Un receptor de linfocitos T (TCR) que tiene la propiedad de unirse específicamente a VYGFVRACL-HLAA24,

que se caracteriza porque la región variable de la cadena alfa de los TCR tiene la SEC ID Nº 2 o la SEC ID Nº 19 y la región variable de la cadena beta del TCR tiene la SEC ID Nº 3

La presente invención se refiere a receptores aislados de linfocitos T (TCR) que tienen la propiedad de unirse de forma específica a VYGFVRACL-HLA-A24.

Antecedentes de la invención

El péptido VYGFVRACL deriva de la subunidad catalítica de la proteína telomerasa. (Véase Meyerson y col., (1997) Cell 90: 785-795 y Nakamura y col., (1997) Science 277: 955-9) Estos estudios describen el descubrimiento casi simultáneo del ADN y la secuencia de aminoácidos deducida de la subunidad catalítica de la telomerasa a partir de secuencias de bases de datos. Ambos estudios indican que la actividad de la subunidad catalítica de la telomerasa está asociada con el cáncer en seres humanos. Las moléculas del HLA de clase I de estas células cancerosas presentan péptidos de esta proteína, incluido el VYGFVRACL. Este péptido se presenta en el contexto de HLA-A24 (Arai y col., (2001) Blood 97 (9): 2903-2907, y Tajima y col., Int. J. Cancer (2004) 110: 403-412). Por tanto, el complejo VYGFVRACL-HLA-A24 proporciona un marcador de cáncer a los que se puede dirigir los TCR de la invención con el fin de, por ejemplo, liberar agentes citotóxicos en las células cancerosas.

Breve descripción de la invención

La presente invención pone a disposición por primera vez receptores aislados de linfocitos T (TCR) que tienen la propiedad de unirse de forma específica a VYGFVRACL-HLA-A24. Dichos TCR son útiles, solos o asociados con un agente terapéutico, para dirigirse a las células dianas que presentan dicho complejo.

Descripción detallada de la invención

La presente invención proporciona TCR aislados que tienen la propiedad de unirse específicamente a VYGFVRACLHLAA24, que se caracteriza porque la región variable de la cadena alfa de los TCR tiene la SEC ID Nº 2 o la SEC ID Nº 19 y la región variable de la cadena beta del TCR tiene la SEC ID Nº 3. Preferentemente, el péptido VYGFVRACL (SEC ID Nº 1) se presenta en el contexto de HLA-A*2402.

Los TCR que tienen la propiedad de unirse específicamente a VYGFVRACL-HLA-A24 se denomina en el presente documento TCR VYG-A24. Los TCR VYG-A24 “parentales” se definen como aquéllos que comprenden la región variable de la cadena alfa mostrada en Figura 1a (SEC ID Nº 2) y la región variable de la cadena beta mostrada en la Figura 1b (SEC ID Nº 3). Por ejemplo, una versión soluble unida por puentes disulfuro del TCR VYG-A24 consiste en la cadena alfa del TCR que se muestra en la figura 5A (SEC ID Nº 15) y la cadena beta del TCR mostrada en la Figura 5b (SEC ID Nº 16).

Una realización de la invención se proporciona mediante TCR no naturales que tienen la propiedad de unirse específicamente a VYGFVRACL-HLA-A24, que se caracteriza porque la región variable de la cadena alfa de los TCR tiene la SEC ID Nº 2 o la SEC ID Nº 19 y la región variable de la cadena beta del TCR tiene la SEC ID Nº 3. Es decir, dichos TCR de la invención consisten el las secuencias que no se encuentran en la naturaleza.

Otra realización proporciona un TCR de la invención QUE SE CARACTERIZA PORQUE dicho TCR tiene KD para dicho complejo VYGFVRACL-HLA-A*02402 de 5 μM o menor. El Ejemplo 4 del presente documento proporciona detalles del procedimiento basado en Biacore adecuado para determinar la KD para la interacción entre TCR solubles y moléculas de pMHC.

Un aspecto adicional se proporciona mediante un TCR aislado de la invención, que comprende las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) presentes en la Figura 10b (SEC ID Nº 20) y/o la Figura 3b (SEC ID Nº 12). Las CRD de estas cadenas de los TCR están subrayadas en las figuras correspondientes.

EL TC VYG-A24 parental específico para el complejo VYGFVRACL-HLA-A24 tiene la siguiente cadena alfa V y uso del gen de la cadena betaV:

Cadena alfa – TRAV22

Cadena beta: - TRBV 6.5

Los TCR VYG-A24 se pueden usar como molde a partir del cual se pueden producir otros TCR. Por tanto, la invención incluye en una realización TCR que están mutados con respecto a la región variable de la cadena α del TCR VYG-A24 parental (véase la Figura 1a y la SEC ID Nº 2) y/o la región variable de la cadena β (véase la Figura 1b y la SEC ID Nº 3) en al menos una región determinante de la complementariedad (CDR) y/o la región estructural del dominio variable de la misma. En una realización relacionada de la invención también abarca TCR que están mutados con respecto a la región variable de la cadena α del TCR VYG-A24 (véase la Figura 10a y la SEC ID Nº 19) y en al menos una región determinante de la complementariedad (CDR) y/o la región estructural del dominio variable de la misma.

También se contempla que otras regiones hipervariables en los dominios variables de los TCR de la invención, tal como las regiones hipervariables 4 (HV4), pueden estar mutadas para producir un TCR mutante de alta afinidad con conserve la propiedad de unirse específicamente a VYGFVRACL-HLA-A24.

