ANTICUERPOS CONTRA IL-1 BETA HUMANA.

Una molécula de enlazamiento a la IL-1beta que comprende tanto a los dominios variables de cadena liviana (VL) como de cadena pesada (VH) en los cuales dicha molécula de enlazamiento a la IL-1beta contiene al menos un sitio de enlazamiento del antígeno que comprende:

a) un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) que comprende a las regiones hipervariables en secuencia CDR1, CDR2 y CDR3, dicha CDR1 teniendo la secuencia de aminoácidos Val-Tyr-Gly- Met-Asn, dicha CDR2 teniendo la secuencia de aminoácidos Ile-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asp-Asn-Gln-Tyr- Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly, y dicha CDR3 teniendo la secuencia de aminoácidos Asp-Leu-Arg-Thr-Gly- Pro; y

b) un dominio variable de cadena liviana de inmunoglobulina (VL) que comprende a las regiones hipervariables en secuencia CDR1'', CDR2'' y CDR3'', dicha CDR1'' teniendo la secuencia de aminoácidos Arg-Ala-Ser- Gln-Ser-Ile-Gly-Ser-Ser-Leu-His dicha CDR2'' teniendo la secuencia de aminoácidos Ala-Ser-Gln-Ser- Phe-Ser y dicha CDR3'' teniendo la secuencia de aminoácidos His-Gln-Ser-Ser-Ser-Leu-Pro; y los equivalentes directos de los mismos en los cuales las regiones hipervariables CDR1, CDR2, CDR3, CDR1'', CDR2'' y CDR3'' tomadas como un todo son al menos 95% homólogas a las regiones hipervariables bajo a) y b), y tienen una especificidad de enlazamiento por el epítopo antigénico de la IL-1beta que incluye al bucle que incluye al residuo Glu 64 de la IL-1beta madura humana.

Anticuerpos contra la il-1 beta humana

Esta invención se relaciona con anticuerpos de interleuquina I beta humana (IL-1W) Y con el uso de tales anticuerpos para el tratamiento de enfermedades y trastornos mediados por la IL-1.

La interleuquina 1 (IL-1) es una actividad producida por células del sistema inmune que actúa como un mediador de la respuesta inflamatoria en fase aguda. La producción excesiva o inapropiada de la IL-1, en particular de la IL-1W, está asociada con la patología de diferentes enfermedades y trastornos, tales como septicemia, choque séptico o endotóxico, alergias, asma, perdida de masa ósea, isquemia, derrame, artritis reumatoide y otros trastornos inflamatorios. Los anticuerpos para la IL-1W. Los anticuerpos contra la IL-1W han sido propuestos para ser utilizados en el tratamiento de enfermedades y trastornos mediados por la IL-1; ver por ejemplo, WO 95/01997 y la discusión en la introducción de la misma.

Hemos preparado ahora anticuerpos mejorados de la IL-1W humana para uso en el tratamiento de enfermedades y trastornos mediados por la IL-1.

Por lo tanto, la invención provee una molécula de enlazamiento a la IL-1W que comprende un sitio de enlazamiento del antígeno que incluye a) un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) que comprende a las regiones hipervariables en secuencia CDR1, CDR2 y CDR3, dicha CDR1 teniendo la secuencia de aminoácidos Val-Tyr-Gly-Met-Asn, dicha CDR2 teniendo la secuencia de aminoácidos Ile-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asp-Asn-Gln-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly, y dicha CDR3 teniendo la secuencia de aminoácidos Asp-Leu-Arg-Thr-Gly-Pro; y b) un dominio variable de cadena liviana de inmunoglobulina (VL) que comprende a las regiones hipervariables en secuencia CDR1', CDR2' y CDR3', dicha CDR1' teniendo la secuencia de aminoácidos Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Ile-Gly-Ser-Ser-Leu-His dicha CDR2' teniendo la secuencia de aminoácidos Ala-Ser-Gln-Ser-Phe-Ser y dicha CDR3' teniendo la secuencia de aminoácidos His-Gln-Ser-Ser-Ser-Leu-Pro y el equivalente directo de la misma en la cual las regiones hipervariables CDR1, CDR2, CDR3, CDR1', CDR2' y CDR3' tomadas como un todo son al menos 95% homólogas a la hipervariable bajo a) y b) , y tienen una especificidad de enlazamiento por el epítopo antigénico de la IL-1Wque incluye al bucle que incluye al residuo Glu 64 de la IL-1W de 50 pM o menos.

A menos que se indique otra cosa, cualquier cadena de polipéptido es descrita aquí como teniendo una secuencia de aminoácidos que inicia en el extremo N-terminal y termina en el extremo C-terminal. El sitio de enlazamiento del antígeno comprende tanto a los dominios VH como VL; estos pueden estar localizados sobre la misma molécula de polipéptido o, preferiblemente, cada dominio puede estar sobre una cadena diferente, siendo el dominio VH parte de una cadena pesada de inmunoglobulina o fragmento de la misma y el dominio VL parte de una cadena liviana de inmunoglobulina o fragmento de la misma.

