Procedimientos para tratar cánceres que expresan el factor de crecimiento endotelial vascular D.

Un procedimiento para cribar una enfermedad neoplásica seleccionada entre carcinoma ductal de mama,

carcinoma de células escamosas, cáncer de próstata y cáncer de endometrio, que comprende:

i) exponer una muestra de tejido obtenida de un organismo del que se sospecha que está en dicho estado de enfermedad neoplásica a una composición que comprende un anticuerpo monoclonal que se une específicamente al dominio de homología de VEGF de VEGF-D;

ii) lavar dicha muestra de tejido; y

iii) cribar dicha enfermedad detectando la presencia, cantidad o distribución de dicho anticuerpo monoclonal en dicha muestra de tejido, en la que la detección de VEGF-D en o sobre las células endoteliales de los vasos sanguíneos o las células endoteliales linfáticas en o alrededor de un crecimiento neoplásico potencial indica la enfermedad neoplásica.

Procedimientos para tratar cánceres que expresan el factor de crecimiento endotelial vascular D

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere en general a un procedimiento de cribado de enfermedades neoplásicas seleccionadas entre carcinoma ductal de mama, carcinoma de células escamosas, cáncer de próstata o cáncer del endometrio.

Los dos componentes principales del sistema vascular de los mamíferos son las células endoteliales y las células musculares lisas. Las células endoteliales forman el recubrimiento de la superficie interna de todos los vasos sanguíneos y linfáticos del mamífero. La formación de nuevos vasos sanguíneos se puede producir mediante dos procesos diferentes, vasculogénesis y angiogénesis (véase la revisión de Risau, W., Nature 386: 671-674, 1997) . La vasculogénesis se caracteriza por la diferenciación in situ de precursores de células endoteliales a células endoteliales maduras y por la asociación de estas células para formar vasos, como ocurre en la formación del plexo vascular primario en las primeras fases del desarrollo embrionario. Por el contrario, la angiogénesis, la formación de vasos sanguíneos mediante crecimiento y ramificación de vasos preexistentes, es importante en las fases posteriores de la embriogénesis y es responsable del crecimiento de los vasos sanguíneos que se produce en el adulto. La angiogénesis es un proceso fisiológicamente complejo que supone la proliferación de las células endoteliales, la degradación de la matriz extracelular, la ramificación de los vasos y los posteriores episodios de adhesión celular. En el adulto la angiogénesis está muy controlada, y en condiciones normales está limitada al sistema reproductor femenino. Sin embargo, se puede activar la angiogénesis en respuesta a la lesión tisular. De manera importante, los tumores sólidos son capaces de inducir angiogénesis en el tejido circundante, promoviendo de esta manera el crecimiento tumoral y facilitando la formación de metástasis (Folkman J, Nature Med., 1: 27-31, 1995) . Se está muy lejos de comprender los mecanismos moleculares subyacentes a los complejos procesos de angiogénesis.

La angiogénesis también participa en diversas situaciones patológicas, en las que tiene una función o participa directamente en diferentes secuelas de la enfermedad. Algunos ejemplos incluyen la neovascularización que se asocia a diversas enfermedades hepáticas, las secuelas neovasculares de la diabetes, las secuelas neovasculares de la hipertensión, la neovascularización después de un traumatismo, la neovascularización debida a un traumatismo craneal, la neovascularización en las infecciones hepáticas crónicas (por ejemplo, hepatitis crónica) , la neovascularización debida a un traumatismo por calor o por frío, la disfunción relacionada con el exceso de hormonas, la producción de hemangiomas y la reestenosis después de la angioplastia.

Debido a la función crucial de la angiogénesis en tantos procesos fisiológicos y patológicos, se han investigado de manera intensiva los factores que participan en el control de la angiogénesis. Se ha mostrado que varios factores de crecimiento participan en la regulación de la angiogénesis; estos incluyen los factores de crecimiento de fibroblastos (FGF) , el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDFG) , el factor de transformación del crecimiento alfa (TGFa) y el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) . Véase, por ejemplo, una revisión en Folkman y col., J. Biol. Chem., 267: 10.931-10.934, 1972.

