PROCEDIMIENTO PARA ANALIZAR ESTEROLES EN ACEITES COMESTIBLES.
Procedimiento para analizar esteroles en aceites comestibles.
La invención define un procedimiento para analizar los esteroles totales en aceites comestibles que comprende las etapas de:
(a) someter la fracción insaponificable del aceite a cromatografía líquida de alta eficacia para separar la fracción de esteroles;
(b) someter a la fracción de esteroles separada en la etapa (a) a una reacción de derivatización, y
(c) analizar la fracción de esteroles derivatizados obtenidos en (b) mediante cromatografía de gases;
en el que el acoplamiento entre la cromatografía líquida y la cromatografía de gases se efectúa mediante la interfase TOTAD (Through Oven Transfer Adsorption Desorption); y en el que la reacción de derivatización de la etapa (b) se efectúa en el material de retención comprendido en dicha interfase. Este procedimiento permite analizar esteroles totales en aceites de modo rápido, sencillo, reproducible, fiable y sin apenas manipulación de la muestra, realizando una etapa de derivatización en línea, con una repetibilidad satisfactoria.
Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P201030281.
Solicitante: UNIVERSIDAD DE CASTILLA-LA MANCHA.
Nacionalidad solicitante: España.
Inventor/es: VILLEN ALTAMIRANO,JESUS, VAZQUEZ MOLINI,ANA MARIA, CORTES SIMARRO,JOSE MANUEL, TOLEDANO TORRES,ROSA MARIA.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A23D9/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A23 ALIMENTOS O PRODUCTOS ALIMENTICIOS; SU TRATAMIENTO, NO CUBIERTO POR OTRAS CLASES. › A23D ACEITES O GRASAS COMESTIBLES, p. ej. MARGARINAS, "SHORTENINGS", ACEITES PARA COCINAR (productos alimenticios para animales C11B, C11C; hidrogenación C11C 3/12). › Otros aceites o grasas comestibles, p. ej. aceites para cocinar.
- B01D15/08 TECNICAS INDUSTRIALES DIVERSAS; TRANSPORTES. › B01 PROCEDIMIENTOS O APARATOS FISICOS O QUIMICOS EN GENERAL. › B01D SEPARACION (separación de sólidos por vía húmeda B03B, B03D, mesas o cribas neumáticas B03B, por vía seca B07; separación magnética o electrostática de materiales sólidos a partir de materiales sólidos o de fluidos, separación mediante campos eléctricos de alta tensión B03C; aparatos centrifugadores B04B; aparato de vórtice B04C; prensas en sí para exprimir los líquidos de las sustancias que los contienen B30B 9/02). › B01D 15/00 Procedimientos de separación que implican el tratamientos de líquidos con absorbentes sólidos; Aparatos para ello. › Adsorción selectiva, p. ej. cromatografía.
- B01D15/18 B01D 15/00 […] › relativo a la configuración de los flujos.
- C07J9/00 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07J ESTEROIDES (seco-steroides C07C). › Esteroides normales que contienen carbono, hidrógeno, halógeno u oxígeno, sustituidos en posición 17beta por una cadena de más de dos átomos de carbono, p. ej. colano, colestano, coprostano.
- G01N30/12 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 30/00 Investigación o análisis de materiales por separación en constituyentes utilizando la adsorción, la absorción o fenómenos similares o utilizando el intercambio iónico, p. ej. la cromatografía (G01N 3/00 - G01N 29/00 tienen prioridad). › por evaporación.
- G01N30/88 G01N 30/00 […] › Sistemas integrados de análisis, especialmente adaptados a este efecto, no cubiertos por uno solo de los grupos G01N 30/04 - G01N 30/86.
Fragmento de la descripción:
Procedimiento para analizar esteroles en aceites comestibles.
Campo de la invención
La invención se refiere al campo de los métodos de análisis aplicados a alimentos. En particular, la invención se refiere a un procedimiento para analizar esteroles en aceites comestibles.
Antecedentes de la invención
Los aceites vegetales están constituidos principalmente por triglicéridos (95-98%) y una mezcla compleja de compuestos minoritarios (2-5%) de diversa naturaleza química. El análisis de estos componentes minoritarios es esencial porque son usados como referencia para regulaciones oficiales de aceites comestibles y para el aseguramiento analítico de su calidad, origen, método de extracción y posible adulteración de los aceites (Grob, K.; Lanfranchi, M. & Mariani, C. Evaluation of olive oils through the fatty alcohols, the sterols and their esters by coupled LC-GC. J. Am. Oil Chem. Soc. 1990, 67, 626-634).
