Secuencia de nucleótidos y péptidos GSE 24.2 de la disquerina inductores de la actividad telomerasa,

procedimiento de obtención, composiciones terapéuticas y sus aplicaciones.

La presente invención describe un compuesto inductor o activador de la actividad telomerasa basado en la secuencia de nucleótidos del fragmento GSE 24.2 de la disquerina o la secuencia proteínica o peptídica codificado por dicha secuencia de nucleótidos. Igualmente forman parte vectores que comprenden dicha secuencia y células transformadas con la misma, y composiciones farmacéuticas que contienen todos estos elementos. Estas composiciones pueden ser utilizadas en el tratamiento de enfermedades del siguiente grupo: envejecimiento o aceleración del envejecimiento, enfermedades neurodegenerativas y disqueratosis congénita

Secuencia de nucleótidos y péptidos GSE 24.2 de la disquerina inductores de la actividad telomerasa, procedimiento de obtención, composiciones terapéuticas y sus aplicaciones.

Sector de la técnica

Sector biotecnológico con aplicaciones en salud humana, y más concretamente compuestos biológicos - secuencias de nucleótidos, péptidos y células humanas transformadas - con aplicaciones terapéuticas para los seres humanos.

Estado de la técnica

La disquerina (Figura 1) es una proteína nucleolar de 58 Kd que se asocia con la caja H/ACA en los SnoRNAs, presentes en las pequeñas partículas de ribonucleoproteínas que se encargan de pseudouridinizar el ARN ribosómico. Por otra parte, también es un componente del complejo de la telomerasa, la cual es responsable del mantenimiento de las repeticiones teloméricas en los finales cromosómicos. La disqueratosis congénita ligada al cromosoma X (Marrone et al., 2003; Besseler et al., 2004), es un síndrome congénito que provoca fallo de la medula ósea y está asociado con una mayor susceptibilidad al cáncer. Esta forma de disqueratosis está causada por una mutación puntual del gen DKC1 el cual codifica para la disquerina. Hay otra forma de disqueratosis congénita autosómica dominante, en este caso, esta enfermedad esta asociada con mutaciones en el ARN componente de la telomerasa (hTR) (Heiss et al., 1998). En los fibroblastos y linfoblastos derivados de los enfermos de disqueratosis congénita, la actividad telomerasa es menor y los telómeros son más cortos que los de células no afectadas por la enfermedad (Siriniavin et al., 1975; Trowbridge et al., 1977). En células de pacientes de Disqueratosis congénita ligada al cromosoma X se ha superado experimentalmente los defectos en la telomerasa expresando hTERT de forma ectópica (Mitchell et al., 1999). En la disqueratosis congénita provocada por mutaciones en hTR la única forma de recuperar la actividad telomerasa es reexpresando hTR (Fu et al., 2003).

Los telómeros están compuestos por 500-2000 repeticiones de la secuencia conservada TTAGGG en el final 3' de los cromosomas y su acortamiento con sucesivas divisiones se convierte en una limitación para la capacidad proliferativa de la célula. Los telómeros son susceptibles de sufrir daño al ADN provocado por agentes exógenos, incluido el cisplatino. Esta descrito que el cisplatino es capaz de inhibir la actividad telomerasa en distintas líneas celulares (Ishibashi et al., 1998; Burger et al., 1997). Hay varias hipótesis acerca de como se puede producir esta inhibición. Una posibilidad es la formación de aductos G-Pt-G, típicos del cisplatino, en la secuencia repetida de los telómeros TTAGGG. Alternativamente, interacciones del cisplatino con grupos sulfidrilos esenciales para la subunidad catalítica transcriptasa reversa (hTERT) e incluso podría deberse a la disminución de la expresión de hTERT (Burger et al., 1997).

Descripción

Un objeto de la presente invención lo constituye un compuesto inductor o activador de la actividad telomerasa, en adelante compuesto activador de la presente invención, basado en la secuencia de nucleótidos del fragmento GSE 24.2 de la disquerina o la secuencia proteínica o peptídica codificado por dicha secuencia de nucleótidos que es capaz de recuperar la actividad telomerasa en el interior de las células de un mamífero, preferentemente humanas.

