NHCOOAr, NHCOOHet’, NHCONHA, NHCONHAr, NHCONHHet’, OH, OA, O (CH2) oHet, O (CH2) oNH2, O (CH2) oCN, OAr, OHet’, SH, S (O) mA, S (O) mAr, S (O) mHet’, SO2NH2, SO2NHA, SO2NAA’, SO2NHAr, SO2NAAr, SO2NHHet’, SO2N (Ar) 2 o SO2N (Het’) 2,

R4 y R5 juntos también significan OCH2O, OCH2CH2O, -CH=CH-CH=CH-, NH-CH=CH o CH=CH-NH,

Y significa OH o SH,

A, A’ significan respectivamente, independientemente entre sí, alquilo no ramificado o ramificado con 1-10 átomos de C, donde uno, dos o tres grupos CH2 pueden estar reemplazados por O, S, SO, SO2, NH, NR8 y/o por grupos -CH=CH- y/o 1-5 átomos de H también pueden estar reemplazados por F, Cl, Br y/o R7; Alk o alquilo cíclico con 3-7 átomos de C,

A y A’ también significan juntos una cadena de alquileno con 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de C, donde un grupo CH2 pueden estar reemplazados por O, S, SO, SO2, NH, NR8, NCOR8 o NCOOR8,

Alk significa alquenilo con 2-6 átomos de C,

R7 significa COOR9, CONR9R10, NR9R10, NHCOR9, NHCOOR9 u OR9,

R8 significa cicloalquilo con 3-7 átomos de C, cicloalquilalquileno con 4-10 átomos de C, Alk o alquilo no ramificado o ramificado, con 1-6 átomos de C, donde uno, dos o tres grupos CH2 pueden estar reemplazados por O, S, SO, SO2, NH y/o 1-5 átomos de H también pueden estar reemplazados por F y/o Cl,

R9, R10 significan respectivamente, independientemente entre sí, H o alquilo con 1-5 átomos de C, donde 1-3 grupos CH2 pueden estar reemplazados por O, S, SO, SO2, NH, NMe o NEt y/o 1-5 átomos de H pueden estar reemplazados por F y/o Cl,

R9 y R10 también significan juntos una cadena de alquileno con 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de C, donde un grupo CH2 pueden estar reemplazados por O, S, SO, SO2, NH, NR8, NCOR8 o NCOOR8,

Ar significa fenilo, naftilo o bifenilo no sustituidos o mono, bi- o trisustituidos por Hal, A, XR7, Y, CN, fenilo, OA, OXR7, S (O) mA, S (O) mXR7, NO2, NH2, NR9R10, NR8R9, CONR9R10, CONR8R9, SO2NR9R10, SO2NR8R9, NR9COR10, NR9CONR9R10 y/o NR9SO2R10,

Het significa un heterociclo mono- o bicíclico, saturado, insaturado o aromático con 1 a 4 átomos de N, O y/o S, el cual puede estar no sustituido o mono, bi- o trisustituido por Hal, A, XR7, Y, CN, Ar, OA, OXR7, S (O) mA, S (O) mXR7, NO2, NH2, NR9R10, NR8R9, CONR9R10, CONR8R9, SO2NR9R10, SO2NR8R9, NR9COR10, NR9CONR9R10, NR9SO2R10, =S, =NR11, =NR11R7 y/o =O (oxígeno de carbonilo) ,

Het’ significa un heterociclo mono- o bicíclico, saturado, insaturado o aromático con 1 a 4 átomos de N, O y/o S, el cual puede estar no sustituido o mono, bi- o trisustituido por Hal, A, XR7, XR4, Y, CN, Ar, Het, OA, OXR7, OXR4, S (O) mA, S (O) mXR7, S (O) mXR4, NO2, NH2, NR9R10, NR8R9, CONR9R10, CONR8R9, SO2NR9R10, SO2NR8R9, NR9COR10, NR9CONR9R10, NR9SO2R10, =S, =NR11, =NR11R7 y/o =O (oxígeno de carbonilo) , y/o donde un nitrógeno de anillo puede estar sustituido por -O,

X significa alquileno no ramificado o ramificado, con 1-10 átomos de C, donde uno, dos o tres grupos CH2 pueden estar reemplazados por O, S, SO, SO2, NH, NR8 y/o por grupos -CH=CH y/o 1-5 átomos de H pueden estar reemplazados por F, Cl, Br y/o R7,

R11 significa H o A,

Hal significa F, Cl, Br o I,

m significa 0, 1 o 2,

n significa 0, 1, 2, 3 o 4,

o significa 1, 2 o 3,

así como sus sales, solvatos, y estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas las proporciones.