La Unión Europea ha establecido limites legales (EEC 2568/91) en el contenido de ciertos componentes con el objetivo de evitar adulteraciones. Por ejemplo, el análisis de los dialcoholes triterpénicos, eritrodiol y uvaol, es usado para distinguir entre aceites de oliva de diferentes calidades, como el obtenido por presión en frío (oliva virgen) y aceites extraídos con disolventes (Grob, K.; Biedermann, M. & Läubli, T. Determination of free erythrodiol in olive oil by coupled LC-GC. J. High Resolut. Cromatogr. 1989, 12, 49-50). En aceites obtenidos por extracción con disolventes, la concentración de estos dialcoholes triterpénicos es mayor que en aceites obtenidos por presión. Es por ello que se ha establecido un límite legal para la suma de eritrodiol y uvaol en aceite de oliva virgen. La fracción de esteroles se analiza normalmente para identificar una grasa o un aceite, para la detección de adiciones fraudulentas de aceites baratos a otros más caros (Grob, et al. 1989, supra), para establecer diferentes calidades del mismo tipo de aceite (Blanch, G.P.; Villén, J. & Herraiz, M. Rapid analysis of free erythrodiol and uvaol in olive oils by coupled reversed phase liquid chromatography-gas chromatography. J. Agric. Food Chem. 1998, 46, 1027-1030) y para tipificar aceites de determinados orígenes geográficos (Rivera del Alamo, R.M.; Fregapane, G.; Aranda, F.; Gómez-Alonso, S. & Salvador, M.D. Sterol and alcohol composition of Cornicabra virgin olive oil: the campesterol content exceeds the upper limit of 4% established by EU regulations. Food Chem. 2004, 84(4), 533-537; Sánchez-Casas, J.; Osorio-Bueno, E.; Montaño-García, A.M. & Martínez-Cano, M. Sterol and erythrodiol + uvaol content of virgin olive oils from cultivars of Extremadura (Spain). Food Chem. 2004, 87(2), 225-230).
Los métodos analíticos más empleados para el análisis de diferentes fracciones del aceite de oliva comprenden varias etapas: 1) Saponificación del aceite para eliminar triglicéridos; 2) Extracción con disolventes de la fracción insaponificable; 3) Fraccionamiento de la fracción insaponificable en varios grupos de compuestos por cromatografía en capa fina (TLC) o por cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC); 4) Derivatización para obtener trimetilsililderivados; y 5) Análisis de los derivatizados por cromatografía de gases empleando columnas capilares apolares, en los que no hay un acoplamiento directo entre la cromatografía de líquidos (LC) y la cromatografía de gases (GC) (Lercker, G. & Rodríguez-Estrada, M.T. Chromatographic analysis of unsaponifiable compounds of olive oils and fat-containing foods. J. Chromatogr. A 2000, 881, 105-129). Estos métodos están descritos en diferentes regulaciones oficiales (Codex Alimentarius Commission Fats, oils and derivatives, issued by Joint FAO/WHO Food Standards Program, Rome, 1993; Vol. 8, pp. 41-46; International Olive Oil Council. Norma comercial aplicable al aceite de oliva y al aceite de orujo de oliva. COI/ T. 20/ Documento nº 10, Madrid, Spain. 2001).
Está ampliamente reconocido que estos métodos convencionales son tediosos, requieren mucho tiempo de dedicación del analista y pueden provocar la pérdida de analitos durante la manipulación, así como introducir sustancias que pueden interferir en el análisis. El acoplamiento directo LC-GC es una técnica que combina la elevada eficiencia de la separación por HPLC, que se emplea como etapa de preparación de la muestra, sustituyendo las etapas de extracción y limpieza, con el alto poder de separación y la elevada sensibilidad de la etapa de cromatografía de gases (Grob, K. On line coupled LC-GC. Hüthig, Heidelberg. 1991; Vreuls, J.J.; De Jong, G.J.; Ghijsen, R.T. & Brinkman, U.A.Th. Liquid chromatography coupled on-line with gas chromatography: state of the art. J. AOAC Int. 1994, 77, 306-327; Mondello, L.; Dugo, G. & Bartle, K.D. In-line microbore high performance liquid chromatography-capillary gas chromatography for food and water analyses. A review. J. Microcol. Sep. 1996, 8, 275-310; Dugo, P.; Dugo, G. & Mondello, L. On-line coupled LC-GC: Theory and application. LC-GC Europe 2003, 16, 35-43). Esta técnica elimina casi todo el trabajo manual, lo que permite que un analista lleve a cabo un mayor número de determinaciones en menos tiempo, y disminuye sustancialmente la probabilidad de introducir sustancias que pudieran interferir durante la preparación de la muestra.
