Anticuerpos anti-IL-6 que impiden la uni¿®n de la IL-6 en complejo con el IL-6R¿Á a la GP130.

Una proteína de fusión que consta de

(i) Una fracción Fc de un anticuerpo,

(ii) IL6Rα y

(iii) IL6.

Anticuerpos anti-IL-6 que impiden la unión de la IL-6 en complejo con el IL-6Rα a la GP130.

Área de la invención.

Antecedentes de la invención.

La interleucina-6 (IL-6) está involucrada en varias enfermedades, incluyendo muchos tipos de cáncer y enfermedades autoinmunes. La interleucina-6 es secretada por muchos tipos de cáncer avanzados, tales como por ejemplo el cáncer de próstata hormono-independiente, y se cree que es un factor de crecimiento para esos tipos de cáncer. Además, se cree que la secreción de la IL-6 por parte de las células cancerígenas causa caquexia, el síndrome de desgaste característico del cáncer avanzado. Por lo tanto, la inhibición de la acción de la IL-6 podría resultar de utilidad en el tratamiento de estos tipos de cáncer.

La IL-6 también juega un papel clave en el desarrollo de los linfocitos B. La enfermedades autoinmunes con un componente significativo de anticuerpos, tales como la artritis reumatoide, podría ser tratada mediante la inhibición de la IL-6. Los trastornos que implican la proliferación de linfocitos B, tales como el mieloma múltiple y el linfoma de linfocitos B, podrían también tratarse mediante la inhibición de la actividad de la IL-6.

Además, la IL-6 juega un importante papel en la remodelación ósea al promover la resorción ósea. Los inhibidores de la actividad de la IL-6 tendrían el efecto de reducir la resorción ósea y podrían ser utilizados para el tratamiento de la osteoporosis.

Cuando la IL-6 se produce como parte de una enfermedad o trastorno, se encuentra a menudo en complejo con una subunidad del IL-6Rα soluble y es con frecuencia secretada a partir de células en la forma de un complejo de ese tipo. Como resultado, no resulta, con frecuencia, útil tratar a un paciente con un anticuerpo u otro inhibidor que bloquee la interacción entre la IL-6 y el IL-6Rα, porque un anticuerpo o inhibidor de este tipo puede no producir efecto alguno en un complejo preformado.

La presente invención hace referencia a una proteína de fusión que consta de una fracción Fc de un anticuerpo, IL-6Rα e IL-6. En particular la invención hace referencia a un anticuerpo anti-IL-6 para el tratamiento del cáncer y de efermedades autoinmunes promovidas por la IL6, en donde este anticuerpo se obtuvo mediante la inmunización de un mamífero con dicha proteína de fusión.

La patente WO 2004/039826 revela anticuerpos anti-IL-6 con propiedades específicas producidas mediante la generación, identificación y selección de anticuerpos por inmunización de ratones con IL-6 recombinante (rIL-6) . Estos anticuerpos revelan propiedades que dependen de las condiciones iniciadas por el sistema biólogico utilizado y el científico y el médico que estén involucrados.

Peters et al. (J. Immunol. 1998, V. 161, 3575-3581) describe una proteína de fusión compuesta de IL6 y de sIL6R ligados por una secuencia de péptidos (denominada "hiper-IL6") . Esta hiper-IL6 es mucho más activa en las células de expresión de gp130, en comparación con la IL6 y el sIL6R no ligados, y muestra una vida media mayor en suero que la IL6 no ligada. El péptido fue realizado como un compuesto alternativo a la IL6. El ensayo no menciona en absoluto ninguna referencia a la utilización de la proteína de fusión para la inmunización a fin de generar anticuerpos dirigidos en contra de la IL6, además del sIL6R.

Por lo tanto, existe la necesidad en el arte de un tratamiento mejorado de las enfermedades mediadas por la IL6 por medio de proporcionar proteínas de fusión y anticuerpos respectivos obtenidos mediante dichas proteínas de fusión a través de la inmunización.

Resumen de la invención.

La presente invención proporciona composiciones y métodos mejorados para el tratamiento de enfermedades mediadas por la IL6, en particular, cáncer y enfermedades autoinmunes que impliquen la sobre activación de la IL-6. De manera específica, la presente invención proporciona un anticuerpo novedoso de IL-6 que bloquea de manera efectiva la interacción entre la IL-6 y la gp130, en particular, un anticuerpo de la IL-6 que evita que el complejo preformado de IL-6 y de IL-6Rα se una a la gp130. Además, la presente invención proporciona métodos para generar el anticuerpo novedoso de la IL-6 mediante la inmunización de un mamífero con una proteína de fusión que consta de una fracción Fc de un anticuerpo, de IL6Rα y de IL6.

