La presente invención describe un compuesto inductor o activadorde la actividad telomerasa basado en la secuencia de nucleótidosdel fragmento GSE 24.

2 de la disquerina o la secuencia proteinicao peptidica codificado por dicha secuencia de nucleótidos. Igualmente forman parte vectores que comprenden dicha secuencia y células transformadas con la misma, y composiciones farmacéuticas quecontienen todos estos elementos. Estas composiciones pueden serutilizadas en el tratamiento de enfermedades del siguiente grupo:envejecimiento o aceleración del envejecimiento, enfermedades neurodegenerativas y disqueratosis congenita

ESTADO DE LA TÉCNICA

La disquerina (Figura 1) es una proteína nucleolar de 58 kD que se asocia a la secuencia H/ACA en los SnoRNA, presentes en las partículas de ribonucleoproteínas pequeñas que se encargan de pseudouridinizar el ARN ribosómico. Por otra parte, también es un componente del complejo de la telomerasa, que es responsable del mantenimiento de las repeticiones teloméricas en los extremos cromosómicos. La forma de disqueratosis congénita ligada al cromosoma X (Marrone y col., 2003; Besseler y col., 2004) es un síndrome congénito que produce insuficiencia de la medula ósea y está asociado a una mayor susceptibilidad al cáncer. Esta forma de disqueratosis se produce por una mutación específica del gen DKC1 que codifica la disquerina. Hay otra disqueratosis congénita autosómica dominante; en este caso, esta enfermedad está asociada a mutaciones en el componente de ARN de la telomerasa (hTR) (Heiss y col., 1998). En los fibroblastos y linfoblastos de pacientes con disqueratosis congénita hay menos actividad de la telomerasa y los telómeros son más cortos que los de células no afectadas por la enfermedad (Siriniavin y col., 1975; Trowbridge y col., 1977). En las células de pacientes con la forma de disqueratosis congénita ligada al cromosoma X, los defectos en la telomerasa se han superado expresando hTERT de forma ectópica (Mitchell y col., 1999). En la disqueratosis congénita producida por mutaciones en hTR, la única forma de recuperar la actividad de la telomerasa es reexpresando hTR (Fu y col., 2003).

Los telómeros están compuestos por 500-2.000 repeticiones de la secuencia conservada TTAGGG en el extremo 3' de los cromosomas y su acortamiento en divisiones sucesivas se convierte en una limitación para la capacidad de proliferación de la célula. Los telómeros son susceptibles de sufrir daño en el ADN producido por agentes exógenos, incluido el cisplatino. Se ha descrito que el cisplatino puede inhibir la actividad de la telomerasa en diferentes líneas celulares (Ishibashi y col., 1998; Burger y col., 1997). Hay varias hipótesis acerca de cómo se puede producir esta inhibición. Una posibilidad es la formación de aductos G-Pt-G, típicos del cisplatino, en la secuencia repetida de los telómeros TTAGGG. Alternativamente, interacciones del cisplatino con grupos sulfhidrilo esenciales para la subunidad catalítica transcriptasa inversa (hTERT) e incluso podría deberse a la reducción de la expresión de hTERT (Burger y col., 1997).

BREVE DESCRIPCIÓN

Un objeto de esta invención es un compuesto que induce o activa la actividad de la telomerasa, denominado en lo sucesivo compuesto activador de esta invención, basado en la secuencia de nucleótidos del fragmento GSE 24.2 de la disquerina o en la secuencia de proteínas o de péptidos codificada por dicha secuencia de nucleótidos que puede recuperar la actividad de la telomerasa en el interior de las células de un mamífero, preferentemente humanos.

Un objeto particular de la invención es una secuencia de nucleótidos, denominada en lo sucesivo secuencia génica GSE 24.2 de esta invención, que permite la expresión de una proteína o péptido que induce la recuperación de la actividad de la telomerasa en el interior de las células de un mamífero, preferentemente humano, y que está constituida por una o varias secuencias de nucleótidos GSE 24.2 que pertenecen al siguiente grupo:

a) una secuencia de nucleótidos compuesta por una secuencia de nucleótidos GSE 24.2 humana (SEQ ID NO1),

b) una secuencia de nucleótidos análoga a la secuencia de a),

c) un fragmento de cualquiera de las secuencias de a) y b), y

d) una secuencia de nucleótidos, construcción genética, que comprende cualquier secuencia que pertenece a a), b) y c).