La expresión en fagos proporciona un medio por el cual se pueden generar bibliotecas de variantes de TCR. En (Li y col., (2005) Nature Biotech 23 (3): 349-354) y el documento WO 2004/04404 se detallan procedimientos adecuados para la expresión en fagos y la posterior detección selectiva de bibliotecas de variantes de TCR, cada una de ellos con enlaces intercatenarios disulfuros no nativos.

Los TCR nativos existen en formas ºº o ºº heterodiméricas. No obstante, anteriormente se ha demostrado que los TCR recombinantes que consisten en una cadena sencilla α de TCR o β de TCR se unen a moléculas peptídicas del MHC. Además, anteriormente se ha demostrado que los TCR recombinantes que consisten en una homodímeros de ºº o ºº se unen a moléculas peptídicas del MHC. Por tanto, homodímeros ºº de TCR o ºº de TCR proporcionan otras realizaciones de la invención.

En una realización, los TCR de la invención comprende tanto una región variable de la cadena º como una región variable de la cadena º del TCR.

A menos que se indique lo contrario, en el presente documento se proporcionan las secuencias de aminoácidos del TCR, incluido un residuo de metionina (Met o M) en el extremo N. Como conocerán los expertos en la técnica, este residuo se puede eliminar durante la producción de proteínas recombinantes. Como también será obvio para los expertos en la técnica puede ser posible truncar las secuencias proporcionadas en el extremo C y/o el extremo N de las mismas, en 1, 2, 3, 4, 5 o más residuos, sin que afecte sustancialmente a las características de unión a pMHC del TCR, todas estas variantes triviales están abarcadas por la presente invención.

Como se usa en el presente documento, la expresión “TCR aislados” quiere decir TCR en un formato distinto al que se encuentra en la naturaleza, por ejemplo un TCR soluble o un TCR presentado sobre una célula que no ha sido transfeccionada de forma natural con el material genético que codifica dicho TCR.

Como se usa en el presente documento, se entiende que la expresión “región variable” abarca todos los aminoácidos de un TCR dado que no están incluidos dentro del dominio constante como están codificados en el gen TRAC para las cadenas º de TCR y bien TRBC1 o bien TRBC2 para las cadenas º de TCR. (T cell receptor Factsbook, (2001) LeFranc and LeFranc, Academic Press, ISBN 0-12-441352-8)

Realizaciones preferidas proporcionan un TCR de la invención que comprende: la región variable de la cadena alfa mostrada en la Figura 1a (SEC ID Nº 2) y la región variable de la cadena beta mostrada en la Figura 1b (SEC ID Nº 3) o variantes fenotípicamente silentes de las mismas. Por ejemplo, un TCR que comprende la secuencia de de aminoácidos de SEC ID Nº 15 (Figura 5a) y la SEC ID Nº 16 (Figura 5b). Esta cadena alfa del TCR es la de un TCR conocido específico para el complejo ILAKFLHWL-HLA-A*0201. La secuencia de ADN y de aminoácidos de esta cadena alfa de TCR se publicó por primera vez en el documento WO 2005/116075.

Otras realizaciones preferidas proporcionan un TCR de la invención que comprende:

la región variable de la cadena alfa mostrada en la Figura 10a (SEC ID Nº 19) y la región variable de la cadena beta mostrada en la Figura 1b (SEC ID Nº 3) o variantes fenotípicamente silentes de las mismas. Por ejemplo, un TCR que comprende la secuencia de de aminoácidos de SEC ID Nº 20 (Figura 10b) y la SEC ID Nº 16 (Figura 5b).

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1. Un receptor de linfocitos T (TCR) que tiene la propiedad de unirse específicamente a VYGFVRACL-HLAA24, que se caracteriza porque la región variable de la cadena alfa de los TCR tiene la SEC ID Nº 2 o la SEC ID Nº 19 y la región variable de la cadena beta del TCR tiene la SEC ID Nº 3.

2. Un receptor de linfocitos T (TCR) de acuerdo con la reivindicación 1 que tiene la propiedad de unirse específicamente al péptido VYGFVRACL derivado de la telomerasa presentado en el contexto del subtipo HLA-A*2402.

3. Un TCR de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende una cadena alfa de la SEC ID Nº 15 y una cadena beta de la SEC ID Nº: 16.

4. Un TCR de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende una cadena alfa de la SEC ID Nº 20 y una cadena beta de la SEC ID Nº: 16.

5. Un TCR de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes asociado con un agente terapéutico o un resto detectable.

6. Un TCR de acuerdo la reivindicación 5, en el que el TCR está covalentemente unido a un agente terapéutico o un resto detectable.

7. Un complejo de TCR multivalente, que comprende al menos dos TCR de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

8. Una célula presentadora de un TCR de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

9. Una célula transfeccionada para presentar un TCR como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

10. Una célula de acuerdo con la reivindicación 8 o la reivindicación 9, que es un linfocito T humano o una célula madre hematopoyética humana.

11. Un ácido nucleico o ácidos nucleicos que codifican un TCR de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a

6.

12. Una composición farmacéutica que comprende un TCR de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o un complejo de TCR multivalente de acuerdo con la reivindicación 7, o una pluralidad de células de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, o un ácido nucleico o ácidos nucleicos de acuerdo con la reivindicación 11, con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

13. El uso de un TCR de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o un complejo de TCR multivalente de acuerdo con la reivindicación 7, o una pluralidad de células de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, o un ácido nucleico o ácidos nucleicos de acuerdo con la reivindicación 11, en la preparación de una composición para el tratamiento del cáncer.