Un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que exhibe por lo menos 85% de identidad de secuencia en una longitud de por lo menos aproximadamente 12 aminoácidos con la SEQ ID NO: 2.

Antígenos de superficie de células de mamíferos; reactivos relacionados.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a las realizaciones caracterizadas en las reivindicaciones. Por tanto se refiere a proteínas que funcionan en el control de la activación y expansión de células de mamíferos, por ejemplo células del sistema inmunitario de mamíferos. En particular, proporciona genes, proteínas, anticuerpos y reactivos relacionados purificados, útiles por ejemplo, para regular la activación, el desarrollo, la diferenciación y la función de diversos tipos de células que incluyen las células hematopoyéticas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La activación de los linfocitos T en reposo es crítica para la mayoría de las respuestas inmunitarias y permite a estas células ejercer sus capacidades reguladoras o efectoras. Véase Paul (ed; 1993) Fundamental Immunology 3rd. ed., Raven Press, N.Y. El aumento de la adhesión entre los linfocitos T y las células presentadoras de antígenos (denominadas en lo sucesivo abreviadamente APC por la expresión inglesa Antigen Presenting Cells) u otras formas de estímulos primarios, por ejemplo anticuerpos monoclonales (mAb) inmovilizados, puede potenciar las señales de los receptores de los linfocitos T. La activación de los linfocitos T y la expansión de los linfocitos T, depende del acoplamiento de los receptores de los linfocitos T (abreviadamente en lo sucesivo TCR por la expresión inglesa T-Cell Receptors) y señales co-estimuladoras provistas por células accesorias. Véase, por ejemplo, Jenkins and Johnson (1993) Curr. Opin. Immunol. 5:361-367; Bierer and Hahn (1993) Semin. Inmunol. 5:249-261; June et al. (1990) Immunol. Today 11:211-216; y Jenkins (1994) Immunity 1:443-446. Una interacción co-estimulatoria principal y bien estudiada para los linfocitos T implica CD28 o CTLA-4 sobre los linfocitos T con B7 o con B70 (Jenkins (1994) Immunity 1:443-446) . Estudios recientes sobre ratones deficientes en CD28 (Shahinian et al. (1993) Science 81:609612; Green et al. (1994) Immunity 1:501-508 y ratones transgénicos que expresan la inmunoglobulina CTLA-4 (Ronchese et al. (1994) J. Exp. Med. 179:809-817) han revelado deficiencias en algunas respuestas de los linfocitos T, aunque estos ratones tiene respuestas inmunitarias primarias normales y respuestas de CTL normales al virus de la coriomeningitis linfocítica y al virus de la estomatitis vesicular. Como resultado, ambos estudios llegan a la conclusión que otras moléculas co-estimuladoras deben estar apoyando la función de los linfocitos T. Sin embargo, ha sido difícil la identificación de estas moléculas que median distintas señales co-estimuladoras.

El factor de necrosis tumoral (abreviadamente en lo sucesivo TNF por sus iniciales en inglés Tumoral Necrosis Factor) es el miembro prototípico de una familia emergente de citoquinas que funcionan como mediadores prominentes de la regulación inmunitaria y la respuesta inflamatoria. Estos ligandos son típicamente proteínas de membrana del tipo II, con homología en el extremo carboxilo. Se produce frecuentemente una proteína soluble procesada proteolíticamente. Véase, por ejemplo, Smith et al. (1994) Cell 76:959-962; Armitage (1994) Current Opinion in Immunology 6:407-413; Gruss and Dower (1995) Blood 85:3378-3404; Wiley et al. (1995) Immunity 3:873682) y Baker and Reddy (1996) Oncogene 12:1-9. Las funciones cruciales de estos miembros de la familia son puestas de manifiesto por diversos estudios, y están implicados en la regulación de la apoptosis, la tolerancia periférica, la maduración de Ig y la conmutación de isotipos, y las funciones generales de los linfocitos B y los linfocitos T. Véase, por ejemplo, Thomson (ed. 1994) The Cytokine Handbook, Academic Press, San Diego, CA. Esto implica funciones fundamentales en los retículos inmunitarios y de desarrollo.

La incapacidad pare modular las señales de activación evita el control de respuestas de desarrollo o fisiológicas inapropiadas en el sistema inmunitario. La presente invención proporciona por lo menos una molécula coestimuladora alternativa, cuyos agonistas y antagonistas serán útiles en modular un gran número de respuestas inmunitarias.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención está basada en parte, en el descubrimiento de un antígeno que exhibe homología de secuencia con proteínas que actúan como inductores de la apoptosis. En particular, proporciona un gen que codifica una proteína de 316 aminoácidos, denominada 499E9, que es expresada en linfocitos T del tipo Th1 altamente polarizados. El acoplamiento de 499E9 puede modular la proliferación específica de antígenos y la producción de citoquinas por células efectoras. La 499E9 es una nueva molécula de la superficie celular, que cuando se acopla puede potenciar la expansión de células del sistema inmunitario o la apoptosis. Se describe la realización de ratón que facilita la obtención de genes, proteínas y anticuerpos de mamíferos y sus usos. Están disponibles equivalentes funcionales que presentan al menos 80% de identidad de secuencia con otros mamíferos, por ejemplo, ser humano y especies que no son mamíferos. Además el receptor de 499E9 puede funcionar como pareja (o socio) de unión para estimular otras células que expresan el receptor.