Grob y colaboradores propusieron métodos de análisis de componentes minoritarios en aceites comestibles mediante acoplamiento directo LC-GC (Grob, K.; Lanfranchi, M. & Mariani, C. Evaluation of olive oils through the fatty alcohols, the sterols and their esters by coupled LC-GC. J. Am. Oil Chem. Soc. 1990, 67, 626-634; Grob et al. 1989, supra; Grob, K.; Lanfranchi, M.; Mariani, C. Determination of free sterols and esterified sterols and wax esters in olive oil by coupled liquid chromatography-gas chromatography. J. High Resolut. Chromatogr. 1989, 471, 397-405; Grob, K.; Kaelin, I. & Artho, A. Coupled LC-GC: The capacity of silica gel HPLC columns for retaining fat. J. High Resolut. Chromatogr. 1991, 14, 373-376). En estos métodos, la etapa de LC se lleva a cabo en fase normal y los analitos son previamente derivatizados. El aceite así derivatizado se inyecta, filtrado y diluido, en el sistema LC-GC, en el que los analitos son separados del resto de los componentes del aceite en la etapa de LC, y transferidos a GC, en el que se lleva a cabo su determinación.
La interfase empleada en estos métodos, basada en el empleo de un capilar sin fase en el que se produce la eliminación del disolvente (eluyente de LC) y la retención de los analitos, no permitía emplear fase inversa en la etapa de LC debido a la elevada tensión superficial y al elevado volumen de vapor por unidad de volumen de líquido de los disolventes polares empleados en HPLC en fase inversa (Cercaci, L.; Rodríguez-Estrada, M.T. & Lercker, G. Solid-phase extraction-thin-layer chromatography-gas chromatography method for the detection of hazelnut oil in olive oils by determination of esterified sterols. J. Chromatogr. A 2003, 985, 211-220; Villén, J.; Blanch, G.P.; Ruiz del Castillo, M.L. & Herraiz, M. Rapid and simultaneous analysis of free sterols, tocopherols and Squalene in edible oils by coupled reversed phase liquid chromatography-gas chromatography. J. Agric. Food Chem. 1998, 46, 1419-1422).
Herraiz y colaboradores desarrollaron métodos de análisis de estas fracciones por acoplamiento directo LC-GC en el que la etapa de LC se llevaba a cabo en fase inversa (RPLC-GC), empleando como inferfase un inyector PTV. Publicaron tres artículos presentando un método de análisis de esteroles (Señoráns, F.J.; Tabera, J. & Herraiz, M. Rapid separation of free sterols in edible oils by on-line coupled reversed phase liquid chromatography-gas chromatography. J. Agric. Food Chem. 1996, 44, 3189-3192), de alcoholes triterpénicos (Blanch, 1998, supra) y de esteroles, tocoferoles y escualeno en una misma determinación cromatográfica (Villén, 1998, supra). El empleo de un inyector PTV como interfase permitió llevar a cabo el acoplamiento RPLC-GC, pero hacía necesario desconectar y conectar la columna de GC en cada análisis, lo que impedía su automatización.
El grupo de investigación...
Reivindicaciones:
1. Procedimiento para analizar los esteroles totales en un aceite comestible caracterizado porque comprende las etapas de:
en el que el acoplamiento entre la cromatografía líquida y la cromatografía de gases se efectúa mediante la interfase TOTAD (Through Oven Transfer Adsorption Desorption); y en el que la reacción de derivatización de la etapa (b) se efectúa en el material de retención comprendido en dicha interfase.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la fracción insaponificable del aceite se obtiene mediante las etapas de:
3. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque el material de retención de la interfase TOTAD se selecciona de entre materiales inertes, materiales adsorbentes y materiales absorbentes.