Por tanto, en un aspecto, la presente invención proporciona un antagonista de la IL-6 aislado que evita que la IL-6 en complejo con el IL-6Rα se una a la gp130. En un modo de realización, el antagonista de la IL-6 aislado contiene una región variable del anticuerpo y una región Fc obtenida de un anticuerpo humano. En modos de realización alternativos, la región Fc adecuada para la invención puede obtenerse de un anticuerpo obtenido de un ratón, una rata, una vaca, un perro, un pollo, un caballo, un pez, un mono, u otras especies no humanas. En un modo de realización preferente, la zona variable del anticuerpo se une a una región de la IL-6, de tal manera que la unión bloquea estéricamente la interacción entre la IL-6 y la gp130.

En algunos modos de realización, el anticuerpo incluye una cadena liviana que contiene una de las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, o SEQ ID NO:32.

En otros modos de realización, el anticuerpo incluye una cadena pesada que contiene una de las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, o SEQ ID NO:36.

La presente invención además proporciona ácidos nucleicos que codifican el antagonista de la IL-6 tal como se ha descrito con anterioridad en varios modos de realización. En particular, la presente invención proporciona ácidos nucleicos que codifican la cadena liviana y/o la cadena pesada de los anticuerpos anti-IL-6 descritos con anterioridad.

De manera habitual, el antagonista de la IL-6 incluye una fracción Fc. De manera preferente, la fracción Fc se obtiene de un anticuerpo humano. En un modo de realización aún más preferente, todas las regiones constantes en el anticuerpo de la IL-6 de la invención se obtienen de un anticuerpo humano. En modos de realización alternativos, la región Fc adecuada para la invención puede obtenerse de un anticuerpo obtenido de un ratón, una rata, una vaca, un perro, un caballo, un pez, un mono, o cualquier otra especie no humana.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad en un sujeto mediante la administración al sujeto del anticuerpo de la IL-6 aislado de la invención, tal como se ha descrito con anterioridad.

El método de la presente invención es particularmente útil para el tratamiento de enfermedades, trastornos, y efectos secundarios que impliquen la IL-6, tales como, por ejemplo, enfermedades autoinmunes incluyendo, pero sin limitarse a, artritis reumatoide, síndrome de Sjögren, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, enfermedad de Graves, enfermedad de Hashimoto, y enfermedad de Castleman, inflamación crónica y aguda, y osteoporosis y otros trastornos que implican la pérdida de masa ósea, y diferentes tipos de cáncer incluyendo, pero sin limitarse a, el cáncer de próstata hormono-independiente, trastornos proliferativos de linfocitos B tales como el linfoma no hodgkiniano de linfocitos B, y cáncer avanzado de riñón, mama, colon, pulmón, cerebro, y otros tejidos.

En aún otro aspecto, la presente invención proporciona un método para generar un anticuerpo de la IL-6 descrito en varios modos de realización anteriores. En particular, la presente invención proporciona un método para generar un anticuerpo de la IL-6 mediante (a) la generación, en primer lugar, de anticuerpos contra un complejo de IL-6 y de IL-6Rα inmunizando un animal con una composición que incluye IL-6 y IL-6Rα, y (b) identificando un anticuerpo que inhibe la interacción entre la gp130 y la IL-6. La IL-6 y la IL-6Rα pueden estar en una configuración de proteína de fusión para facilitar la formación del complejo de IL-6 / IL-6Rα. En un modo de realización preferente, la composición además incluye una fracción adicional que facilita la presentación del antígeno, tal como por ejemplo una fracción Fc.

En aún otro aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo específico para un complejo de IL-6 y de IL-6Rα y que es capaz de evitar que la... [Seguir leyendo]

1. Una proteína de fusión que consta de

2. Una proteína de fusión según la reivindicación 1, en donde el IL6Rα se fusiona al C-terminal de la fracción Fc, y la IL6 se fusiona al C-terminal del IL6Rα.

3. Una proteína de fusión según la reivindicación 1 o 2, en donde la fracción Fc es murina y el IL6Rα y la IL6 son humanos.

4. Uso de una proteína de fusión según cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3 para la fabricación de un anticuerpo anti-IL-6 para el tratamiento del cáncer y enfermedades autoinmunes promovidas por IL-6, en donde este anticuerpo se obtuvo mediante la inmunización de un mamífero con dicha proteína de fusión, y presenta las siguientes propiedades: (i) Una fracción Fc de un anticuerpo, (ii) IL6Rα y (iii) IL6.

(i) La región variable de dicho anticuerpo se une a un epítopo en la IL-6,

(ii) Bloquea estéricamente la interacción entre la IL-6 y la gp130 en la superficie de una célula enferma, y

(iii) Evita que la IL-6 en complejo con el IL-6Rα se una a la gp130, pero no bloquea estéricamente la interacción entre IL-6 y IL-6Rα.

5. Uso según la reivindicación 4, en donde el anticuerpo cribado es un anticuerpo que consta de (a) una cadena pesada y (b) una cadena liviana que constan de secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en

(i) (a) SEQ ID NO:35 y (b) SEQ ID NO:31,

(ii) (a) SEQ ID NO:34 y (b) SEQ ID NO:30,

(iii) (a) SEQ ID NO:36 y (b) SEQ ID NO:32, y (iv) (a) SEQ ID NO:33 y (b) SEQ ID NO:29.

Figura 6