Más particularmente la presente invención proporciona un polipéptido de 499E9 sustancialmente puro o recombinante que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; un polipéptido de la familia de ligandos del TNF que tiene una secuencia de aminoácidos al menos 80% idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; o una proteína de fusión que comprende dichos polipéptidos. Otras realizaciones incluyen una composición, en donde la 499E9 comprende una secuencia madura de la Tabla 1; o una proteína o péptido: es de un animal de sangre caliente seleccionado de un mamífero, incluyendo un roedor; comprende al menos un segmento polipeptídico de SEQ ID NO: 2; exhibe una pluralidad de porciones que exhiben la identidad; es una variante alélica natural de 499E9; está glicosilado; es un polipéptido sintético; se une a un sustrato sólido; se conjuga con otro resto químico; tiene un sustitución de 5 veces o menos respecto a la secuencia natural; o es una variante de inserción o deleción de una secuencia natural. También se proporcionan varias composiciones, por ejemplo, que comprenden: una proteína 499E9 estéril o la proteína 499E9 y un vehículo, en donde el vehículo es: un compuesto acuoso que incluye agua, solución salina y/o tampón; y/o formulado para administración oral, rectal, nasal, tópica o parenteral. Se proporcionan proteínas de fusión, por ejemplo, que comprenden: la secuencia de proteína madura de la Tabla 1; una cola (o marbete) o marcador de detección o purificación que incluye una secuencia FLAG, His6 o Ig; o secuencia de otra proteína TNF-ligando. Se proporcionan realizaciones de kits, por ejemplo, que comprende dicha proteína o polipéptido, y: un compartimento que comprende la proteína o polipéptido y/o instrucciones para uso o desecho de los reactivos del kit.

La invención se refiere también a un anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno que específicamente se une a un polipéptido sustancialmente puro o recombinante seleccionado del grupo que consiste en: (a) el polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 y un polipéptido de la familia de ligandos del TNF que consiste en una secuencias de aminoácidos al menos 80% idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:

2. El compuesto de unión es un fragmento Fv, Fab o Fab2; el compuesto de unión se conjuga con otro reto químico;

o el anticuerpo: es producido contra una secuencia peptídica de un polipéptido maduro que comprende la secuencia de la Tabla 1; es producido contra una secuencia 499E9 madura; es producido contra 499E9 purificada: es inmunoseleccionado; es un anticuerpo policlonal; se une a una 499E9 desnaturalizada; exhibe una Kd para el antígeno de al menos 30 µM; se une a un sustrato sólido, incluyendo una bolita o membrana de plástico; está en una composición estéril; o se marca detectablemente, incluyendo un marcador radiactivo o fluorescente. Otras realizaciones incluyen un kit que comprende el compuesto de unión, es decir, el anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno, y: un compartimento que comprende el compuesto de unión; y/o instrucciones para el uso o desecho de los reactivos en el kit. Otras formas incluyen, por ejemplo una composición que comprende: un compuesto de unión estéril; o el compuesto de unión es decir, el anticuerpo... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido sustancialmente puro o recombinante seleccionado del grupo que consiste en:

(a) el polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; y

(b) un polipéptido de la familia de ligandos del TNF que tiene una secuencia de aminoácidos al menos 80% idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

2. Una proteína de fusión que comprende el polipéptido de la reivindicación 1.

3. Un ácido nucleico aislado que codifica el polipéptido de la reivindicación 1 o la proteína de fusión de la reivindicación 2.

4. El ácido nucleico aislado de acuerdo con la reivindicación 3

5. El ácido nucleico aislado de acuerdo con la reivindicación 4, que codifica la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 1.

6. Un vector recombinante que comprende el ácido nucleico de una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5..

7. Una célula hospedante que comprende el ácido nucleico de una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5 o el vector de la reivindicación 6.

8. Un método para preparar un polipéptido o una proteína de fusión, que comprende cultivar la célula hospedante de la reivindicación 7 en condiciones en las cuales se expresa el ácido nucleico.

9. Un anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno, que específicamente se une a un polipéptido sustancialmente puro o recombinante seleccionado del grupo que consiste en:

(a) el polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; y

(b) un polipéptido de la familia de ligandos del TNF que consiste en una secuencia de aminoácidos al menos 80% idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

10. Una composición que comprende el polipéptido de la reivindicación 1 o la proteína de fusión de reivindicación

2.

11. Un kit que comprende: a) el polipéptido de la reivindicación 1 o la proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 2; b) el anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno de acuerdo con la reivindicación 9; o c) el ácido nucleico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5.