Un objeto particular de la invención lo constituye una secuencia de nucleótidos, en adelante secuencia génica GSE 24.2 de la presente invención, que permite la expresión de una proteína o péptido inductor de la recuperación de la actividad telomerasa en el interior de las células de un mamífero, preferentemente humanas, y que está constituida por una o varias secuencias de nucleótidos GSE 24.2 pertenecientes al siguiente grupo:

Tal como se utiliza en la presente invención el término "secuencia de nucleótidos" se refiere a una secuencia de DNA, cDNA o mRNA.

Una realización particular de la presente invención lo constituye la secuencia de nucleótidos de la secuencia GSE 24.2 de a) constituida por la SEQ ID NO1.

Otra realización particular de la presente invención lo constituye la secuencia de nucleótidos de la secuencia GSE 24.2 de b) constituida por la SEQ ID NO11 ó la SEQ ID NO13, que codifican los dominios peptídicos Trub I y Trub II, respectivamente (Ejemplo 1.7).

Otro objeto particular de la presente invención lo constituye una construcción genética GSE 24.2 que comprende la secuencia de nucleótidos GSE 24.2.

Otro objeto particular de la presente invención lo constituye un vector de expresión GSE 24.2 que comprende una secuencia de nucleótidos GSE 24.2 o una construcción genética GSE 24.2, descritas en la presente invención, y que permite la expresión de una proteína o péptido capaz de recuperar la actividad telomerasa en el interior de células de mamíferos, preferentemente humanos. Un ejemplo de una realización particular lo constituye el vector expresión de la invención pLNCX 24.2 (ver ejemplo 1 y 2).

Además, otro objeto particular de la invención lo constituye una proteína o péptido, en adelante proteína GSE 24.2 de la presente invención, que presenta actividad recuperadora de telomerasa en el interior de las células de un mamífero, preferentemente humanas, y que comprende una o varias secuencias de aminoácidos pertenecientes al siguiente grupo:

Otra realización particular de la presente invención lo constituye una proteína cuya secuencia de aminoácidos de a) está constituida por la SEQ ID NO2.

Otra realización particular de la presente invención lo constituye una proteína cuya secuencia de aminoácidos de c), fragmento de está constituida por la SEQ ID NO12 ó la SEQ ID NO14.

Por otro lado, otro objeto adicional de la presente invención lo constituyen células, ya sean eucariotas - preferentemente humanas - o procariotas, en adelante células GSE 24.2 de la invención, modificadas genéticamente y que comprenden la secuencia de nucleótidos, la construcción y el vector de expresión GSE 24.2 de la invención y en donde puede expresarse de forma adecuada el péptido o proteína GSE 24.2 de la invención.

Por lo tanto, otro objeto de la invención lo constituye el uso del compuesto activador GSE 24.2 de la presente invención en la elaboración de un medicamento o composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad causada por una alteración, preferentemente una reducción, de la actividad telomerasa, perteneciente, a título ilustrativo y sin que limite el alcance de la invención, al siguiente grupo: envejecimiento o aceleración del envejecimiento, enfermedades neurodegenerativas y disqueratosis congenita.

Otro objeto de la presente invención lo constituye una composición farmacéutica o medicamento para el tratamiento de enfermedades, desórdenes o patologías que cursan con alteraciones de la actividad telomerasa, preferentemente una reducción de la actividad, en adelante composición farmacéutica de la presente invención, que comprende un compuesto ó agente capaz de recuperar la actividad telomerasa, en cantidad terapéuticamente efectiva junto con, opcionalmente, uno o más adyuvantes y/o vehículos farmacéuticamente aceptables y que es capaz de estimular la generación y mantenimiento de la actividad telomerasa.

Otro objeto particular de la presente invención lo constituye una composición farmacéutica de la invención en la que el compuesto o agente...

1. Secuencia nucleotídica que codifica la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 2, variantes o fragmentos biológicamente activos de la misma.

