Producción de vectores de expresión y selección de células de alta capacidad de procesamiento.

Un método para producir células que codifican un repertorio de anticuerpos que comprende cadenas pesadas y cadenas ligeras de anticuerpo cognadas,

comprendiendo dicho método:

a) proporcionar una población de células que expresan un repertorio de anticuerpos que comprende cadenas pesadas y cadenas ligeras de anticuerpo cognadas, cuyas células se aíslan de uno o más animales, y que comprende células B, células del centro germinal, células B de memoria, células secretoras de anticuerpos, células plasmáticas o células de plasmablastos;

b) clasificar la población de células mediante la unión de los anticuerpos a un antígeno de interés para producir una población clasificada de células individuales, y cada célula comprende un ácido nucleico que codifica una respectiva cadena pesada de anticuerpo y cadena ligera de anticuerpo cognadas, y cada célula clasificada se proporciona en un recipiente distinto;

c) amplificar el ácido nucleico comprendido en la población de células individuales clasificadas usando PCR para producir un repertorio clasificado de ácidos nucleicos amplificados que codifican secuencias VH y VL cognadas, en el que las secuencias VH y VL de cada anticuerpo están comprendidas por el anticuerpo cognado procedente de la misma célula y se amplifican en el mismo recipiente;

d) modificar los ácidos nucleicos que codifican VH y VL cognadas amplificados y clasificados procedentes de la etapa (c) para producir un repertorio clasificado de módulos de expresión, y cada recipiente comprende: un primer tipo de módulo de expresión de anticuerpo cognado que comprende:

(i) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de región constante flanqueada en 5' por una secuencia de VH cognada derivada de dicha célula individual para producir una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena pesada de anticuerpo; y

(ii) uno o más elementos reguladores para expresar la cadena pesada de anticuerpo, y un segundo tipo de módulo de expresión de anticuerpo cognado que comprende:

(iii) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de región constante flanqueada en 5' por una secuencia de VL cognada derivada de dicha célula individual para producir una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena ligera de anticuerpo; y

(iv) uno o más elementos reguladores para expresar la cadena pesada de anticuerpo, y

en el que la secuencias de VH y VL de cada cadena pesada de anticuerpo y cadena ligera de anticuerpo cognadas se modifican en el mismo recipiente; y

e) transferir los módulos de expresión de anticuerpo cognado desde dicho repertorio de módulos a una población clasificada de células hospedantes, manteniendo al mismo tiempo la clasificación de los módulos de expresión de anticuerpo cognado, y producir un repertorio clasificado de células hospedantes que coexpresan un anticuerpo que comprende una cadena pesada de anticuerpo y una cadena ligera de anticuerpo cognadas, en el que el repertorio clasificado de células hospedantes es capaz de expresar de forma estable el repertorio de anticuerpos.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/GB2014/052836.

Solicitante: Kymab Limited.

Inventor/es: LIU,HUI, LEE,E-CHIANG, BRADLEY,ALLAN, LIANG,QI, WONG,VIVIAN, WOOD,ANDREW.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N15/09 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.

PDF original: ES-2811251_T3.pdf

 

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