POLIETILENGLICOL RAMIFICADO PARA UNIR RESIDUOS POLIMÉRICOS A ANTICUERPOS.

Un compuesto de fórmula (III): P1 y P2 representan independientemente un residuo de polietilenglicol (PEG);

X1, X2 y X3 representan independientemente CR1 o N; A1 y A2 representan independientemente -CONH-, o -NHCO-, 25 B1, B2 y B3 representan independientemente -CONH- o -CO-; V1, V2 y V3 representan independientemente un enlace covalente o -(CH2)v-; W1 y W2 representan independientemente un enlace covalente o -(CH2)w-; Y1, Y2 e Y3 representan independientemente -(CH2)y-; M1 y M2 representan independientemente un enlace covalente o -(CH2)m-; R1 representa hidrógeno o C1-4 alquilo; n es cero, 1 o 2; v es 1, 2, 3 o 4; w es 1, 2, 3 o 4; y es 1, 2, 3, 4, 5 o 6; y 35 m es 1, 2 o 3

Polietilenglicol ramificado para unir residuos poliméricos a anticuerpos La presente solicitud se refiere a andamios moleculares ramificados que son capaces de unir dos residuos poliméricos (polietilenglicoles) a dos, tres o cuatro residuos derivados de moléculas biológicamente activas. También se proporcionan métodos para la producción de dichas moléculas y composiciones farmacéuticas que las contienen.

El polímero hidrófilo polietilenglicol (PEG) ha sido unido covalentemente a moléculas biológicamente activas por diversas razones, por ejemplo, para aumentar la solubilidad en agua (Greenwald et al., J. Org. Chem., 1995, 60, 331-336) , para extender la semivida en la circulación y para reducir la inmunogenicidad (Chapman, Advanced Drug Deliver y Reviews, 2002, 54, 531-545) . En general, la unión en un sitio específico de las moléculas de PEG es preferible a la unión al azar, que puede afectar adversamente la actividad biológica de la molécula.

Para unir un peso molecular suficientemente alto de PEG a la molécula biológicamente activa, se han utilizado moléculas de PEG ramificadas en lugar de cadenas lineales de polímeros de muy alto peso molecular que pueden ser muy difíciles de preparar, así como costosas.

Por diversas razones, se considera ventajoso unir más de una molécula biológicamente activa a un único andamio de PEG ramificado. En esos casos, por ejemplo, se puede observar un importante aumento en la potencia.

Se describen polímeros de PEG ramificados que contienen un único sitio para la unión de una o más moléculas biológicamente activas, por ejemplo, en las patentes US 6, 362, 254 y 5, 932, 462.

La patente US 6, 251, 382 proporciona un andamio ramificado que contiene, entre otras cosas, varios sitios diferentes para la unión de al menos dos cadenas poliméricas y al menos dos moléculas biológicamente activas. Las moléculas descritas en ese documento se afirma que son conjugados a base de polímeros, biodegradables, que tienen la fórmula siguiente:

(D) n-M- (R1) m

donde (m) y (n) representan independientemente números enteros positivos, preferentemente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 cada uno; D es un residuo de una porción biológicamente activa; M es una porción de unión o espaciadora multifuncional; y R1 es un residuo polimérico.

La presente solicitud da a conocer andamios moleculares ramificados que son capaces de unir dos residuos poliméricos (derivados, por ejemplo, de PEG) a dos, tres o cuatro residuos derivados de moléculas biológicamente activas, uniéndose las últimas al andamio mediante uniones hidrolíticamente estables.

Por lo tanto, la presente solicitud da a conocer un compuesto de fórmula (I) :

(I)

(I)

donde P1 y P2 representan independientemente un residuo de polietilenglicol (PEG) ; Z1, Z2 y Z3 representan independientemente el residuo de una porción biológicamente activa; X1, X2 y X3 representan independientemente CR1 o N; A1 y A2 representan independientemente -CONH-, o -NHCO-, B1, B2 y B3 representan independientemente -CONH- o -CO-; V1 y V2 representan independientemente un enlace covalente o - (CH2) v-; W1 y W2 representan independientemente un enlace covalente o - (CH2) w-; Y1, Y2 e Y3 representan independientemente - (CH2) y-; L1, L2 y L3 representan independientemente un grupo espaciador;

M1 y M2 representan independientemente un enlace covalente o - (CH2) m-;

R1 representa hidrógeno o C1-4 alquilo;

R2 representa hidrógeno o C1-4 alquilo;

n es cero, 1 o 2;

v es 1, 2, 3 o 4;

wes 1, 2, 3 o 4;

y es 1, 2, 3, 4, 5 o 6; y m es 1, 2 o 3.

Los compuestos de fórmula (I) no forman parte de la presente invención.

La presente solicitud cae dentro del área de competencia genérica más amplia de la patente US 6, 251, 382. Sin embargo, no hay en ese documento una divulgación específica de un compuesto que caiga dentro del ámbito de cobertura de la fórmula (I) indicada antes.

Según se usa en este documento, el término “C1-4 alquilo” se refiere a grupos alquilo de cadena lineal y ramificada que contienen de 1 a 4 átomos de carbono. Dichos grupos son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo y tert-butilo.

Según se usa en este documento, se entenderá que el término "residuo" indica la parte de un polímero o de una porción biológicamente activa que permanece después de haber sido sometida a una reacción de sustitución, terminología que es familiar a los expertos.