2. Secuencia nucleotídica según la reivindicación 1, que consiste en la SEQ ID NO: 1.

3. Secuencia nucleotídica aislada según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde la secuencia aminoacídica del fragmento biológicamente activo consiste en la SEQ ID NO: 12.

4. Secuencia nucleotídica según la reivindicación 3, que consiste en la SEQ ID NO: 11.

5. Secuencia nucleotídica según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde la secuencia aminoacídica del fragmento biológicamente activo consiste en la SEQ ID NO: 14.

6. Secuencia nucleotídica según la reivindicación 3, que consiste en la SEQ ID NO: 13.

7. Secuencia nucleotídica según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, que es una secuencia de DNA, cDNA o mRNA.

8. Péptido que consiste en la secuencia SEQ ID NO: 2, variantes o fragmentos biológicamente activos de los mismos.

9. Péptido según la reivindicación 8, donde la secuencia aminoacídica del fragmento biológicamente activo consiste en la SEQ ID NO: 12.

10. Péptido según la reivindicación 4, donde la secuencia aminoacídica del fragmento biológicamente activo consiste en la SEQ ID NO: 14.

11. Construcción genética que comprende:

12. Vector de expresión caracterizado porque comprende una secuencia nucleotídica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, o una construcción genética de acuerdo con la reivindicación 11.

13. Vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 9, caracterizado porque el vector de expresión es el plásmido pLNCX 24.2.

14. Célula procariota genéticamente modificada, caracterizada porque comprende una secuencia nucleotídica según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, la construcción genética según la reivindicación 11, o el vector de expresión según cualquiera de las reivindicaciones 12-13.

15. Célula eucariota no humana genéticamente modificada, caracterizada porque comprende la secuencia nucleotídica según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, la construcción genética según la reivindicación 11, o el vector de expresión según cualquiera de las reivindicaciones 12-13.

16. Célula eucariota humana genéticamente modificada, obtenida por métodos que no impliquen la destrucción de embriones humanos, caracterizada porque comprende la secuencia nucleotídica según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, la construcción genética según la reivindicación 11, o el vector de expresión según cualquiera de las reivindicaciones 12-13.

17. Uso de:

para la elaboración de un medicamento.

18. Uso de:

para la elaboración de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad, desorden o patología que cursa con alteraciones de la actividad telomerasa.

19. Uso según la reivindicación anterior, donde la alteración de la actividad telomerasa es una reducción de su actividad.

20. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 18-19, donde la enfermedad se selecciona del grupo que comprende: envejecimiento o aceleración del envejecimiento, enfermedades neurodegenerativas y disqueratosis congénita.

21. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 18-19, donde la enfermedad se selecciona del grupo que comprende: enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, ataxia cerebelosa y degeneración de médula espinal.

22. Uso según la reivindicación 20, donde a disqueratosis congénita es la disqueratosis congénita ligada al cromosoma X o la disqueratosis congénita autosómica dominante.

23. Composición que comprende:

o cualquiera de sus combinaciones.

24. Composición según la reivindicación anterior, que es una composición farmacéutica.

25. Uso de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 23-24 para la elaboración de un medicamento.

26. Uso de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 23-24 para el tratamiento o la prevención de una enfermedad, desorden o patología que cursa con alteraciones de la actividad telomerasa.

27. Uso de una composición según la reivindicación 26, donde la alteración de la actividad telomerasa es una reducción de su actividad.

28. Uso de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 26-27, donde la enfermedad se selecciona del grupo que comprende: envejecimiento o aceleración del envejecimiento, enfermedades neurodegenerativas, disqueratosis congénita, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, ataxia cerebelosa y degeneración de médula espinal.

29. Uso de una composición según la reivindicación 28, donde la disqueratosis congénita es la disqueratosis congénita ligada al cromosoma X o la disqueratosis congénita autosómica dominante.

30. Uso de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 25-29, donde la composición se administra en la dosis adecuada que permita la recuperación de la actividad telomerasa.