Como se usa en la presente invención el término “secuencia de nucleótidos” se refiere a una secuencia de ADN, ADNc o ARNm.

Una realización particular de esta invención es la secuencia de nucleótidos de la secuencia GSE

24.2 de a) compuesta por SEQ ID NO1. Otra realización particular de esta invención es la secuencia de nucleótidos de la secuencia GSE 24.2 de b) compuesta por SEQ ID NO11 o SEQ ID NO13, que codifican los dominios peptídicos Trub I y Trub II, respectivamente (Ejemplo 1.7).

Otro objeto particular de esta invención es una construcción genética GSE 24.2 que comprende la secuencia de nucleótidos GSE 24.2.

Otro objeto particular de esta invención es un vector de expresión GSE 24.2 que comprende una secuencia de nucleótidos GSE 24.2 o una construcción genética GSE 24.2, descritas en esta invención, y que permite la expresión de una proteína o péptido que puede recuperar la actividad de la telomerasa en el interior de células de mamíferos, preferentemente humanos. Un ejemplo de esta realización particular es el vector de expresión pLNCX 24.2 de la invención (véanse los ejemplos).

Además, otro objeto particular de la invención es una proteína o péptido, denominado en lo sucesivo proteína GSE 24.2 de esta invención, que presenta actividad dirigida a recuperar la telomerasa en el interior de las células de un mamífero, preferentemente humano, y que comprende una o varias secuencias de aminoácidos que pertenecen al siguiente grupo:

a) una secuencia de aminoácidos compuesta por una secuencia de aminoácidos GSE

24.2 humana (SEQ ID NO2),

b) una secuencia de aminoácidos análoga a la secuencia de a),

c) un fragmento de cualquiera de las secuencias de a) y b), y

d) una secuencia de aminoácidos que comprende cualquier secuencia que pertenece a a), b) yc).

Otra realización particular de esta invención es una proteína cuya secuencia de aminoácidos de a) está compuesta por SEQ ID NO2.

Otra realización particular de esta invención es una proteína cuya secuencia de aminoácidos de c), cuyo fragmento está compuesta por SEQ ID NO12 o SEQ ID NO14.

Por otro lado, otro objeto adicional de esta invención son células genéticamente modificadas, tanto células eucariotas - preferentemente humanas - como procariotas, denominadas en lo sucesivo células GSE 24.2 de la invención, que comprenden la secuencia de nucleótidos, la construcción y el vector de expresión GSE 24.2 de la invención y en las que puede expresarse de forma adecuada el péptido o proteína GSE 24.2 de la invención.

Por tanto, otro objeto de la invención es el uso del compuesto activador GSE 24.2 de esta invención en la preparación de un fármaco o composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad producida por una alteración, preferentemente una reducción, de la actividad de la telomerasa, que pertenece, a título ilustrativo y sin que limite el alcance de la invención, al siguiente grupo: envejecimiento o aceleración del envejecimiento, enfermedades neurodegenerativas y disqueratosis congénita.

Otro objeto de esta invención es una composición farmacéutica o fármaco para el tratamiento de enfermedades, trastornos o patologías que se desarrollan con alteraciones de la actividad de la telomerasa, preferentemente una reducción de la actividad, denominada en lo sucesivo composición farmacéutica de esta invención, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o agente que puede recuperar la actividad de la telomerasa junto con, opcionalmente, uno o más adyuvantes y/o vehículos farmacéuticamente aceptables, y que puede estimular la generación y el mantenimiento de la actividad de la telomerasa.

Otro objeto particular de esta invención es una composición farmacéutica de la invención en la que el compuesto o agente que puede recuperar la actividad de la telomerasa pertenece al siguiente grupo: secuencia, construcción genética o vector GSE 24.2 que permiten la expresión de una proteína o péptido que puede recuperar la actividad de la telomerasa en el interior de las células de un mamífero, preferentemente humano.