Por “molécula de enlazamiento a la IL-1W” se entiende cualquier molécula capaz de enlazarse al antígeno de la IL-1W Ya sea sola o asociada con otras moléculas. La reacción de enlazamiento puede ser mostrada por medio de métodos estándar (ensayos cualitativos) incluyendo, por ejemplo, un bioensayo para determinar la inhibición del enlazamiento a la IL-1W a su receptor o a cualquier clase de ensayos de enlazamiento, con referencia a una prueba de control negativo en la cual se utiliza un anticuerpo de especificidad no relacionada pero del mismo isotipo, por ejemplo, un anticuerpo anti-CD25. Convenientemente, el enlazamiento de las moléculas de enlazamiento a la IL-1W de la onvencoón a la IL-1W puede ser mostrada en un ensayo de enlazamiento competitivo.

Ejemplos de moléculas de enlazamiento del antígeno incluyen anticuerpos como los producidos por las células B o hibridomas y quiméricos, anticuerpos humanos o injertados a la CDR o cualquier fragmento de los mismos, por ejemplo fragmentos F (ab') 2 y Fab, así como anticuerpos de cadena sencilla o de un solo dominio.

Un anticuerpo de cadena sencilla consiste de dominios variables de cadenas liviana y pesada de un anticuerpo covalentemente enlazado por un enlazador peptídico que usualmente consiste desde 10 hasta 30 aminoácidos, preferiblemente desde 15 hasta 25 aminoácidos. Por lo tanto, Tal estructura no incluye la parte constante de las cadenas pesada y liviana y se cree que el espaciador peptídico más pequeño debe ser menos antigénico que una parte constante completa. Por "anticuerpo quimérico" se entiende un anticuerpo en el cual las regiones constantes de cadenas pesada y liviana o ambas son de origen humano mientras que los dominios variables de ambas cadenas pesada y liviana no son de origen humano (por ejemplo, de múrido) o de origen humano pero derivados de un anticuerpo humano diferente. Por "anticuerpo injertado a CDR" se entiende un anticuerpo en el cual las regiones hipervariables (CDR) se derivan de un anticuerpo donante, tal como un anticuerpo no humano (por ejemplo, de múrido)

o un anticuerpo humano diferente, mientras que todas o sustancialmente todas las otras partes de la inmunoglobulina, por ejemplo las regiones constantes y las partes altamente conservadas de los dominios variables, esto es, las regiones marco, se derivan de un anticuerpo aceptor, por ejemplo un anticuerpo de origen humano. Un anticuerpo injertado a CDR puede contener sin embargo unos pocos aminoácidos de la secuencia donadora en las regiones marco, por ejemplo en las partes de las regiones marco adyacentes a las regiones hipervariables. Por "anticuerpo humano" se entiende un anticuerpo en el cual las regiones constante y variable de ambas cadenas pesada y liviana son todas de origen humano, o sustancialmente idénticas a secuencias de origen humano, no necesariamente del mismo anticuerpo e incluyen anticuerpos producidos por ratones en los cuales los genes de la parte constante y variable de la inmunoglobulina de múrido han sido reemplazados por sus contrapartes humanas, por ejemplo como se describe en términos generales en EP 0546073 B1, USP 5545806, USP 5569825, USP 5625126, USP 5633425, USP 5661016, USP 5770429, EP 0 438474 B1 y EP 0 463151 B1.

Las moléculas de enlazamiento a la IL-1W particularmente preferidas de la invención son anticuerpos humanos, especialmente el anticuerpo ACZ 885 como se describe aquí más adelante en los Ejemplos.

Por lo tanto, en anticuerpos quiméricos preferidos los dominios variables tanto de cadenas pesadas como livianas son de origen humano, por ejemplo aquellas del anticuerpo ACZ 885 que son mostradas en la Seq. Id. No. 1 y en la Seq. Id. No. 2. Los dominios de la región constante contienen también preferiblemente dominios adecuados de región constante humana, por ejemplo como se describe en "Sequences of Proteins of Immunological Interest", Kabat E.A. y colaboradores, US Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Institute of Health.

Las regiones hipervariables pueden ser asociadas con cualquier clase de regiones marco, aunque preferiblemente son de origen humano. Las regiones marco adecuadas son descritas en Kabat E.A. y colaboradores, igual que la referencia anterior. El marco de cadena pesada preferido es un marco de cadena pesada humana, por ejemplo aquella del anticuerpo ACZ 885 que se observa en la Seq. Id. No. 1. Consiste de la secuencia de las regiones FR1, FR2, FR3 y FR4. En forma similar, Seq. Id. No. 2 muestra el marco de cadena liviana preferido de ACZ 885 que consiste, en secuencia, de las regiones FR1', FR2', FR3' y FR4'.

Por lo tanto, la invención también provee una molécula de enlazamiento a la IL-1W que contiene al menos un sitio de enlazamiento para el antígeno que comprende ya sea un primer dominio que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a aquella mostrada en la Seq. Id. No. 1 que inicia con el aminoácido en posición 1 y termina con el aminoácido en posición 118 o un primer dominio como se describe más arriba y un segundo dominio que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a aquella mostrada en la Seq. Id. No. 2, que inicia con el aminoácido en posición 1 y termina con el aminoácido en posición 107.