2. Compuestos según la reivindicación 1 de la fórmula I, donde R1 significa OH u OCH3, así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas

las proporciones.

3. Compuestos según la reivindicación 1 o 2, donde R3 significa H, así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas

las proporciones.

4. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-3, donde R2 significa CONA[ (CH2) oAr] o CONA[ (CH2) oHet’], en cuyo caso A significa alquilo con 1, 2, 3 o 4 átomos de C, así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas

las proporciones.

5. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-4, donde R2 significa CON (CH3) CH2Ar o CON (CH3) CH2Het’, así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas

las proporciones.

6. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-5, donde

R4, R5, R6 significan respectivamente, independientemente entre sí, H, Hal, CN, A, O (CH2) oHet’, O (CH2) oCN, (CH2) oNH2, (CH2) oNHA o (CH2) oNAA’,

así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas las proporciones.

7. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-6, donde R4, R5 significan H,

R6 significa H, Hal, CN, A, O (CH2) oHet’, O (CH2) oCN, (CH2) oNH2, (CH2) oNHA o (CH2) oNAA’,

así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas las proporciones.

8. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-7, donde X significa alquileno con 1-6 átomos de C, donde uno, dos o tres grupos CH2 pueden estar reemplazado por O, NH, y/o 1-5 átomos de H pueden estar reemplazados por F y/o Cl,

así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas las proporciones.

9. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-8, donde X significa alquileno con 1, 2, 3 o 4 átomos de C, donde un grupo CH2 puede estar reemplazado por O o NH,

así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas las proporciones.

10. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-9, donde Ar significa fenilo no sustituido o mono, bi- o trisustituido por Hal, A, XR7, fenilo, S (O) mA, OA, OXR7 y/o CONR9R10,

así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas las proporciones.

11. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-10, donde Het’ significa un heterociclo mono- o bicíclico, saturado, insaturado o aromático, con 1 a 3 átomos de N, O y/o S, el cual puede estar no sustituido o mono, bi- o trisustituido por A, Hal, OH y/o OA y/o donde un nitrógeno de anillo puede estar sustituido por -O- ,

así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas las proporciones.

12. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-11, donde Het’ significa piridilo, N-oxipiridilo, furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, isoxazolilo, imidazolilo, pirimidinilo, pirazolilo, tiazolilo, pirazinilo, piridazinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, benzodioxanilo, benzodioxolilo, indolilo, quinolinilo, bencimidazolilo, benzotiadiazolilo o indazolilo no sustituidos o mono, bi- o trisustituidos por A, Hal, OH y/o OA,

así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas las proporciones.

13. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-12, donde A significa alquilo no ramificado o ramificado, con 1-6 átomos de C, donde uno, dos o tres grupos CH2 pueden estar reemplazados por O, S, SO, SO2, NH y/o por grupos -CH=CH y/o 1-5 átomos de H puede estar reemplazados por F, Cl y/o Br; Alk o alquilo cíclico con 3-7 átomos de C,

así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas las proporciones.

14. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-13, donde R9, R10 significan respectivamente, independientemente entre sí, H o alquilo con 1-5 átomos de C, donde 1-5 átomos de H pueden estar reemplazados por F y/o Cl,

así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas las proporciones.

15. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-14, donde A significa alquilo no ramificado o ramificado, con 1-6 átomos de C, donde 1-5 átomos de H pueden estar reemplazados por F, Cl y/o Br, o alquilo cíclico con 3-7 átomos de C,

así como sus sales, solvatos, y tautómeros estereoisómeros de utilidad farmacéutica, incluidas sus mezclas en todas las proporciones.

16. Compuestos según una o varias de las reivindicaciones 1-15, donde R1 significa OH u OCH3, R2 significa CONA[ (CH2) oAr] o CONA