4. Procedimiento según la reivindicación 3, caracterizado porque el material de retención de la interfase TOTAD se selecciona de entre fibra de vidrio, volaspher, chromosorb, tenax, carbón activo, gaschrom, polidimetilsiloxano sobre volaspher, OV-17 sobre volaspher y polietilenglicol sobre chromosorb.
5. Procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado porque el material de retención de la interfase TOTAD es tenax TA.
6. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque el reactivo derivatizante se selecciona de entre hexametildisilazano, trimetilclorosilano, N,O-bis(trimetilsilil)acetamida, N,O-bis(trimetilsilil)trifluoro-acetamida, N-trimetilsililimidazol, clorometildimetil-clorosilano, N-metil-N-trimetilsililheptafluorobutiramida, dimetilclorosilano y mezclas de los mismos.
7. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque el reactivo derivatizante es una mezcla de hexametildisilazano y trimetilclorosilano disueltos en piridina.
8. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la reacción de derivatización se efectúa a una temperatura de 30-200ºC durante un tiempo de 0,1 a 10 min.
9. Procedimiento según la reivindicación 8, caracterizado porque la reacción de derivatización se efectúa a una temperatura de 125ºC durante un tiempo de 0,8 min.
10. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque el eluyente empleado en la cromatografía líquida de la etapa (a) se selecciona de entre n-hexano, acetato de etilo, metiltercbutiléter, éter dietílico, n-heptano, n-pentano, isooctano, ciclohexano, ciclopentano, tetracloruro de carbono, tolueno, diclorometano, cloroformo, tetrahidrofurano, acetato de metilo y mezclas de los mismos.
11. Procedimiento según la reivindicación 10, caracterizado porque el eluyente empleado en la cromatografía líquida de la etapa (a) es una mezcla de n-hexano y acetato de etilo.
12. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque las etapas (a) a (c) son totalmente automáticas.
13. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque el sistema de detección del cromatógrafo de gases es un detector seleccionado de entre un detector de ionización de llama y un espectrómetro de masas.
Patentes similares o relacionadas:
Utilización de ácido graso de aceite de resina, del 8 de Julio de 2020, de HANKKIJA OY: Utilización no terapéutica de un ácido graso de aceite de resina que comprende el 1-10 % (p/p) de ácidos resínicos en la modulación de la […]
Ácido graso de aceite de resina para su utilización en tratamiento y en complementos alimenticios y composiciones del mismo, del 24 de Junio de 2020, de HANKKIJA OY: Ácido graso de aceite de resina que comprende el 1-10 % (p/p) de ácidos resínicos para su utilización en la prevención del crecimiento de bacterias dañinas en el tracto digestivo […]
Preparación de aceite microbiano que contiene ácidos grasos poliinsaturados, del 10 de Junio de 2020, de DSM IP ASSETS B.V.: Un aceite microbiano que comprende al menos el 50% de ácido araquidónico (ARA) basado en el aceite y que tiene un contenido en triglicéridos de al menos el 90%.
COMPOSICIÓN DE UN ACEITE COMESTIBLE, del 8 de Junio de 2020, de ADROVER SANSO, Maria: 1. Composición de un aceite comestible, caracterizada porque comprende: -80-95% en volumen de aceite de oliva de origen silvestre o cultivado, […]
Composiciones de ácidos grasos poliinsaturados enriquecidas en DHA, del 3 de Junio de 2020, de Nuseed Pty Ltd: Composición lipídica vegetal que comprende: (i) ácido docosahexaenoico (22:6n-3) en una cantidad de desde el 15% hasta el 35% en peso […]
Procesos para obtener aceite microbiano de células microbianas, del 15 de Abril de 2020, de DSM IP ASSETS B.V.: Un proceso de obtención de un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados de una o más células microbianas de Mortierella alpina, en donde el proceso […]
Agente de batido para su uso en la preparación de coberturas comestibles y un método para preparar dicho agente, del 11 de Marzo de 2020, de FrieslandCampina Nederland B.V: Un agente de batido que está libre de aceite y grasa comestibles a granel basados en palma y libre de emulsionantes basados en palma para […]
Composición de grasa con bajo contenido de ácidos grasos saturados, emulsión aireada y método, del 12 de Febrero de 2020, de Bunge Loders Croklaan B.V: Composición de grasa con un bajo contenido de AGS para usar en una emulsión aireada, tal como una crema de relleno, en donde la composición comprende […]