Los anticuerpos monoclonales surgidos contra una proteína encontrada en forma natural en todos los humanos se desarrollan típicamente en un sistema no humano, por ejemplo en ratones, y por lo tanto son proteínas típicamente no humanas. Como consecuencia directa de esto, un anticuerpo xenogénico como el producido por un hibridoma, cuando se lo administra a humanos, provoca una respuesta inmune no deseable que... [Seguir leyendo]

1. Una molécula de enlazamiento a la IL-1W que comprende tanto a los dominios variables de cadena liviana (VL) como de cadena pesada (VH) en los cuales dicha molécula de enlazamiento a la IL-1W contiene al menos un sitio de enlazamiento del antígeno que comprende:

a) un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) que comprende a las regiones hipervariables en secuencia CDR1, CDR2 y CDR3, dicha CDR1 teniendo la secuencia de aminoácidos Val-Tyr-Gly-Met-Asn, dicha CDR2 teniendo la secuencia de aminoácidos Ile-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asp-Asn-Gln-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly, y dicha CDR3 teniendo la secuencia de aminoácidos Asp-Leu-Arg-Thr-Gly-Pro; y b) un dominio variable de cadena liviana de inmunoglobulina (VL) que comprende a las regiones hipervariables en secuencia CDR1', CDR2' y CDR3', dicha CDR1' teniendo la secuencia de aminoácidos Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Ile-Gly-Ser-Ser-Leu-His dicha CDR2' teniendo la secuencia de aminoácidos Ala-Ser-Gln-Ser-Phe-Ser y dicha CDR3' teniendo la secuencia de aminoácidos His-Gln-Ser-Ser-Ser-Leu-Pro;

y los equivalentes directos de los mismos en los cuales las regiones hipervariables CDR1, CDR2, CDR3, CDR1', CDR2' y CDR3' tomadas como un todo son al menos 95% homólogas a las regiones hipervariables bajo a) y b) , y tienen una especificidad de enlazamiento por el epítopo antigénico de la IL-1W ºue oncluYe al bucle ºue oncluYe al residuo Glu 64 de la IL-1W de 50 pM o menos.

2. Una molécula de enlazamiento a la IL-1W de acuerdo con la reivindicación 1 que es un anticuerpo humano.

3. Una molécula de enlazamiento a la IL-1W que contiene al menos un sitio de enlazamiento para el antígeno que comprende un primer dominio que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a aquella mostrada en la Seq. Id. No. 1 que inicia con el aminoácido en posición 1 y termina con el aminoácido en posición 118 y un segundo dominio que tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a aquella mostrada en la Seq. Id. No. 2, que inicia con el aminoácido en posición 1 y termina con el aminoácido en posición 107.

4. Un vector de expresión que incluye ya sea un vector de expresión único o un juego de dos vectores de expresión compatibles, que comprenden:

1) una primera construcción de ADN que codifica una cadena pesada o fragmento de la misma y comprende:

a) una primera parte que codifica a un dominio variable que comprende alternativamente regiones marco e hipervariables, estando dichas regiones hipervariables en secuencia CDR1, CDR2 y CDR3 cuyas secuencias de aminoácidos se muestran en la Seq. Id. No. 1; comenzando esta primera parte con un codón que codifica al primer aminoácido del domino variable y terminando con un codón que codifica al último aminoácido del dominio variable, y b) una segunda parte que codifica a una parte constante de cadena pesada o fragmento de la misma que comienza con un codón que codifica al primer aminoácido de la parte constante de la cadena pesada y termina con un codón que codifica al último aminoácido de la parte constante o fragmento del mismo, seguido por un codón de detención, y 2) una segunda construcción de ADN que codifica una cadena liviana o fragmento de la misma y comprende:

a) una primera parte que codifica a un dominio variable que comprende alternativamente regiones marco e hipervariables, estando dichas regiones hipervariables en secuencia CDR1', y CDR3', cuyas secuencias de aminoácidos se muestran en la Seq. Id. No. 2; esta primera parte comenzando con un codón que codifica al primer aminoácido del domino variable y terminando con un codón que codifica al último aminoácido del dominio variable, y b) una segunda parte que codifica a una parte constante de cadena liviana o fragmento de la misma que comienza con un codón que codifica al primer aminoácido de la parte constante de la cadena liviana y termina con un codón que codifica al último aminoácido de la parte constante o fragmento del mismo, seguido por un codón de detención.

5. Un vector de expresión de acuerdo a la reivindicación 4 que es capaz de replicar en una línea celular procariota o eucariota.

6. Un proceso para la producción de una molécula de enlazamiento a la IL-1W que comprende (i) cultivar un organismo que es transformado con un vector de expresión de acuerdo a la reivindicación 5 y (ii) recuperar la molécula de enlazamiento a la IL-1W del cultivo.

7. El uso de un anticuerpo contra la IL-1W de acuerdo con la reivindicación 2, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediados por la IL-1W.

8. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo contra la IL-1W de acuerdo con la reivindicación 2, en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable, diluyente o portador.