Los residuos poliméricos P1 y P2 en los compuestos de la fórmula (I) anterior son residuos de polietilenglicoles (PEG) . Con respecto a las porciones PEG de unión en general, se hace referencia a “Poly (ethyleneglycol) Chemistr y , Biotechnical and Biomedical Applications”, 1992, J. Milton Harris (ed) , Plenum Press, Nueva York; “Poly (ethyleneglycol) Chemistr y and Biological Applications”, 1997, J. Milton Harris and S. Zalipsky (eds) , American Chemical Society, Washington D.C.; y “Bioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciences”, 1998, M. Aslam y A. Dent, Grove Publishers, Nueva York. Las moléculas de PEG particulares incluyen metoxi-PEGamina de 20 K (comercializada por Nektar, antes Shearwater; Rapp Polymere; y SunBio) y M-PEG-SPA (comercializada por Nektar, antes Shearwater) .

Adecuadamente, P1 y P2 son idénticos.

En los compuestos de la fórmula (I) anterior, los residuos Z1, Z2 y Z3 serán adecuadamente residuos de las entidades a las que se hace referencia, por ejemplo, en US 6, 251, 382 B1, con particular referencia al pasaje que va de la columna 18, línea 15 a la columna 22, línea 67, cuyo contenido se incorpora en este documento para referencia. Las porciones biológicamente activas típicas de las cuales Z1, Z2 y Z3 son residuos, incluyen anticuerpos y fragmentos de anticuerpos como a los que se alude en US 6, 251, 382 B1, columna 22, líneas 14-22.

Por lo tanto, los residuos Z1, Z2 y Z3 incluyen anticuerpos enteros y fragmentos funcionalmente activos, o sus derivados, y pueden ser, pero no exclusivamente, anticuerpos policlonales, monoclonales, multivalentes, multiespecíficos, humanizados o quiméricos, anticuerpos monocatenarios, fragmentos Fab, fragmentos Fab' y F (ab') 2 y fragmentos de unión a epítopos de cualquiera de los anteriores.

Los anticuerpos incluyen moléculas de inmunoglobulina y porciones inmunológicamente activas de las moléculas de inmunoglobulina, es decir, moléculas que contienen un sitio de unión al antígeno que se une específicamente a un antígeno. Las moléculas de inmunoglobulina de la invención pueden ser de cualquier clase (por ej., IgG, IgE, IgM, IgD o IgA) o subclase de moléculas de inmunoglobulina.

Los anticuerpos monoclonales se pueden preparar por cualquier método conocido en el área como la técnica de hibridoma (Kohler y Milstein, Nature, 1975, 256, 495-497) , la técnica de trioma, la técnica de hibridoma de células B humanas (Kozbor et al., Immunology Today, 1983. 4, 72) y la técnica de EBV-hibridoma (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, pp 77-96, Alan R Liss Inc., 1985) .

Los anticuerpos para usar en la invención también se pueden generar usando métodos del anticuerpo de linfocito único mediante clonación y expresión de los ADNc de la región variable de la inmunoglobulina, generados a partir de linfocitos únicos seleccionados para la producción de anticuerpos específicos mediante, por ejemplo, los métodos descritos por Babcook, J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996, 93 (15) :7843-7848; y en WO92/02551.

Los anticuerpos humanizados son moléculas de anticuerpo de especies no humanas que tienen una o más regiones determinantes de complementariedad (CDR) de las especies no humanas y una región de armazón de una molécula de inmunoglobulina humana (véase por ejemplo US 5, 585, 089) .

Los anticuerpos quiméricos son los anticuerpos codificados por genes de inmunoglobulinas que fueron diseñados genéticamente para que los genes de las cadenas ligera y pesada estén compuestos por segmentos de genes de inmunoglobulinas pertenecientes a diferentes especies. Es probable que esos anticuerpos quiméricos sean menos antigénicos. Los anticuerpos bivalentes se pueden preparar por métodos conocidos en el área (Milstein et al.,... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de fórmula (III) :

P1 y P2 representan independientemente un residuo de polietilenglicol (PEG) ; X1, X2 y X3 representan independientemente CR1 o N; A1 y A2 representan independientemente -CONH-, o -NHCO-, B1, B2 y B3 representan independientemente -CONH- o -CO-; V1, V2 y V3 representan independientemente un enlace covalente o - (CH2) v-; W1 y W2 representan independientemente un enlace covalente o - (CH2) w-; Y1, Y2 e Y3 representan independientemente - (CH2) y-; M1 y M2 representan independientemente un enlace covalente o - (CH2) m-; R1 representa hidrógeno o C1-4 alquilo; n es cero, 1 o 2; v es 1, 2, 3 o 4; wes 1, 2, 3 o 4; y es 1, 2, 3, 4, 5 o 6; y m es 1, 2 o 3.

2. Un compuesto como el reivindicado en la reivindicación 1 donde R1 es hidrógeno.

3. Un compuesto como el reivindicado en la reivindicación 1 o la reivindicación 2 donde n es cero.

4. Un compuesto de fórmula (III) como el reivindicado en la reivindicación 1 seleccionado entre los siguientes:

N, N'-bis-[4-maleimidilbutil]-2, 3-bis- (3- (metoxi-polietoxi) -propionilamino) -succinamida: 3-maleimidil-N- (2-{[3-maleimidil-propionil]-[ (2- (metoxi-polietoxi) -etilcarbamoil) -metil]-amino}-etil) -N-[ (2- (metoxipolietoxi) -etilcarbamoil) -metil]-propionamida; y 3-maleimidil-N- (2-{[3- (maleimidil) -propionil]-[2- (2- (metoxi-polietoxi) -etilcarbamoil) -etil]-amino}-etil) -N-