Se ha propuesto que una familia particular de factores de crecimiento específicos de células endoteliales, los factores de crecimiento endotelial vascular (VEGF) , y sus correspondientes receptores, es el principal responsable de la estimulación del crecimiento y de la diferenciación de las células endoteliales, y de algunas funciones de las células diferenciadas. Estos factores son miembros de la familia PDFG/VEGF, y parecen actuar principalmente a través de las tirosina cinasas del receptor endotelial (RTK) . La familia PDFG/VEGF de factores de crecimiento pertenece a la superfamilia de factores de crecimiento unida a la cistina, que también incluye las neurotrofinas y el factor-1 de crecimiento transformante.

Se han identificado ocho proteínas diferentes en la familia PDFG/VEGF, que son dos PDFG (A y B) , VEGF y cinco miembros que están muy relacionados con VEGF. Los cinco miembros que están muy relacionados con VEGF son: VEGF-B, descrito en la Solicitud de Patente Internacional WO 96/26736 y en las Patentes de Estados Unidos 5.840.693 y 5.607.918 del Ludwig Institute for Cancer Research y la Universidad de Helsinki; VEGF-C o VEGF 2, descrito en Joukov y col., EMBO J, 15: 290-298, 1996; Lee y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 1988-1992, 1996, y en las Patentes de Estados Unidos 5.932.540 y 5.935.540 de Human Genome Sciences, Inc.; VEGF-D, descrito en la Solicitud de Patente Internacional WO 98/07832 y en Achen y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95: 548-553, 1998; el factor de crecimiento placentario (PIGF) , descrito en Maglione y col., Proc Natl Acad Sci USA, 88: 9267-9271, 1991; y VEGF3, descrito en la Solicitud de Patente Internacional WO 96/39421 por Human Genome Sciences, Inc. Cada miembro de la familia VEGF tiene una identidad de la secuencia de aminoácidos entre el 30% y el 45% con VEGF. Los miembros de la familia VEGF comparten un dominio de homología con VEGF que contiene los seis residuos de cisteína del motivo de nudo de cistina. Las características funcionales de la familia VEGF incluyen grados variables de mitogenia para las células endoteliales, inducción de la permeabilidad vascular, y propiedades angiogénicas y linfangiogénicas.

El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) es una glucoproteína homodimérica que se ha aislado a partir de diferentes fuentes. La división alternativa del ARNm de un solo gen de VEGF da lugar a 5 isoformas de VEGF. VEGF muestra una actividad mitógena muy específica para las células endoteliales. VEGF tiene funciones reguladoras importantes en la formación de nuevos vasos sanguíneos en la vasculogénesis embrionaria y en la angiogénesis durante la vida adulta (Carmeliet y col. Nature, 380: 435-439, 1996; Ferrara y col., Nature, 380: 439-442, 1996; revisado en Ferrara y Davis-Smyth, Endocrine Rev., 18: 4-25, 1997) . Se ha mostrado el significado de la función de VEGF en estudios que muestran que la inactivación de un solo alelo de VEGF produce la muerte del embrión debido a una alteración del desarrollo de la vasculatura (Carmeliet y col. Nature, 380: 435-439, 1996; Ferrara y col., Nature, 380: 439442, 1996) . Se han revisado el aislamiento y las propiedades de VEGF; véase Ferrara y col., J. Cellular Biochem., 47: 211-218, 1991 y Connolly, J. Cellular Biochem., 47: 219-223, 1991.

Además, VEGF tiene una actividad quimioatrayente intensa hacia los monocitos, puede inducir el activador del plasminógeno y el inhibidor del activador del plasminógeno en las células endoteliales, y también puede inducir la permeabilidad microvascular. Debido a esta última actividad, a veces se denomina factor de permeabilidad vascular (VPG) . VEGF también es quimioatrayente para algunas células hematopoyéticas. La bibliografía reciente indica que VEGF bloquea la maduración de las células dendríticas y de esta manera reduce la eficacia de la respuesta inmunitaria a los tumores (muchos tumores secretan VEGF) (Gabrilovich y col., Blood, 92: 4150-4166, 1998; Gabrilovich y col., Clinical Cancer Research, 5: 2963-2970, 1999) .