Una realización particular de la invención es una composición farmacéutica de la invención en la que el compuesto o agente que puede recuperar la actividad de la telomerasa es una o varias secuencias GSE 24.2 que pertenecen al siguiente grupo:

a) una secuencia de nucleótidos compuesta por una secuencia de nucleótidos GSE 24.2

humana (SEQ ID NO1),

b) una secuencia de nucleótidos análoga a la secuencia de a),

c) un fragmento... [Seguir leyendo]

1. Una secuencia de nucleótidos que está constituida por SEQ ID NO: 1 o la secuencia de aminoácidos codificada por dicha secuencia de nucleótidos.

2. Secuencia de nucleótidos caracterizada porque permite la expresión de una proteína o péptido que induce la recuperación de actividad de la telomerasa en el interior de las células de un mamífero, preferentemente humano, y porque está compuesta por una o varias secuencias de nucleótidos que pertenecen al siguiente grupo:

a) una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 1,

b) variantes biológicamente activas de la secuencia de (a), y

c) un fragmento de cualquiera de las secuencias de (a) o (b).

3. Secuencia de nucleótidos según la reivindicación 2, caracterizada porque es una secuencia de ADN, ADNc o ARNm.

4. Secuencia de nucleótidos según la reivindicación 2, caracterizada porque la secuencia de

a) está constituida por SEQ ID NO: 1.

5. Secuencia de nucleótidos según la reivindicación 2, caracterizada porque la secuencia de b) está constituida por SEQ ID NO: 11 o SEQ ID NO: 13.

6. Construcción genética caracterizada porque comprende una o varias secuencias de nucleótidos que están constituidas por al menos un secuencia de nucleótidos según las reivindicaciones 2 a 5.

7. Vector de expresión caracterizado porque comprende una secuencia de nucleótidos según las reivindicaciones 3 a 5, o una construcción genética según la reivindicación 6.

8. Vector de expresión según la reivindicación 7, caracterizado porque el vector de expresión es el plásmido pLNCX 24.2.

9. Proteína o péptido, caracterizado porque induce actividad de la telomerasa en el interior de las células de un mamífero, preferentemente humano, y porque está compuesta por una o varias secuencias de aminoácidos que pertenecen al siguiente grupo:

a) una secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 2,

b) variantes biológicamente activas de la secuencia de (a), y

c) un fragmento de cualquiera de las secuencias de (a) o (b).

10. Proteína según la reivindicación 9, caracterizada porque la secuencia de aminoácidos de a) está constituida por SEQ ID NO: 2.

11. Proteína según la reivindicación 9, caracterizada porque la secuencia de aminoácidos de c) es SEQ ID NO: 12 o SEQ ID NO: 14.

12. Células eucariotas o procariotas genéticamente modificadas, caracterizadas porque comprenden la secuencia de nucleótidos según las reivindicaciones 2 a 5, la construcción según la reivindicación 6 o el vector de expresión según las reivindicaciones 7 y 8, en las que puede expresarse adecuadamente el péptido o proteína según las reivindicaciones 9 a 11.

13. Células eucariotas humanas genéticamente modificadas, caracterizadas porque comprenden la secuencia de nucleótidos según las reivindicaciones 2 a 5, la construcción según la reivindicación 6 o el vector de expresión según las reivindicaciones 7 y 8, en las que puede expresarse adecuadamente el péptido o proteína según las reivindicaciones 9 a 11.

14. Uso de la secuencia de nucleótidos, la construcción, el vector, la proteína o la célula según las reivindicaciones 1 a 13 para la preparación de un fármaco o composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad producida por una alteración de, preferentemente una reducción en, la actividad de la telomerasa.

15. Uso según la reivindicación 14, caracterizado porque la enfermedad pertenece al siguiente grupo: envejecimiento o aceleración del envejecimiento, enfermedades neurodegenerativas y disqueratosis congénita.

16. Composición farmacéutica o fármaco para el tratamiento de enfermedades, trastornos o patologías producidos por una reducción en la actividad de la telomerasa, caracterizada porque comprende un compuesto o agente que puede recuperar la actividad de la telomerasa según la reivindicación 1.

17. Composición farmacéutica o fármaco para el tratamiento de enfermedades, trastornos o patologías producidos por una reducción en la actividad de la telomerasa, caracterizada porque comprende un compuesto o agente que puede recuperar la actividad de la telomerasa, caracterizado porque el compuesto comprende una o varias secuencias que pertenecen al siguiente grupo o la secuencia de aminoácidos codificada por dicha secuencia de nucleótidos:

a) una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 1,

b) variantes biológicamente activas de la secuencia de (a),

c) un fragmento de cualquiera de las secuencias de (a) o (b), y

d) una secuencia de nucleótidos que comprende cualquier secuencia que pertenece a (a), (b) o (c).

18. Composición farmacéutica según la reivindicación 16 ó 17, caracterizada porque el compuesto o agente que induce actividad de la telomerasa pertenece al siguiente grupo: secuencia de nucleótidos, construcción genética, vector de expresión, proteína o célula, según las reivindicaciones 2 a 13.

19. Composición farmacéutica según la reivindicación 17 ó 18, caracterizada porque la secuencia de nucleótidos de a) está constituida por SEQ ID NO: 1.

20. Composición farmacéutica según la reivindicación 17 ó 18, caracterizada porque la secuencia de nucleótidos de c) es SEQ ID NO: 11 o SEQ ID NO: 13.

21. Composición farmacéutica según la reivindicación 18, caracterizada porque el compuesto es una construcción genética según la reivindicación 6.

22. Composición farmacéutica según la reivindicación 18, caracterizada porque el compuesto es un vector de expresión según las reivindicaciones 7 y 8.

23. Composición farmacéutica según la reivindicación 22, caracterizada porque el vector es el plásmido pLNCX 24.2.

24. Composición farmacéutica según la reivindicación 18, caracterizada porque el compuesto es una proteína según las reivindicaciones 9 a 11.

25. Composición farmacéutica según la reivindicación 24, caracterizada porque la proteína pertenece al siguiente grupo:

a) una secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 2,

b) variantes biológicamente activas de la secuencia de (a),

c) un fragmento de cualquiera de las secuencias de (a) o (b), y

d) una secuencia de aminoácidos que comprende cualquier secuencia que pertenece a (a), (b) o (c).

26. Composición farmacéutica según la reivindicación 25, en la que la secuencia de aminoácidos de a) es SEQ ID NO: 2.

27. Composición farmacéutica según la reivindicación 25, en la que la secuencia de aminoácidos de c) es SEQ ID NO: 12 y SEQ ID NO: 14.

28. Composición farmacéutica según la reivindicación 18, caracterizada porque el compuesto es una célula, preferentemente humana, transformada por la secuencia, construcción o vector según las reivindicaciones 2 a 8.

29. Uso de la composición farmacéutica según las reivindicaciones 16 a 25 para la preparación de un fármaco para el tratamiento o la profilaxis para un mamífero, preferentemente un ser humano, afectado por una enfermedad, trastorno o patología que se desarrolla con alteraciones de, preferentemente una reducción en, la actividad de la telomerasa, estando constituida la administración de dicha composición

terapéutica por una dosis adecuada que hace posible recuperar la actividad de la telomerasa en el interior de sus células.

30. Uso de la composición farmacéutica para la preparación de un fármaco según la reivindicación 29, caracterizado porque la enfermedad que se desarrolla con alteraciones de la actividad de la

5 telomerasa y que afecta a seres humanos pertenece al siguiente grupo: envejecimiento o aceleración del envejecimiento, enfermedades neurodegenerativas, disqueratosis congénita, síndrome del maullido, ataxia-telangiectasia, síndrome de rotura de Nijmegen, síndrome de Bloom, síndrome de Werner, anemia de Fanconi, colitis ulcerosa, envejecimiento vascular, aterosclerosis y cáncer.

31. Uso de la composición farmacéutica para la preparación de un fármaco según la reivindicación 30, caracterizado porque la enfermedad neurodegenerativa pertenece al siguiente grupo: enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, ataxia cerebelosa y degeneración de la médula espinal.

32. Uso de la composición farmacéutica para la preparación de un fármaco según la reivindicación 30, caracterizado porque la enfermedad es cáncer.

33. Uso de la composición farmacéutica para la preparación de un fármaco según la reivindicación

15 30, caracterizado porque la disqueratosis congénita es la forma de disqueratosis congénita ligada al cromosoma X o disqueratosis congénita autosómica dominante.