VEGF-B tiene unas propiedades angiogénicas y de otro tipo similares a las de VEGF, aunque se distribuye y se expresa en los tejidos de manera diferente a VEGF. En particular, VEGF-B se expresa de manera muy intensa en el corazón, y sólo débilmente en el pulmón, mientras que ocurre lo contrario para VEGF. Esto indica que VEGF y VEGF-B, a pesar del hecho de que se coexpresan en muchos tejidos, pueden tener diferencias funcionales.

VEGF-B se aisló usando una técnica de cribado de trampa de interacción con cohíbridos en levaduras haciendo el cribado de proteínas celulares que podrían interactuar con la proteína celular de unión de ácido retinoico de tipo I (CRABP-I) . Su aislamiento y sus características se describen en detalle en el documento WO 96/26736, en las Patentes de Estados Unidos 5.840.693 y 5.607.918 del Ludwig Institute for Cancer Research y la Universidad de Helsinki, y en Olofsson, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 2576-2581, 1996.

VEGF-C se aisló de medios acondicionados de la línea celular del adenocarcinoma de próstata PC-3 (CRL1435) mediante... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para cribar una enfermedad neoplásica seleccionada entre carcinoma ductal de mama, carcinoma de células escamosas, cáncer de próstata y cáncer de endometrio, que comprende:

i) exponer una muestra de tejido obtenida de un organismo del que se sospecha que está en dicho estado de enfermedad neoplásica a una composición que comprende un anticuerpo monoclonal que se une específicamente al dominio de homología de VEGF de VEGF-D;

ii) lavar dicha muestra de tejido; y iii) cribar dicha enfermedad detectando la presencia, cantidad o distribución de dicho anticuerpo monoclonal en dicha muestra de tejido, en la que la detección de VEGF-D en o sobre las células endoteliales de los vasos sanguíneos o las células endoteliales linfáticas en o alrededor de un crecimiento neoplásico potencial indica la enfermedad neoplásica.

2. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que las células de la etapa (iii) son células endoteliales de vasos sanguíneos.

3. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que comprende adicionalmente exponer la muestra de tejido a un segundo compuesto que se une específicamente a al menos uno de VEGFR-2 y VEGFR-3, y en el que la etapa de cribado comprende la detección del anticuerpo monoclonal que se une al dominio de homología de VEGF de VEGF-D y el segundo compuesto unido a células endoteliales vasculares de los vasos sanguíneos, para determinar la presencia, cantidad o distribución de las células endoteliales de los vasos sanguíneos que tienen tanto VEGF-D como al menos uno de VEGFR-2 y VEGFR-3 en o alrededor de un crecimiento neoplásico potencial.

4. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que las células de la etapa (iii) son células endoteliales de los vasos linfáticos.

5. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende adicionalmente exponer la muestra de tejido a un segundo compuesto que se une específicamente a VEGFR-3, y en el que la etapa de cribado comprende la detección del anticuerpo monoclonal que se une al dominio de homología de VEGF de VEGF-D y el segundo compuesto unido a células endoteliales de los vasos linfáticos,

para determinar la presencia, cantidad o distribución de las células endoteliales de los vasos linfáticos que tienen tanto VEGF-D como VEGFR-3 en o alrededor de un crecimiento neoplásico potencial.

6. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la muestra de tejido aislada de la etapa (i) es una muestra de tumor y el riesgo de metástasis de la muestra de tumor se determinar en la etapa (iii) .

7. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que se detecta micro-metástasis de la enfermedad neoplásica y en el que la muestra de tejido aislada de la etapa (i) se obtiene de un sitio separado de un crecimiento neoplásico del organismo.

8. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7, en el que dicha muestra de tejido es un ganglio linfático del tejido que rodea dicho crecimiento neoplásico.

9. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que dicho anticuerpo monoclonal incluye un marcador detectable.

10. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que dicha muestra de tejido es una muestra tejido humano.